本發(fā)明屬于藥酒制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種增加乙醛脫氫酶活性的保健酒及制備方法。
背景技術(shù)：
：攝入人體內(nèi)的酒精在乙醇脫氫酶作用下產(chǎn)生的乙醛，而乙醛對(duì)人體是有害的。最近發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)積累的乙醛可促進(jìn)組織細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，可干擾線粒體呼吸鏈的代謝，導(dǎo)致供氧不足，使鈣調(diào)節(jié)紊亂和蛋白質(zhì)合成減少等。因此，乙醛是飲酒損傷機(jī)體的重要因素。眾所周知，東方人(如中國(guó)人、日本人和越南人)體內(nèi)的乙醛脫氫酶含量較西方人低。飲酒易引起乙醛在體內(nèi)積聚，釋放出胺類物質(zhì),會(huì)產(chǎn)生臉紅、頭痛、頭暈、嗜睡、嘔吐和心動(dòng)過(guò)速等不良反應(yīng)。體內(nèi)乙醛主要在肝臟內(nèi)在乙醛脫氫酶(acetaldehyde，ALDH)的作用下氧化為乙酸，乙酸可被徹底地氧化為CO2和H2O。ALDH有19種同工酶，其中ALDH2最為重要。有學(xué)者報(bào)道，白酒或酒精在很低濃度下就能明顯抑制乙醛脫氫酶的活性。過(guò)量飲酒會(huì)增加高血壓，導(dǎo)致腦卒中發(fā)生，所以過(guò)量飲酒甚至酗酒肯定是百害而無(wú)一益?，F(xiàn)有研究也表明，傳統(tǒng)白酒一般情況下會(huì)抑制體內(nèi)乙醛脫氫酶的活性，導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)出現(xiàn)損傷。乙醛脫氫酶的活性增高被認(rèn)為是一種內(nèi)源性心腦血管的保護(hù)因子，對(duì)人體有益。因此，如能配置出激活人體乙醛脫氫酶活性的保健酒，并使其在治病強(qiáng)身的同時(shí)減輕飲酒對(duì)人體的損傷，這對(duì)藥酒健康地發(fā)展具有重大意義。現(xiàn)有市場(chǎng)中有種類繁多的藥蛇酒，大量文獻(xiàn)報(bào)道蛇、酒、藥三者合一可加強(qiáng)蛇酒本身具有祛濕散寒、益氣活血、滋補(bǔ)強(qiáng)身的功效。蛇酒具有“通血脈、散濕氣、行藥勢(shì)、殺百邪惡毒氣、除風(fēng)下氣、開(kāi)胃下食、溫腸胃、御風(fēng)寒和止腰膝疼痛”等藥效，對(duì)人體具有多種保護(hù)功能。目前有關(guān)藥蛇酒的制作，一般都是依靠傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)，缺乏科學(xué)地分析和測(cè)試，沒(méi)有對(duì)其藥理、毒性做詳細(xì)系統(tǒng)地分析與研究。因此有必要對(duì)此進(jìn)行進(jìn)一步的研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有酒精抑制體內(nèi)乙醛脫氫酶活性的不足，提供一種保健酒及制備方法，其能顯著提高體內(nèi)乙醛脫氫酶的活性，減少酒精對(duì)人體的副作用；同時(shí)對(duì)保健酒進(jìn)行科學(xué)地評(píng)價(jià)分析，促進(jìn)保健酒行業(yè)健康地發(fā)展。本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種增加乙醛脫氫酶活性的組合物，所述組合物包括蛇肉、葡萄籽提取物、姜黃提取物。作為對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述組合物中各成分的重量份數(shù)分別為：蛇肉20～70份、葡萄籽提取物20～50份、姜黃提取物20～50份；組合物最優(yōu)配方為蛇肉50份、葡萄籽提取物30份、姜黃提取物30份。作為對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述組合物還包括葛根、甘草、山藥、黨參、維生素和氨基酸中至少一種。作為對(duì)上述技術(shù)方案的更進(jìn)一步改進(jìn)，所述組合物還包括葛根2～10份、甘草2～10份、山藥2～5份、黨參2～5份。作為對(duì)上述技術(shù)方案的更進(jìn)一步改進(jìn)，所述維生素為維生素D3，且所述維生素D3在所述組合物中的重量份數(shù)含量為2～5份。