本發(fā)明屬于拮抗劑及其制備和應用領域，特別涉及一種6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物及其制備和應用。

背景技術：

1970年Marshall等人合成了第一個血管緊張素II(Angiotensin Ⅱ，A Ⅱ)受體拮抗劑--肽類化合物沙拉新(Saralasin:Sarl-Ala8-Ang Ⅱ)，它與血管緊張素II的結(jié)構十分相似，其對離體組織有專屬性拮抗作用。但在臨床實際應用中，由于口服無效、代謝不穩(wěn)定且會使部分A Ⅱ產(chǎn)生激動作用而受到限制。1982年，日本武田制藥公司在研究咪唑乙酸類化合物的利尿降壓作用時，發(fā)現(xiàn)S-8307能夠抑制A Ⅱ誘發(fā)的兔動脈收縮和升壓效應，雖然活性較弱，但屬于A Ⅱ受體專一性拮抗劑，且沒有沙拉新的激動效應。80年代末期，Dupont公司(Med.Rev.1992,12:149-158)和Smithkline Beecham公司(Drugs of the fixture.1992,17:575-593)的研究人員，將A Ⅱ的C－末端區(qū)域與S-8307排列比較，對S-8307進行了系列的結(jié)構修飾，結(jié)果分別得到了兩種不同結(jié)構類型的、都具有較高活性的化合物Dup-753(Losartan，氯沙坦)和SK&F-108566(Eprosartan，伊普沙坦)，氯沙坦于1994年在瑞典上市(Drugs of the Future.1997,22:1079-1085)。伊普沙坦于1997年在德國上市(Drugs of the future.1996,21(8):794-798)。

非肽類A Ⅱ受體拮抗劑以其與A Ⅱ受體親和力強、選擇性高、口服有效、作用時間長等優(yōu)點而被看好，是一類很有前途的降壓藥。目前上市的非肽類A Ⅱ受體拮抗劑有纈沙坦、氯沙坦、伊普沙坦、伊貝沙坦、替米沙坦等。

氯沙坦(Losartan)于1994年在瑞典上市，成為第一個用于臨床的ARB類藥物。對氯沙坦的構效關系的研究表明：在芐基對位引入1個額外的苯環(huán)，構成聯(lián)苯結(jié)構，生物活性提高；引人的苯環(huán)鄰位有一酸性官能團，酸性越強親和力越大，例如：-CN、-COOMe、CF₃、-CONH₂等均能達到和羧酸相同的親和力，四氮唑不僅如此，而且4個氮原子能容納負電荷分布與受體上正電荷中心相互作用，效果更好；末端苯環(huán)上的酸性取代基位置十分重要，2’、6’雙取代使聯(lián)苯不在同一平面并且使旋轉(zhuǎn)障礙增加，會導致親合力下降一個數(shù)量級；咪唑環(huán)的2位取代基為長度3～4個碳原子的親脂性側(cè)鏈，如正烷烴；而支鏈烷烴、環(huán)烷烴和芳香取代基均降低親合力；咪唑環(huán)4位最好是1個親脂性的大功能團或基團；咪唑環(huán)5位取代基為能形成氫鍵的小基團，如醇、醛、酸等。

氯沙坦的發(fā)現(xiàn)為Ang Ⅱ受體拮抗劑的研究提供了分子模型，揭示了該類化合物的3大部分結(jié)構：咪唑環(huán)結(jié)構、4-亞甲基-1,1’-聯(lián)苯結(jié)構、四氮唑結(jié)構。近年來許多國家都以此為模板，進行結(jié)構修飾和改造，得到更多良好的AT₁受體拮抗劑。

血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑大多是對氯沙坦結(jié)構的改造，如Candesartan(J.Med.Chem.1993,36，15:2182-2195)，Pomisartan(中國藥科大學學報,2005,36，2:99-101)、TAK-536(J.Med.Chem.1996,39，26:5228-5235)是將氯沙坦的咪唑結(jié)構用苯并咪唑結(jié)構代替。對苯并咪唑類化合物的研究，主要集中在對苯并咪唑6位(Pomisartan、Telmisartan等)和7位(如Candesartan等)的修飾。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物及其制備和應用，本發(fā)明制備方便，并得到具有更佳AT₁受體拮抗效果的新藥，本發(fā)明在苯并咪唑的6位上引入苯并惡唑以及吡啶并惡唑基團，再用5-取代吲哚代替沙坦類藥物的聯(lián)苯結(jié)構中的苯基，并通過增減苯并咪唑2位上碳鏈的長度來尋找最優(yōu)鍵長，設計合成了一類新的6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物。

