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斑馬魚椎間盤損傷模型的構(gòu)建方法與流程

文檔序號(hào):12697330閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.斑馬魚椎間盤損傷模型的構(gòu)建方法,包括DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其特征在于,DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中所使用的引物及序列為,

正向引物:5’-GTCGACGTACTGTATCTGTGCTGATTCAC-3’

反向引物:5’-GACCAGAAGAGATAATTCAAACGT-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑馬魚椎間盤損傷模型的構(gòu)建方法,其特征在于:所述的DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的反應(yīng)體系為:

基因組 DNA 1μL

10μM 正向引物 1μL

10μM 反向引物 1μL

2.5mmol dNTP 4μL

5× 緩沖劑 10μL

聚合酶 0.5μL

去離子水 32.5μL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的斑馬魚椎間盤損傷模型的構(gòu)建方法,其特征在于:所述的DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的反應(yīng)過(guò)程為,

a、98℃預(yù)變性2min

b、98℃變性10sec

c、58℃退火15sec

d、72℃延伸5min30sec

b~d重復(fù)35個(gè)循環(huán)

e、72℃終延伸10min。

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