本發(fā)明還提供一種含有所述增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健品或藥品。另外，本發(fā)明還提供一種含有所述增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒。作為對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述保健酒還包含酒液，且所述酒液與蛇肉、葡萄籽提取物和姜黃提取物重量份數(shù)比為500～5000：20～70：20～50：20～50。作為對(duì)上述技術(shù)方案的更進(jìn)一步改進(jìn)，所述酒液的度數(shù)為25％～60％，所述蛇肉來(lái)源于蝮蛇、五步蛇和眼鏡蛇的至少一種。最后，本發(fā)明還提供一種保健酒的制備方法，其包含以下步驟：a)將所述組合物中所含除葡萄籽提取物和姜黃提取物以外的其余成分洗凈并粉碎；b)將步驟a)中粉碎后的各成分與葡萄籽提取物、姜黃提取物放入提取桶中，用酒液浸泡1～4個(gè)月；c)浸泡完成后，于24小時(shí)內(nèi)收集提取桶中的提取液，將提取液混勻，再存放40～45天；d)對(duì)存放后的提取液進(jìn)行過(guò)濾、灌裝，即得保健酒。葡萄籽提取物主要為從葡萄籽中提取的多酚混合物，其中活性最強(qiáng)的是低聚原花青素，是一種人體內(nèi)不能合成的新型高效天然抗氧化劑物質(zhì)。本發(fā)明所述葡萄籽提取物可直接購(gòu)于市場(chǎng)或采用現(xiàn)有技術(shù)常用方法從葡萄籽提取得到，現(xiàn)有技術(shù)中從葡萄籽中提取得到葡萄籽提取物的方法包括但不限于：將粉碎的葡萄籽中加入數(shù)倍提取劑，回流提取一段時(shí)間后獲得暗棕色粗品，再經(jīng)過(guò)純化、100目濾網(wǎng)過(guò)濾，獲得葡萄籽提取物。葡萄籽提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，理化性質(zhì)具體如下：葡萄籽提取物的色澤呈紅棕色，味道為澀味，水中不容物重量分?jǐn)?shù)≤5％，干燥后失重的重量分?jǐn)?shù)≤5％，熾灼殘?jiān)闹亓糠謹(jǐn)?shù)<2％，重金屬的含量<10ppm，農(nóng)藥殘留量<2ppm?？偧?xì)菌量<1000cfu/gm，霉菌和酵母菌的量均<100cfu/gm，未檢測(cè)到大腸桿菌和沙門(mén)式菌。姜黃(CurcumalongaL.)可用于治療血閼氣滯、胸脅刺痛、經(jīng)閉腹痛、跌打腫痛、風(fēng)濕疼痛。姜黃提取物以姜黃干燥的根莖為原料，其含有揮發(fā)油、姜黃素、甲氧基姜黃素、雙脫甲氧基姜黃素和二氫姜黃素等，油中主要成分為姜黃酮、芳姜黃酮和姜烯等。本發(fā)明所述姜黃提取物可直接購(gòu)于市場(chǎng)或采用現(xiàn)有技術(shù)常用方法從姜黃提取得到，現(xiàn)有技術(shù)中從姜黃中提取得姜黃提取物的方法包括但不限于：將粉碎的姜黃用堿液提取，分離出纖維素、淀粉等成分；堿性提取液用酸沉淀；再進(jìn)行80目濾網(wǎng)過(guò)濾，干燥后獲得姜黃提取物。姜黃提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，理化性質(zhì)具體如下：姜黃提取物為棕色的粉末狀，具有特殊氣味，干燥后失重的重量分?jǐn)?shù)≤5％，灰分的重量分?jǐn)?shù)<5％，重金屬的含量<10ppm，農(nóng)藥殘留量<2ppm。總細(xì)菌量<1000cfu/gm，霉菌和酵母菌的量均<100cfu/gm，未檢測(cè)到大腸桿菌和沙門(mén)式菌。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明用酒液浸泡蛇肉、葡萄籽提取物和姜黃提取物等成分制備保健酒，該保健酒被科學(xué)地證實(shí)能顯著提高體內(nèi)乙醛脫氫酶的活性，減少酒精對(duì)人體的副作用。附圖說(shuō)明圖1為不同濃度的保健酒對(duì)人肝細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響(圖中白色亮點(diǎn)表示為發(fā)生氧化應(yīng)激的肝細(xì)胞)。具體實(shí)施方式為更好地說(shuō)明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)，下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。1.