本發(fā)明的一種6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物，結(jié)構式為：

R₁為乙基、正丙基、正丁基；X為C或N；Y為C或N；

其中，當X為C時，R₃為H、甲基；當X為N時，R₃為無取代；

當Y為C時，R₂為H、甲基，當Y為N時，R₂為無取代。

所述6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物為：

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(苯并[d]噁唑-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ia)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(苯并[d]噁唑-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ib)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(苯并[d]噁唑-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ic)；

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(4-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Id)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(4-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ie)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(4-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物If)；

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(7-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ig)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(7-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ih)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(7-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ii)；

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(4,7-二甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ij)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(4,7-二甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ik)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(4,7-二甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Il)；

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Im)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物In)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Io)；

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(7-甲基噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ip)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(7-甲基噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Iq)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(7-甲基噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ir)；

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Is)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物It)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Iu)；

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(7-甲基噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Iv)；

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(7-甲基噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Iw)；

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(7-甲基噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ix)。

本發(fā)明的一種6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物的制備方法，包括：

(1)苯并咪唑-6-羧酸化合物與鄰氨基芳環(huán)酚化合物發(fā)生縮合反應而得到6-取代苯并咪唑化合物；其中苯并咪唑-6-羧酸化合物為鄰氨基芳環(huán)酚化合物為6-取代苯并咪唑化合物為

(2)6-取代苯并咪唑化合物在堿性條件下與化合物在有機溶劑中發(fā)生反應，反應完全后，補加堿溶液，水解，后處理得到6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物。

步驟(1)中所用有機溶劑為多聚磷酸溶液。

所述步驟(1)中縮合反應為130–160℃，反應時間10-15小時。

所述步驟(2)中堿性條件中的堿為：碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸鋰、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、三乙胺、二異丙基乙胺、吡啶、醋酸鈉、醋酸鉀、磷酸鉀、磷酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、鈉氫、甲醇鉀、甲醇鈉、乙醇鉀、乙醇鈉、正丙醇鉀、正丙醇鈉、異丙醇鉀、異丙醇鈉、叔丁醇鉀、叔丁醇鈉中的一種或幾種；有機溶劑為1,4-二氧六環(huán)、四氫呋喃、甲苯、二甲苯、正己烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、六甲基磷酰三胺、四氯化碳、丙酮、苯、氯苯、2-甲基四氫呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、乙醚、甲基叔丁基醚、乙二醇二甲醚、乙二醇二正丁醚中的一種或幾種。

所述步驟(2)中補加堿溶液為：0.1-10M的氫氧化鈉溶液、0.1-10M的氫氧化鋰溶液、0.1-10M的氫氧化鉀溶液中的一種或幾種。

所述步驟(2)中在有機溶劑中的反應溫度為10-100℃，反應時間為2-8h，水解反應的溫度為10-100℃，反應時間為2-10h。

所述步驟(2)后處理為：反應結(jié)束后，向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取2-4次，合并有機相，后用飽和食鹽水洗滌2-4次，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后減壓濃縮，將濃縮物重結(jié)晶。

本發(fā)明的一種6’-取代苯并咪唑-5-取代甲基吲哚衍生物的應用，6’-取代苯并咪唑-本發(fā)明的制備方程式為：

其中，化合物II、III的摩爾比為1:0.8-1:2，IV、V的摩爾比為1:0.8-1:2。

有益效果

本發(fā)明中5-取代甲基吲哚衍生物在制備預防和治療高血壓、冠心病、心腦腎血管疾病、偏頭痛、肺動脈高壓疾病藥物中的應用。

本發(fā)明的化合物是一種新型血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，可用于預防和治療高血壓、心腦腎血管疾病、肺動脈高壓等疾病。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。

