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耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的實時熒光定性PCR檢測方法與流程

文檔序號:11145926閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于檢測耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實時熒光定性PCR檢測引物對和探針,其特征在于:

所述引物對為由核苷酸序列為SEQ ID No.1所示的正向引物和SEQ ID No.2所示的反向引物組成的引物對1;所述探針為核苷酸序列為SEQ ID No.3所示的探針1;或者,

所述引物對為由核苷酸序列為SEQ ID No.4所示的正向引物和SEQ ID No.5所示的反向引物組成的引物對2;所述探針為核苷酸序列為SEQ ID No.6所示的探針2。

2.權(quán)利要求1所述的實時熒光定性PCR檢測引物對和探針在檢測耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種中的應(yīng)用。

3.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實時熒光定性PCR檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)提取待檢測大豆樣品的DNA;(2)以提取的DNA為模板,以權(quán)利要求1所述的實時熒光定性PCR檢測引物對和探針建立PCR擴(kuò)增體系并進(jìn)行實時熒光PCR擴(kuò)增;(3)如果發(fā)生特異性擴(kuò)增,則待檢測的大豆樣品是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種;如果未發(fā)生特異性擴(kuò)增,則待檢測的大豆樣品不是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種。

4.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實時熒光定性PCR檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)提取待檢測大豆樣品的DNA;(2)以提取的DNA為模板,以權(quán)利要求1所述的引物對1和探針1建立PCR擴(kuò)增體系并進(jìn)行實時熒光PCR擴(kuò)增;(3)如果發(fā)生特異性擴(kuò)增,則待檢測的大豆樣品是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種;如果未發(fā)生特異性擴(kuò)增,則待檢測的大豆樣品不是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種。

5.按照權(quán)利要求3或4所述的實時熒光定性PCR檢測方法,其特征在于,所述PCR擴(kuò)增體系包括:反應(yīng)體系總體積為25.0μL,其中,10×PCR緩沖液2.5μL,25mmol/L氯化鎂溶液2.5μL,dNTPs混合溶液2.0μL,10μmol/L正向引物1.0μL,10μmol/L反向引物1.0μL,10μmol/L探針0.5μL,終濃度為0.025U/μL的Taq DNA聚合酶,25mg/L DNA模板2.0μL,余量為雙蒸水。

6.按照權(quán)利要求3或4所述的實時熒光定性PCR檢測方法,其特征在于,所述實時熒光PCR擴(kuò)增的程序包括:95℃變性5min;95℃變性15s,60℃退火延伸60s,循環(huán)數(shù)40。

7.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實時熒光定性PCR檢測試劑盒,包括:10×PCR緩沖液,氯化鎂溶液,dNTPs混合溶液,檢測引物對,探針,Taq DNA聚合酶和雙蒸水;其特征在于:所述檢測引物對、探針為權(quán)利要求1所述的實時熒光定性PCR檢測引物對和探針。

8.按照權(quán)利要求7所述的實時熒光定性PCR檢測試劑盒,其特征在于:所述檢測引物對為權(quán)利要求1所述的引物對1,所述探針為權(quán)利要求1所述的探針1。

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