保健酒的制備實(shí)施例1本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉20份、葡萄籽提取物20份、姜黃提取物20份、白酒500份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法為：a)將所述組合物中所含除葡萄籽提取物和姜黃提取物以外的其余成分洗凈并粉碎；b)將步驟a)中粉碎后的各成分與葡萄籽提取物、姜黃提取物放入提取桶中，用酒液浸泡1～4個(gè)月；c)浸泡完成后，于24小時(shí)內(nèi)收集提取桶中的提取液，將提取液混勻，再存放40～45天；d)對(duì)存放后的提取液進(jìn)行過(guò)濾、灌裝，即得保健酒。實(shí)施例2本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉50份、葡萄籽提取物30份、姜黃提取物30份、白酒1000份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例3本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉70份、葡萄籽提取物50份、姜黃提取物50份、白酒5000份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例4本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉40份、葡萄籽提取物35份、姜黃提取物30份、葛根2份、白酒2000份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例5本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉45份、葡萄籽提取物50份、姜黃提取物30份、葛根5份、白酒2500份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例6本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉60份、葡萄籽提取物35份、姜黃提取物25份、葛根10份、白酒3000份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例7本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉20份、葡萄籽提取物20份、姜黃提取物20份、葛根4份、維生素D3為2份、白酒3500份(酒精度為25％或45％或60％)。實(shí)施例8本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉60份、葡萄籽提取物40份、姜黃提取物45份、葛根6份、維生素D3為3份、白酒4000份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例9本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉70份、葡萄籽提取物50份、姜黃提取物50份、葛根8份、維生素D3為5份、白酒4500份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例10本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉20份、葡萄籽提取物20份、姜黃提取物20份、葛根2份、甘草2份、山藥2份、黨參2份、白酒500份(酒精度為25％或45％或60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例11本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉50份、葡萄籽提取物30份、姜黃提取物30份、葛根5份、甘草5份、山藥5份和黨參5份和白酒1000份(酒精度為25％、45％和60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。實(shí)施例12本發(fā)明含有增加乙醛脫氫酶活性的組合物的保健酒的另一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述保健酒包含以下重量份的原料：蛇肉70份、葡萄籽提取物50份、姜黃提取物50份、葛根10份、甘草10份、山藥3份和黨參4份和白酒5000份(酒精度為25％、45％和60％)。本實(shí)施例所述保健酒的制備方法可參照實(shí)施例1。