實施例1

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(苯并[d]噁唑-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ib)的制備方法：

步驟1：4-甲基-2-丙基-6-(4-苯并噁唑-2-基)苯并咪唑IVb的合成：

將化合物IIc(534mg,2.45mmol)慢慢加入到已加熱至80℃的多聚磷酸(15mL)中，攪拌并加熱至150℃。將化合物IIIb(320mg,2.94mmol)分多次緩慢加入前者的多聚磷酸溶液中，加入完全后，于150℃下攪拌反應12h。待反應完畢后，將反應液倒入100mL的冰水中，并用濃氨水調(diào)節(jié)pH至8-10，會有大量沉淀出現(xiàn)，過濾，濾餅用5％的乙醇溶液洗滌三次。待濾餅干燥后，對所得濾餅柱層析純化，得淡黃色固體化合物IVb約357mg(產(chǎn)率為58.7％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.29(s,1H),8.02(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(t,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝7.5Hz,1H),2.95(t,J＝7.7Hz,2H),2.67(s,6H),1.94–1.84(m,2H),1.00(t,J＝7.4Hz,3H).MS(ESI)m/z:306.2[M+H]+。

步驟2：2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(苯并[d]噁唑-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ib)的合成：

將2-正丙基-4-甲基-6-(苯并噁唑-2-基)苯并咪唑(化合物IVb,349mg，1.20mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，后加入鈉氫(86.4mg，3.6mmol)于室溫下攪拌30min。緩慢滴加含N-鄰甲氧羰基苯基-5-氯甲基吲哚(化合物V，395mg，1.32mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)中。滴加完畢后，混合液于室溫下繼續(xù)攪拌反應約2h，TLC監(jiān)測至反應完全。補加2M的氫氧化鈉溶液2mL，于室溫下攪拌反應約2h。待反應完全后，用2M稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5-6，向反應液中加入200mL二氯甲烷和200mL水，取有機相。用二氯甲烷(150mL×3)萃取水相三次，合并有機相。用飽和食鹽水(300mL×4)洗滌有機相四次。無水硫酸鎂干燥有機相，過濾，將濾液減壓濃縮，得到黃褐色固體。將該固體重結(jié)晶得到灰白色固體Ib約379mg(產(chǎn)率為58.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.89(s,1H),8.14(s,1H),7.93(m,2H),7.74-7.70(m,3H),7.66-7.45(m,3H),7.44-7.32(m,2H),7.05-6.98(m,2H),6.75(s,1H),6.33(d,J＝6.3Hz,1H),5.95(s,2H),2.88(t,J＝7.5Hz,2H),2.68(s,3H),1.85-1.71(m,2H),0.96(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.73,163.88,158.18,150.64,145.04,142.21,137.60,137.19,135.89,132.79,131.17,131.04,130.56,129.49,128.88,128.83,128.43,126.45,125.42,125.15,122.48,121.53,120.09,119.81,116.57,111.13,109.83,107.96,101.13,45.24,29.27,20.93,16.90,14.28.MS(ESI)m/z:541.2[M+H]⁺。

實施例2

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(苯并[d]噁唑-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ia)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為57.6％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.84(s,1H),8.20(s,1H),7.91(d,J＝5.6Hz,2H),7.78-7.73(m,2H),7.70(d,J＝7.6Hz,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,1H),7.49(d,J＝7.9Hz,1H),7.43(d,J＝3.2Hz,1H),7.42-7.35(m,2H),7.30(s,1H),7.08(d,J＝8.3Hz,1H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),6.59(d,J＝3.0Hz,1H),5.70(s,2H),2.97(q,J＝7.4Hz,2H),2.66(s,3H),1.35(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.11,163.47,158.49,150.20,144.56,141.79,137.32,136.05,135.34,132.61,130.66,130.46,128.98,128.57,128.37,128.27,127.93,124.98,124.71,121.02,121.00,120.58,119.64,119.38,118.06,110.69,110.28,107.54,102.78,46.46,20.43,16.45,11.66.MS(ESI)m/z:527.2[M+H]⁺。

