1.一種肝素鈉的提取方法,其特征在于,包括以下操作步驟:
1)一次酶解:將準(zhǔn)備好的豬腸黏膜原料加入鹽度為4.0~4.5度的氯化鈉水溶液中,混合均勻,得混合液,加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)混合液的pH值,并將混合液升溫至33±2℃后,加入堿性蛋白酶,持續(xù)升溫至38±2℃后恒溫保持酶解1~1.5小時,完成第一次酶解;
2)二次酶解:第一酶解結(jié)束后,加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)混合液的pH值,調(diào)節(jié)混合液的鹽度為3.0~3.5度,持續(xù)升溫至55±1℃后,恒溫保持酶解2.5~3小時,完成第二次酶解;
3)蛋白質(zhì)變性:第二次酶解結(jié)束后,持續(xù)升溫至81±1℃,除去上層雜質(zhì),保溫,過濾,得酶解液;
4)將步驟3)制備的酶解液依次經(jīng)過吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水脫鹽、干燥,即完成。
2.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟1)和步驟2)中調(diào)節(jié)混合液的pH值為9.0±0.2。
3.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟1)中堿性蛋白酶的加入量為每條豬腸對應(yīng)加入4~4.5g堿性蛋白酶。
4.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟3)中保溫時間為10~15分鐘。
5.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟4)所述吸附為將步驟3)制備的酶解液降溫至56±2℃后,調(diào)整酶解液的pH=8.5±0.2,鹽度<4度,加入吸附樹脂,攪拌吸附。
6.如權(quán)利要求5所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,所述吸附樹脂的加入量為每條豬腸加入15~20g吸附樹脂。
7.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟4)中所述洗脫為在洗滌后的吸附樹脂中加入2倍樹脂量質(zhì)量百分濃度為4%的氯化鈉溶液中,在55±5℃溫度下保溫攪拌30~50分鐘,完成一次洗脫,固液分離得一次洗脫液和一次洗脫樹脂;在一次洗脫樹脂中加入等倍樹脂量的飽和氯化鈉溶液,在55±5℃溫度下保溫攪拌4~5小時,完成二次洗脫,固液分離得二次洗脫液和二次洗脫樹脂;在二次洗脫樹脂中加入等倍樹脂量的飽和氯化鈉溶液,在55±5℃溫度下保溫攪拌1~1.5小時,完成三次洗脫,固液分離得三次洗脫液和三次洗脫樹脂。
8.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟4)中所述沉淀為合并一次洗脫液、二次洗脫液和三次洗脫液,得混合洗脫液,在混合洗脫液中加入乙醇至乙醇質(zhì)量百分濃度為40~45%,攪拌30~50分鐘,靜置過夜分層,下層為肝素鈉沉淀,固液分離得肝素鈉粗品。
9.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟4)中所述脫水脫鹽為在肝素鈉粗品中加入質(zhì)量百分濃度為95%的乙醇溶液脫鹽脫水2~3次。
10.如權(quán)利要求1所述的肝素鈉的提取方法,其特征在于,步驟4)中所述干燥為將脫水脫鹽后的肝素鈉粗品在70~80℃條件下烘干。