上述所述保健酒的配方見(jiàn)表1，實(shí)施例11為最優(yōu)配方。表1為保健酒的成分及重量份數(shù)(份)2.保健酒的指標(biāo)參數(shù)檢測(cè)實(shí)施例13分別量取實(shí)施例1～12中所制備得到的保健酒30ml，均加入50ml的清潔干燥無(wú)色玻璃杯中，對(duì)保健酒各種指標(biāo)參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，參數(shù)指標(biāo)均如下：色澤為微黃色且均勻，含量微量的懸浮物或沉淀，甲醛含量(g/100ml)<0.02％，總糖含量(以葡萄糖計(jì)算，g/l)<100，鉛、錳、砷及總酸的含量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)?？偧?xì)菌量<1000cfu/gm，霉菌和酵母菌的量均<100cfu/gm，未檢測(cè)到大腸桿菌和沙門(mén)式菌。3.保健酒對(duì)小鼠肝細(xì)胞ALDH2活性的影響實(shí)施例14工作原理：乙醇代謝產(chǎn)生乙醛，在7-羥基-3-(4-羥苯基)-異黃酮-7-糖苷(Daidzin)存在與否的情況下，由乙醛脫氫酶2的催化作用，轉(zhuǎn)化為乙酸產(chǎn)物后，通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)轉(zhuǎn)化為還原型NADH后峰值的增高，即采用比色法來(lái)定量測(cè)定裂解樣品中ALDH2的特異性酶活性。試驗(yàn)方法試驗(yàn)動(dòng)物：雄性清潔級(jí)成年昆明種小鼠，體重18～22g，均購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。劑量選擇和配制：小鼠采用灌胃注射方式，每天灌胃一次，連續(xù)3天后測(cè)定肝組織ALDH2活性。分組：對(duì)照組(6.5ml蒸餾水/20g)，45％白酒組-紅高粱酒(0.65ml/20g，用蒸餾水補(bǔ)充至6.5ml)，低劑量保健酒、中劑量保健酒和高劑量保健酒(分別為0.65、1.9、6.5ml/20g；注射量不足6.5ml，用蒸餾水補(bǔ)充)；每組取10只小鼠，每只小鼠每天灌胃一次，連續(xù)灌胃3天，最后一次灌胃24小時(shí)后，取小鼠肝組織，用ALDH2試劑盒測(cè)定肝組織ALDH2活性。保健酒處理后的小鼠肝細(xì)胞ALDH2活性(U/L)見(jiàn)表2，所采用的保健酒為實(shí)施例1～12，且實(shí)施例1～12所用浸泡的白酒均為45％紅高粱酒。肝細(xì)胞ALDH2活性測(cè)定：將肝組織剪碎，剪碎后放入液氮中速凍過(guò)夜。次日，從液氮中取出，即刻用液氮碾磨成粉末狀(組織未凍融)。按10mg組織加入乙醛脫氫酶2活性檢測(cè)試劑盒中裂解液10μl的比例加入裂解液，充分混勻，放進(jìn)冰槽里孵育30min，期間每10min強(qiáng)力渦旋震蕩30s。4℃、12000rpm離心10min，取上清。ALDH2酶活性(μmol/min/mg)為：[(樣品讀數(shù)－背景讀數(shù))×樣品稀釋倍數(shù)×0.25(ml，測(cè)定容量×1000]÷[0.005(樣品容量，ml)×6.22(毫摩爾吸光系數(shù))×0.6(cm)×5(min)]÷(樣品蛋白濃度)。表2為保健酒對(duì)小鼠肝細(xì)胞ALDH2活性的影響實(shí)施例對(duì)照組紅高粱酒低劑量保健酒中劑量保健酒高劑量保健酒167.944.949.570.369.1267.944.950.371.569.0367.944.950.172.068.9467.944.951.575.272.4567.944.952.076.373.7667.944.952.176.273.5767.944.958.389.176.1867.944.958.889.576.0967.944.959.291.078.31067.944.962.496.185.81167.944.963.2100.089.31267.944.962.697.886.2從表2，可以得出紅高粱酒降低小鼠肝細(xì)胞的ALDH2活性，保健酒組相對(duì)于紅高粱組具有提高小鼠肝細(xì)胞的ALDH2活性；中劑量保健酒組和高劑量保健酒組小鼠肝細(xì)胞的ALDH2活性高于對(duì)照組，且前者小鼠肝細(xì)胞的ALDH2活性高于后者；實(shí)施例11(配方為蛇肉50份、葡萄籽提取物30份、姜黃提取物30份、葛根5份、甘草5份、山藥5份和黨參5份和白酒1000份)處理后的小鼠ALDH2活性高于同濃度下的其他實(shí)施例，為最優(yōu)配方。