實施例3

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(苯并[d]噁唑-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ic)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為58.7％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.97(s,1H),8.18(s,1H),7.90(s,1H),7.86(d,J＝7.6Hz,1H),7.80-7.71(m,2H),7.66(m,1H),7.53(m,1H),7.44(m,2H),7.42-7.33(m,2H),7.28(s,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),6.97(d,J＝8.6Hz,1H),6.56(d,J＝3.2Hz,1H),5.70(s,2H),2.94(t,2H),2.65(s,3H),1.82-1.68(m,2H),1.44-1.37(m,2H),0.89(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.81,163.92,158.05,150.65,145.08,142.24,137.51,136.45,135.66,132.51,130.97,130.94,129.38,129.02,128.69,128.59,128.23,125.43,125.16,121.48,121.43,120.92,120.04,119.83,118.43,111.15,110.81,108.03,103.08,46.98,29.69,27.10,22.44,16.90,14.19.MS(ESI)m/z:555.2[M+H]⁺。

實施例4

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(4-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Id)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為47.1％。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝7.7Hz,1H),8.00(s,1H),7.68(t,J＝7.7Hz,1H),7.57-7.52(m,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.43–7.33(m,2H),7.33-7.30(m,3H),7.27-7.21(m,1H),7.15(d,J＝8.1Hz,1H),6.90(d,J＝8.5Hz,1H),6.64-6.61(m,1H),5.58(s,2H),3.09-2.81(m,5H),2.63(s,3H),1.48(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ166.4,162.7，159.68,156.35,146.70,145.57,143.15,137.63,137.20,136.06,132.88,131.06,130.61,130.58,129.68,128.89,128.81,128.47,126.48,126.7，122.51,121.81,120.70,119.48,119.06,116.68,109.83,108.52,101.10,45.22,20.90,16.91,12.00.MS(ESI)m/z:541.3[M+H]+。

實施例5

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(4-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Ie)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為49.0％。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(d,J＝7.8Hz,1H),8.01(s,1H),7.68(t,J＝7.7Hz,1H),7.57-7.53(m,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.43–7.34(m,2H),7.33-7.30(m,3H),7.27-7.21(m,1H),7.15(d,J＝8.1Hz,1H),6.90(d,J＝8.5Hz,1H),6.64-6.61(m,1H),5.56(s,2H),3.17-2.78(m,5H),2.63(s,3H),1.91–1.80(m,2H),0.89(t,J＝9.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ162.70，159.68,156.35,154.35,146.70,145.57,143.15,137.63,137.20,136.06,132.88,131.06,130.61,130.58,129.68,128.89,128.81,128.47,126.48,126.70，122.51,121.81,120.70,119.48,119.06,116.68,109.83,108.52,101.10,45.22,24.19,20.90,16.91,13.70.MS(ESI)m/z:555.3[M+H]+。

實施例6

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(4-甲基苯并[d]噁唑)-2-基]-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物If)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為43.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(s,1H),7.90(d,J＝9.8Hz,2H),7.70(t,J＝7.6Hz,1H),7.60–7.52(m,2H),7.51–7.41(m,2H),7.31–7.23(m,2H),7.19(d,J＝7.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.5Hz,1H),6.97(dd,J＝8.7,1.7Hz,1H),6.57(d,J＝3.3Hz,1H),5.72(s,2H),2.93(t,J＝7.7Hz,2H),2.65(s,3H),2.57(s,3H),1.84–1.70(m,2H),1.48–1.35(m,2H),0.89(t,J＝7.4Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ162.70，159.68,156.35,154.35,146.70,145.57,143.15,137.63,137.20,136.06,132.88,131.06,130.61,130.58,129.68,128.89,128.81,128.47,126.48,126.70，122.51,121.81,120.70,119.48,119.06,116.68,109.83,108.52,101.10,45.22,24.19,20.90,16.81,16.53 14.10.MS(ESI)m/z:569.3[M+H]+。

