1.用于檢測(cè)GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018基因型的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒包括引物對(duì)和PCR檢測(cè)反應(yīng)試劑;其中,所述引物對(duì)為(1)或(2)中的一種:
(1)上游引物:GATA4-F 5'- CACCGCCCTGCATCCCTAAT-3'
下游引物:GATA4-R 5'- GGTGGGTTAAGTGCCCCTG-3';
(2)與(1)中的互補(bǔ)序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述PCR檢測(cè)反應(yīng)試劑包括含EvaGreen 的Green-2-Go qPCRMastermix。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于:所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)體系為:
Green-2-Go qPCRMastermix(含EvaGreen) 5μl
引物F(10μM) 0.1μl
引物R(10μM) 0.1μl
模板(50ng/μl) 0.5μl
ddH2O 4.3μl
總體積 10μl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)品,所述標(biāo)準(zhǔn)品為重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒,所述重組陰性質(zhì)粒的核苷酸序列為序列表SEQ ID No.1,所述重組陽(yáng)性質(zhì)粒的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.2。
5.一種檢測(cè)GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018基因型的方法,其特征在于:步驟如下:
(1)構(gòu)建重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒:所述重組陰性質(zhì)粒的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.1,所述重組陽(yáng)性質(zhì)粒的核苷酸序列參見(jiàn)序列表中SEQ ID No.2;
(2)構(gòu)建PCR擴(kuò)增時(shí)的引物對(duì),所述引物對(duì)為a或b中的一種:
a、上游引物:GATA4-F 5'- CACCGCCCTGCATCCCTAAT-3'
下游引物:GATA4-R 5'- GGTGGGTTAAGTGCCCCTG-3';
b、與a中的互補(bǔ)序列;
(3)提取待測(cè)樣本的外周血基因組DNA,對(duì)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒和待測(cè)樣本的DNA均使用步驟(2)所述引物,且在同一條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增和HRM分析,收集數(shù)據(jù);
作為優(yōu)選,所述HRM分析的條件為:94℃ 90s;60℃ 30s;83-94℃收集數(shù)據(jù),溫度上升速率為0.06℃/s;
(4)根據(jù)收集數(shù)據(jù)繪制高分辨率熔解曲線,根據(jù)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線判斷待測(cè)樣本GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型:
與重組陰性質(zhì)粒的熔解曲線重合則GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型為TT;
與重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線重合則GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型為CC;
在重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒之間的則GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型為TC。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于:所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)體系為:
Green-2-Go qPCRMastermix(含EvaGreen) 5μl
引物F(10μM) 0.1μl
引物R(10μM) 0.1μl
模板(50ng/μl) 0.5μl
ddH2O 4.3μl
總體積 10μl。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于:所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性3min;94℃變性10s;60℃退火/延伸20s;40個(gè)循環(huán)。
8.權(quán)利要求1-4任一所述的試劑盒的使用方法,其特征在于:步驟如下:
(1)提取待測(cè)樣本的外周血基因組DNA,對(duì)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒和待測(cè)樣本的DNA均使用相同引物,且在同一條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增和HRM分析,收集數(shù)據(jù);
所述HRM分析的條件為:94℃ 90s;60℃ 30s;83-94℃收集數(shù)據(jù),溫度上升速率為0.06℃/s;
(2)根據(jù)收集數(shù)據(jù)繪制高分辨率熔解曲線,根據(jù)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線判斷待測(cè)樣本GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型:
與重組陰性質(zhì)粒的熔解曲線重合則GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型為TT;
與重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線重合則GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型為CC;
在重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒之間的則GATA4基因SNP位點(diǎn)rs904018的基因型為TC。
9.權(quán)利要求1-4任一所述的試劑盒在制備輔助診斷室間隔缺損型心臟病的試劑中的應(yīng)用。