1.一種雨生紅球藻綠色細(xì)胞保藏以及蝦青素誘導(dǎo)的規(guī)?;a(chǎn)方法,其特征在于包括以下步驟:
(a)藻泥制備:將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的雨生紅球藻藻液收集于不銹鋼攪拌罐中進(jìn)行靜置沉降,去除部分上清培養(yǎng)基,得到細(xì)胞密度為10~20 g/L的濃縮藻液;將凍存液按照0.5~10:1的體積比加入到濃縮藻液中,攪拌混合均勻,再加入質(zhì)量比為0.5~20%(w/v)的脫脂乳粉,攪拌混勻后離心去除上清液,得到用于冷凍保藏的藻泥;
(b)冷凍保藏:將制備好的藻泥迅速置于4℃預(yù)冷4~12小時(shí),然后轉(zhuǎn)入到-5~-20℃冷凍保藏,保藏周期30~100天;
(c)細(xì)胞活化:將冷凍保藏的藻泥置于20℃水浴融化,然后利用0.1~1.0%(w/v)的氯化鈉溶液,結(jié)合離心、沉降或過(guò)濾等方法洗脫凍存劑。
2.將清洗后的藻細(xì)胞按照0.2~0.8 g/L的濃度接種到低氮BG11培養(yǎng)基,在弱光條件下通氣培養(yǎng),其中光強(qiáng)為10~50 μmol m-2 s-1,溫度為15~25℃,活化時(shí)間為2~4天;
(d)蝦青素誘導(dǎo):藻細(xì)胞完成活化培養(yǎng)后,培養(yǎng)基中的氮基本消耗完畢,此時(shí)加入濃度為10~100 mM的碳源,并將藻液置于室外光生物反應(yīng)器中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)以積累蝦青素,培養(yǎng)周期為5~10天。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種雨生紅球藻綠色細(xì)胞保藏以及蝦青素誘導(dǎo)的規(guī)模化生產(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(a)中的凍存液為濃度1~20%(v/v)的DMSO或甘油,使用前需要4℃預(yù)冷。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種雨生紅球藻綠色細(xì)胞保藏以及蝦青素誘導(dǎo)的規(guī)?;a(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(a)中的攪拌、離心操作需要在4℃進(jìn)行
按照權(quán)利要求1所述的一種雨生紅球藻綠色細(xì)胞保藏以及蝦青素誘導(dǎo)的規(guī)?;a(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(a)中的藻泥的含水率為70~90%(w/w)。
5.按照權(quán)利要求1所述的一種雨生紅球藻綠色細(xì)胞保藏以及蝦青素誘導(dǎo)的規(guī)?;a(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(c)中的低氮BG11培養(yǎng)基氮源為硝酸鹽,濃度為0.5~2 mM。
6.按照權(quán)利要求1所述的一種雨生紅球藻綠色細(xì)胞保藏以及蝦青素誘導(dǎo)的規(guī)?;a(chǎn)方法,其特征在于:所述步驟(d)中的碳源包括碳酸氫鹽、碳酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、乙醇中一種或多種。