實施例7

2-{5-{[2-乙基-4-甲基-6-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Im)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為61.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.82(s,1H),8.51(d,J＝4.8Hz,1H),8.27(s,1H),8.18(d,J＝8.1Hz,1H),7.95-7.88(m,2H),7.70(m,1H),7.56(m,1H),7.48(d,J＝7.8Hz,1H),7.45-7.39(m,2H),7.31(s,1H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),7.00(d,J＝8.4Hz,1H),6.59(d,J＝3.1Hz,1H),5.71(s,2H),2.98(q,J＝7.5Hz,2H),2.67(s,3H),1.35(t,J＝7.5Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.57,166.51,159.39,156.37,146.71,145.62,143.16,137.75,136.49,135.81,133.05,131.09,130.91,129.57,129.02,128.81,128.66,128.37,128.37,121.74,121.07,120.69,119.44,119.06,118.57,110.74,108.59,103.23,46.97,20.91,16.88,12.07.MS(ESI)m/z:528.2[M+H]⁺。

實施例8

2-{5-{[2-丙基-4-甲基-6-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物In)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為49.6％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.91(s,1H),8.50(d,J＝4.8Hz,1H),8.24(s,1H),8.17(d,J＝8.1Hz,1H),7.94(s,1H),7.86(d,J＝7.7Hz,1H),7.66(m,1H),7.53(m,1H),7.47-7.38(m,3H),7.29(s,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),6.99(d,J＝8.5Hz,1H),6.57(d,J＝3.0Hz,1H),5.72(s,2H),2.94(t,J＝7.6Hz,2H),2.66(s,3H),1.88-1.74(m,2H),1.00(t,J＝7.3Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.37,166.05,157.89,155.92,146.27,145.24,142.70,137.04,136.00,135.20,132.10,130.50,130.47,129.08,128.61,128.56,128.17,128.13,127.78,121.33,120.49,120.23,118.95,118.61,117.99,110.36,108.19,102.64,46.57,28.84,20.54,16.41,13.87.MS(ESI)m/z:542.2[M+H]⁺。

實施例9

2-{5-{[2-丁基-4-甲基-6-(噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基]甲基}-1H-吲哚-1-基}苯甲酸(化合物Io)的制備方法：

實驗步驟如實施例1所述，產(chǎn)率為54.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.89(s,1H),8.51(m,1H),8.26(s,1H),8.18(m,1H),7.94(s,1H),7.87(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(m,1H),7.56-7.52(m,1H),7.48-7.39(m,3H),7.29(s,1H),7.10(m,1H),6.99(d,J＝8.6Hz,1H),6.57(d,J＝3.2Hz,1H),5.72(s,2H),2.96(t,2H),2.66(s,3H),1.88-1.71(m,2H),1.46-1.36(m,2H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.32,166.05,158.04,155.91,146.28,145.22,142.70,137.08,135.98,135.21,132.17,130.50,130.50,129.06,128.56,128.56,128.19,128.14,127.79,121.30,120.51,120.24,118.93,118.61,118.03,110.35,108.18,102.65,46.58,29.21,26.67,21.99,16.43,13.74.MS(ESI)m/z:556.2[M+H]⁺。

實施例10

化合物受體結(jié)合活性實驗

受試細胞為大鼠血管平滑肌細胞(VSMCs)，藥品為實施例1-9的化合物和陽性對照藥氯沙坦，分為飽和性試驗和競爭性試驗。

飽和性實驗：將定量¹²⁵I-Ang II溶解于1mL PBS溶液，再稀釋成不同濃度的溶液。取血管平滑肌3-7代用于試驗，鋪于24孔板(1×10⁵/孔)，貼壁后用于試驗。結(jié)合反應：總體積為500μL，細胞板每孔依次加入濃度逐漸增加的¹²⁵I-Ang II溶液，使其終濃度為0-1.5nM，4℃反應150min，為了扣除非特異性結(jié)合，每孔加入未標記的Ang II(終濃度為1×10^-6M)和濃度遞增的¹²⁵I-Ang II溶液(終濃度為0-1.5nM)，4℃反應150min，反應結(jié)束后去除多余的反應液，用PBS洗滌3次，加入0.1mol/L NaOH溶液消化細胞10min，將細胞消化液移入塑料管，用γ計數(shù)器測量每管內(nèi)溶液的γ計數(shù)。經(jīng)GraphPad Prism 5飽和曲線擬合程序處理得到¹²⁵I-Ang II受體結(jié)合飽和曲線。每個濃度采用3個復孔。

