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一種用于快速篩選產(chǎn)多不飽和脂肪酸絲狀真菌的培養(yǎng)基及其用途的制作方法

文檔序號:12644340閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于快速篩選產(chǎn)多不飽和脂肪酸菌株的培養(yǎng)基,其特征在于所述培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖20g/L,馬鈴薯提取物4g/L,瓊脂20g/L,淺藍(lán)菌素1×10-7mol/L,氯化三苯基四氮唑0.5-2g/L,鏈霉素30mg/L,余量為水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基,其特征在于所述氯化三苯基四氮唑濃度為0.5g/L。

3.一種快速篩選產(chǎn)多不飽和脂肪酸菌株的方法,所述方法包括以下步驟:

(1)制備權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基;

(2)采集待篩選樣品,置于4℃保存;

(3)將步驟(2)的樣品用0.9%生理鹽水進(jìn)行適當(dāng)梯度稀釋后,在步驟(1)的平板培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布,將涂布好的平板分別放置在4℃、16℃、28℃培養(yǎng)箱,避光培養(yǎng);

(4)每天觀察步驟(3)的平板上菌落的生長情況,根據(jù)其生長速度以及菌落顏色深淺,選擇生長速度快、呈紅色的菌落,采用菌絲邊緣純化法將其轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基平板上,置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天,然后繼續(xù)分離純化長出的菌株,直至將得到的純培養(yǎng)物作為待確認(rèn)菌株;所述PDA培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖20g/L,馬鈴薯提取物4g/L,瓊脂20g/L,余量為水;

(5)將純化好的菌株進(jìn)行搖瓶發(fā)酵,菌體發(fā)酵完成后收集濕菌體,所得濕菌體經(jīng)真空冷凍干燥后磨碎,提取其脂肪酸,然后通過GC-MS定量分析其脂肪酸組成,得到高產(chǎn)多不飽和脂肪酸菌株。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于所述菌株為絲狀真菌或酵母菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于步驟(5)的菌體發(fā)酵是依次在種子培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中里進(jìn)行的,所述種子培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖20g/L,酵母提取物5g/L,KH2PO4 1g/L,MgSO4.7H2O 0.25g/L,KNO3 10g/L,余量為水;

所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖50g/L,酵母提取物5g/L,KH2PO4 1g/L,MgSO4.7H2O 0.25g/L,KNO3 10g/L,余量為水;

所述發(fā)酵是將步驟(4)的所述待確認(rèn)菌株挑取菌絲接種在種子培養(yǎng)基中在28℃、200rpm下活化36h,然后將活化后的菌體用無菌打碎頭打碎,按1%接種量轉(zhuǎn)接到新的種子培養(yǎng)基中,在28℃、200rpm下培養(yǎng)36h,傳代兩次后將所得菌體打碎,再按1%接種量將打碎的菌體接入搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中,然后在28℃、200rpm條件下?lián)u瓶發(fā)酵培養(yǎng)7天。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于步驟(5)中,所述菌體干燥并磨碎后用酸熱破壁法提取脂肪酸,通過重量體積比為10%的鹽酸甲醇甲酯化得到脂肪酸甲酯,然后進(jìn)行GC-MS定量分析脂肪酸組成。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于步驟(5)中,所述干燥是通過菌體真空冷凍干燥實(shí)現(xiàn)的。

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