4.保健酒對(duì)人肝細(xì)胞(L-02)ALDH2活性的影響實(shí)施例15人肝細(xì)胞株由中科院上海實(shí)驗(yàn)細(xì)胞中心提供，人肝細(xì)胞L-02細(xì)胞接種在含10％胎牛血清的正常培養(yǎng)基內(nèi)，于濕度為95％、5％CO2、37℃條件下培養(yǎng)至細(xì)胞融合為80％。向培養(yǎng)基內(nèi)加入中劑量濃度為0.1％保健酒，孵育24小時(shí)。以濃度為0作為對(duì)照組，并測(cè)定濃度為0.1％紅高粱酒組時(shí)人肝細(xì)胞ALDH2活性，每組5次重復(fù)。保健酒處理后的人肝細(xì)胞ALDH2(U/L)活性見(jiàn)表3，所采用的保健酒為實(shí)施例1～12，且實(shí)施例1～12所用浸泡的白酒均為45％紅高粱酒。表3保健酒對(duì)人肝細(xì)胞ALDH2活性的影響從表3，可以得出用中劑量濃度的保健酒處理后的人肝細(xì)胞ALDH2活性高于紅高粱酒組和對(duì)照組；且實(shí)施例11處理后的人肝細(xì)胞ALDH2活性最高，為最優(yōu)配方。5.不同濃度保健酒對(duì)人肝細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響實(shí)施例16活性氧檢測(cè)主要利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測(cè)。DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞樣本收集：吸取細(xì)胞培養(yǎng)液，備用。用胰酶消化細(xì)胞，并收集至備用的細(xì)胞培養(yǎng)液中。2000rpm4℃離心5min，收集細(xì)胞，小心吸除上清，同時(shí)確保盡量無(wú)細(xì)胞被吸除，PBS洗滌一次。保健酒對(duì)肝細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響見(jiàn)圖1。將圖1結(jié)合表2和表3，可以更加直觀地發(fā)現(xiàn)保健酒對(duì)ALDH2活性的影響與傳統(tǒng)白酒不同，肝氧化應(yīng)激受損是酒精所致的重要損傷，ALDH2的活性與肝細(xì)胞受損呈負(fù)相關(guān)。故激活A(yù)LDH2活性可明顯減少酒精對(duì)人體肝臟的損傷，對(duì)指導(dǎo)人體飲用保健酒具有重要意義。6.保健酒對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者病情的影響實(shí)施例17在12例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者采用藥酒治療，每次服用本發(fā)明所述保健酒5ml，每天2次，治療半年后評(píng)價(jià)其療效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該保健酒明顯改善患者類風(fēng)濕癥狀，見(jiàn)表4。表4為保健酒對(duì)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者病情的影響項(xiàng)目治療前治療后晨僵時(shí)間/min124.542.9關(guān)節(jié)疼痛數(shù)/個(gè)22.113.3關(guān)節(jié)腫脹數(shù)/個(gè)16.74.3關(guān)節(jié)壓痛數(shù)/個(gè)42.511.8從表4中，可以看出保健酒明顯有緩解類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者病情。綜合上述，本發(fā)明所述的評(píng)價(jià)機(jī)制不拘于以往國(guó)內(nèi)研究的試驗(yàn)，而是在傳統(tǒng)白酒一般抑制乙醛脫氫酶活性的基礎(chǔ)上，測(cè)定不同劑量保健酒對(duì)醛脫氫酶的影響，結(jié)果得到對(duì)醛脫氫酶活性增高的保健酒配方。最后所應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅保健用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者同等替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3