競爭性試驗：藥物溶液：取一定量的待測化合物溶于1mL DMSO溶液，使終濃度為10^-2M，依次10倍稀釋成不同濃度的溶液(1×10^-10M～1×10^-4M)。細胞鋪板(1×10⁵/孔)后，每孔加入0.1nM ¹²⁵I-Ang II以及不同濃度的新化合物(終濃度1×10^-6～1×10^-11mol/L)，總體積為500μL，4℃反應150min，反應結(jié)束后去除游離的¹²⁵I-Ang II，用PBS洗滌3次，加入0.1mol/L NaOH溶液消化10min，將細胞液移入塑料管，用γ計數(shù)器測量每管內(nèi)溶液的γ計數(shù)。經(jīng)GraphPad Prism 5競爭結(jié)合曲線擬合程序處理即可得出新型化合物抑制與膜蛋白結(jié)合的半抑制常數(shù)和IC₅₀值。

實驗結(jié)果：受試的化合物與血管平滑肌細胞膜AT₁受體均有較的親和性(如表1所示)，比較IC₅₀值與Ki值發(fā)現(xiàn)，除化合物IIo外，其余化合物與氯沙坦相比均對AngII有更好的抑制作用，其中化合物IIe,IIn的親和性最高，能很好地抑制Ang II與血管平滑肌細胞膜AT₁受體的結(jié)合，非常值得進一步的研究。

表1.化合物系列與AT₁受體的親和性比較

實施例11

化合物動物體內(nèi)降壓活性實驗

實驗動物：自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)24只，220-250g，♂，SPF級，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK(京)2012-0001。

受試品：降壓活性化合物IIe,IIn，陽性對照藥氯沙坦。氯沙坦的臨床用量為50-100mg/人，設人體重為60kg，換算為大鼠劑量后，氯沙坦的劑量為5-10mg/kg，選擇10mg/kg作為試驗劑量。

實驗方法：自發(fā)性高血壓大鼠，隨機分為空白組、氯沙坦組，化合物IIe,IIn給藥組，采用無創(chuàng)傷血壓換能器經(jīng)載波放大之后連至MPA-HBBS型清醒自由活動動物血壓記錄分析系統(tǒng)(上海，奧爾科特)，四肢皮下插入針形電極，連接到交流放大器用于監(jiān)測標準二導聯(lián)心電圖。股動脈插管法測量清醒大鼠主動脈平均動脈壓(MAP)，收縮壓(SAP)，舒張壓(DAP)，心率(HR)及心電圖(ECG)。

試驗時將待測化合物及陽性對照藥氯沙坦配制成濃度為10mg/kg的混懸液。試驗前SHR采取股動脈插管手術，過夜恢復。第二天SHRs連接多道生理信號系統(tǒng)，在線連續(xù)檢測血壓，記錄給藥前及給藥后血壓變化。

數(shù)據(jù)處理：所有實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示，用藥后各組間血壓比較用完全隨機設計的方差分析，如各組總體均數(shù)不等，再用多個樣本均數(shù)間的多重比較，即q檢驗進行處理。

實驗結(jié)果：以治療前后血壓降低值作為變量，發(fā)現(xiàn)與空白組相比，化合物IIe,IIn經(jīng)口服進入大鼠體內(nèi)后，大鼠血壓均有顯著性降低，且化合物進入體內(nèi)后降壓起效快、將壓平穩(wěn)持久，在給藥后4h達到最大降壓值，10mg/kg劑量下化合物IIe,IIn的最大降壓值分別為45.62±4.82mmHg、55.60±0.36mmHg(見表2)，這三個化合物的降壓效果優(yōu)于相同劑量下的氯沙坦，具有持續(xù)降壓趨勢，12小時時仍有顯著降壓效果(與空白對照相比*p＜0.05，**p小于0.01)?；衔颕Ie,IIn降壓效果及持續(xù)時間均優(yōu)于已上市藥物氯沙坦，是新型的具高效、長效、平穩(wěn)降壓活性的化合物，非常值得進一步研究開發(fā)。

表2.實驗后各組血壓降低值比較(n＝6)