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一種制備心臟祖細(xì)胞的方法與流程

文檔序號:11899074閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種制備心臟祖細(xì)胞的方法,包括步驟:將重編程因子轉(zhuǎn)導(dǎo)至起始重編程對象細(xì)胞內(nèi),所述重編程因子選自心臟轉(zhuǎn)錄因子、表觀遺傳調(diào)控因子,優(yōu)選地,選自Gata4、Tbx5、Nkx2.5、AF9、Hand2、Mef2C、Mesp1、Baf60c、UTX中任一種或多種的組合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,將重編程因子轉(zhuǎn)導(dǎo)至起始重編程對象細(xì)胞核內(nèi)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述起始重編程對象為成體干細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述起始重編程對象為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述重編程因子為下之任一:(1)重編程因子GMT由Gata4、Mef2C、Tbx5組成;(2)重編程因子GMTB由Gata4、Mef2C、Tbx5、Baf60c組成;(3)重編程因子GHMT由Gata4、Hand2、Mef2C、Tbx5組成;(4)重編程因子GNT由Gata4、Nkx2.5、Tbx5組成;(5)重編程因子GNTB由Gata4、Nkx2.5、Tbx5、Baf60c組成;(6)重編程因子GNMT由Gata4、Nkx2.5、Mef2C、Tbx5組成;(7)重編程因子GM1T由Gata4、Mef2C、Mesp1、Tbx5組成;(8)重編程因子GNM1T由Gata4、Baf60c、Mef2C、Mesp1、Tbx5組成;(9)重編程因子GMM1T由Gata4、Mef2C、Mef2C、Mesp1、Tbx5組成;(10)重編程因子GTB由Gata4、Tbx5、Baf60c組成;(11)重編程因子GM1TB由Gata4、Mef2C、Mesp1、Tbx5、Baf60c組成;(12)重編程因子GNTA由Gata4、Nkx2.5、Tbx5、AF9組成;(13)重編程因子GNTU由Gata4、Tbx5、Nkx2.5、UTX組成;(14)重編程因子GNTAU由Gata4、Nkx2.5、Tbx5、AF9、UTX組成。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法包括步驟:將重編程因子與起始重編程對象細(xì)胞混合,進而將重編程因子轉(zhuǎn)導(dǎo)至起始重編程對象細(xì)胞內(nèi)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,將重編程因子與起始重編程對象細(xì)胞混合后,Gata4的終濃度是0.2~0.4μg/ml,Tbx5的終濃度是0.2~0.4μg/ml,Nkx2.5的終濃度是0.1~0.2μg/ml,Hand2的終濃度是0.1~0.2μg/ml,Mef2C的終濃度是0.2~0.4μg/ml,Mesp1的終濃度是0.3~0.6μg/m,Baf60c的終濃度是0.4~0.8μg/ml,UTX的終濃度是0.5~1.0μg/ml,AF9的終濃度是0.5~1.0μg/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法進一步包括步驟:將重編程因子先與轉(zhuǎn)導(dǎo)載體復(fù)合后形成重編程因子-轉(zhuǎn)導(dǎo)載體復(fù)合物,然后將所述重編程因子-轉(zhuǎn)導(dǎo)載體復(fù)合物與起始重編程對象細(xì)胞混合,進而通過轉(zhuǎn)導(dǎo)載體將重編程因子轉(zhuǎn)導(dǎo)至起始重編程對象細(xì)胞內(nèi)。

9.一種用于制備心臟祖細(xì)胞的重編程因子,所述重編程因子選自Gata4、Tbx5、Nkx2.5、AF9、Hand2、Mef2C、Mesp1、Baf60c、UTX中任一種或多種的組合。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的重編程因子,其特征在于,所述重編程因子為下之任一:(1)重編程因子GMT由Gata4、Mef2C、Tbx5組成;(2)重編程因子GMTB由Gata4、Mef2C、Tbx5、Baf60c組成;(3)重編程因子GHMT由Gata4、Hand2、Mef2C、Tbx5組成;(4)重編程因子GNT由Gata4、Nkx2.5、Tbx5組成;(5)重編程因子GNTB由Gata4、Nkx2.5、Tbx5、Baf60c組成;(6)重編程因子GNMT由Gata4、Nkx2.5、Mef2C、Tbx5組成;(7)重編程因子GM1T由Gata4、Mef2C、Mesp1、Tbx5組成;(8)重編程因子GNM1T由Gata4、Baf60c、Mef2C、Mesp1、Tbx5組成;(9)重編程因子GMM1T由Gata4、Mef2C、Mef2C、Mesp1、Tbx5組成;(10)重編程因子GTB由Gata4、Tbx5、Baf60c組成;(11)重編程因子GM1TB由Gata4、Mef2C、Mesp1、Tbx5、Baf60c組成;(12)重編程因子GNTA由Gata4、Nkx2.5、Tbx5、AF9組成;(13)重編程因子GNTU由Gata4、Tbx5、Nkx2.5、UTX組成;(14)重編程因子GNTAU由Gata4、Nkx2.5、Tbx5、AF9、UTX組成。

11.一種用于制備心臟祖細(xì)胞的藥物組合物,包括如權(quán)利要求9或10所述的重編程因子以及轉(zhuǎn)導(dǎo)載體,所述轉(zhuǎn)導(dǎo)載體將重編程因子轉(zhuǎn)導(dǎo)至起始重編程對象細(xì)胞內(nèi)。

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