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水稻基因OsDF1及抗病調(diào)控功能的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12056431閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一個水稻抗病調(diào)控基因,命名為Oryza sativa defense-related 1,簡稱OsDF1,其核苷酸序列如SEQ ID:1所示,該基因的開放閱讀框長1512bp,編碼的蛋白由503個氨基酸組成,其序列如SEQ ID:2所示,該基因編碼產(chǎn)物不包含任何已知功能的結(jié)構(gòu)域。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水稻抗病調(diào)控基因OsDF1在通過創(chuàng)制轉(zhuǎn)基因水稻來獲取抗病性得到改變的水稻材料中的應(yīng)用,其特征在于,在通過創(chuàng)制超表達OsDF1的轉(zhuǎn)基因水稻純合系來獲得降低對水稻細(xì)菌性病害抗性的水稻材料中的應(yīng)用;以及在通過創(chuàng)制OsDF1-RNAi的轉(zhuǎn)基因水稻純合系來獲得增高對水稻細(xì)菌性病害廣譜抗性的水稻材料中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于,通過以下步驟實現(xiàn)獲得降低對水稻細(xì)菌性病害抗性的水稻材料中的應(yīng)用:

(1)OsDF1基因超表達結(jié)構(gòu)的構(gòu)建和獲取

將OsDF1基因ORF克隆入一個植物表達載體,使其受強啟動子的驅(qū)使表達;

(2)轉(zhuǎn)化OsDF1基因超表達結(jié)構(gòu)的農(nóng)桿菌的獲取

將構(gòu)建好的OsDF1基因超表達結(jié)構(gòu)通過電擊方法轉(zhuǎn)化對水稻具有強侵染能力的農(nóng)桿菌菌株;

(3)超表達OsDF1的轉(zhuǎn)基因水稻創(chuàng)制和獲取

通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將OsDF1基因超表達結(jié)構(gòu)導(dǎo)入水稻,獲取轉(zhuǎn)OsDF1基因超表達結(jié)構(gòu)的水稻;

(4)超表達OsDF1的轉(zhuǎn)基因水稻純合系的獲取

分別以抗生素抗性和OsDF1基因表達為檢測指標(biāo),檢測轉(zhuǎn)基因植株后代的性狀分離情況,獲取后代性狀不再分離的、并能穩(wěn)定遺傳的超表達OsDF1的轉(zhuǎn)基因水稻純合系;

(5)對細(xì)菌病害抗性下降的超表達OsDF1的轉(zhuǎn)基因水稻純合系篩選鑒定和獲取

以超表達OsDF1的轉(zhuǎn)基因水稻純合系為材料,檢測分析對各類水稻細(xì)菌病害的抗性,獲取抗細(xì)菌病害能力下降的轉(zhuǎn)OsDF1基因水稻。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于,通過以下步驟實現(xiàn)獲得增高對水稻細(xì)菌性病害廣譜抗性的水稻材料中的應(yīng)用:

(1)OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)的構(gòu)建和獲取

將OsDF1基因的一個特異性序列片段克隆入中間表達載體pENTR,再將重組結(jié)構(gòu)pENTR-OsDF1與RNAi載體(pANDA載體)進行LR酶反應(yīng),獲取RNAi結(jié)構(gòu)pANDA-OsDF1;

(2)轉(zhuǎn)化OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)的農(nóng)桿菌的獲取

將OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)(pANDA-OsDF1)通過電擊方法轉(zhuǎn)化對水稻具有強侵染能力的農(nóng)桿菌菌株;

(3)轉(zhuǎn)OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)水稻的創(chuàng)制和獲取

通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)導(dǎo)入水稻,獲取轉(zhuǎn)OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)的水稻;

(4)轉(zhuǎn)OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)水稻純合系的獲取

分別以抗生素抗性和OsDF1基因表達為檢測指標(biāo),檢測轉(zhuǎn)基因植株后代的性狀分離情況,獲取后代性狀不再分離的、并能穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)的水稻純合系;

(5)對細(xì)菌病害抗性增強的轉(zhuǎn)OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)水稻純合系的篩選鑒定和獲取

以轉(zhuǎn)OsDF1基因RNAi結(jié)構(gòu)(pANDA-OsDF1)的水稻純合系為材料,檢測分析對各類細(xì)菌病原物所致病害的抗性,獲取抗細(xì)菌病害能力增強的OsDF1基因RNAi水稻。

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