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茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:11899235閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.茶樹咖啡堿合成酶基因啟動子TCSP,其特征在于,其核苷酸序列為:

i)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;或

ii)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個或多個核苷酸且具有相同功能的核苷酸序列;或

iii)在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO:1所示序列雜交且具有相同功能的核苷酸序列,所述嚴(yán)格條件為在含0.1%SDS的0.1×SSPE或含0.1%SDS的0.1×SSC溶液中,在65℃下雜交,并用該溶液洗膜;或

iv)與i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90%以上同源性且具有相同功能的核苷酸序列。

2.含有權(quán)利要求1所述啟動子TCSP的表達(dá)盒。

3.含有權(quán)利要求1所述啟動子TCSP的載體。

4.含有權(quán)利要求2所述表達(dá)盒或權(quán)利要求3所述載體的工程菌。

5.權(quán)利要求1所述啟動子TCSP在調(diào)控下游基因表達(dá)中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其特征在于,下游基因包括GUS。

7.權(quán)利要求1所述啟動子TCSP在制備轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用,其中所述植物包括煙草。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,利用Gateway技術(shù)將啟動子TCSP依次構(gòu)建到入門載體和目的載體上,然后通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法制備轉(zhuǎn)基因植物。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用,其特征在于。所述入門載體和目的載體分別為pDONR221和pKGWFS7。

10.用于擴(kuò)增權(quán)利要求1所述啟動子TCSP的特異性PCR引物對,其特征在于,包括GTP1:5′-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTATCAAAAACATAATCAAAACCAAAAC-3′和GTP2:5′-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTGAGATACAAATCAAACAAACACAAA-3′。

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