1.一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠,其特征在于:包括脂肪組織外泌體和溶劑,脂肪組織外泌體和溶劑質(zhì)量體積比為1-3:1,所述溶劑為水凝膠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠,其特征在于:所述脂肪組織外泌體和溶劑質(zhì)量體積比為1:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠,其特征在于:所述溶劑為基質(zhì)膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠的制備方法:包括以下步驟:
(1)脂肪組織的處理:
取已處死大鼠體,做腹股溝切口獲取SD大鼠雙側(cè)腹股溝脂肪組織,沖洗后將脂肪組織剪碎成1-2mm3;
(2)脂肪組織提取液的獲?。?/p>
將由步驟(1)獲取的剪碎的脂肪組織轉(zhuǎn)移到Celstir懸浮培養(yǎng)瓶中,加入α-MEM培養(yǎng)基,保持懸浮培養(yǎng)為100-110rpm的轉(zhuǎn)速,存放于35-38℃,4-5%CO2的培養(yǎng)箱,連續(xù)三天后用細(xì)胞篩過(guò)濾并收集上清液,離心過(guò)濾上清液,取過(guò)濾液放于3KD膜的離心過(guò)濾器中,溫度3-5℃,4500-5200g轉(zhuǎn)速離心28-32min,獲得脂肪組織提取液;
優(yōu)化方案中脂肪組織與培養(yǎng)基的體積比為1:3-4;
優(yōu)化方案中保持懸浮培養(yǎng)基為100rpm的轉(zhuǎn)速,存放于35℃,5%CO2的培養(yǎng)箱,連續(xù)三天后用細(xì)胞篩過(guò)濾并收集上清液,離心、過(guò)濾上清液后再用0.20-0.25微米的濾器過(guò)濾,過(guò)濾液進(jìn)一步放于3KD膜的離心過(guò)濾器中,溫度4℃,5000g轉(zhuǎn)速離心30min;
(3)脂肪組織來(lái)源外泌體的獲?。?/p>
將由步驟(2)獲得的脂肪組織提取液中加入外泌體提取試劑,脂肪組織提取液和外泌體提取試劑用量比例為1.8-2.2:1,3-5℃過(guò)夜后以3-5℃、8000-12000g離心50-70minh,取沉淀,即得脂肪組織來(lái)源外泌體;
優(yōu)化方案中脂肪組織提取液和外泌體提取試劑用量比例為2:1,4℃過(guò)夜后以4℃、10000g離心1h;
(4)脂肪組織來(lái)源外泌體膠的制備:
將溶劑置于冰上,3-5℃冰箱過(guò)夜融化,同時(shí)預(yù)冷操作工具;取脂肪組織來(lái)源外泌體用融化后的液態(tài)溶劑重懸,外泌體最終濃度為0.8-1.2mg/ml,將獲得的混有脂肪組織來(lái)源外泌體的液態(tài)溶劑轉(zhuǎn)移入預(yù)冷的一次性醫(yī)用注射器中,置于冰上保存,即可;優(yōu)化方案中外泌體最終濃度為1mg/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求4述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠的制備方法,其特征在于:所述步驟(2)中脂肪組織提取液的濃度為2-5mg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠的制備方法,其特征在于:所述步驟(2)中離心、過(guò)濾上清液為以2100-2200g,離心22-28min,再取上清液用0.20-0.25微米的濾器過(guò)濾;優(yōu)化方案中上清液以2180g,離心25min,再取上清液用0.22微米的濾器過(guò)濾。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠的制備方法,其特征在于:所述步驟(3)中進(jìn)行先提純后再加入外泌體提取試劑,提純步驟為脂肪組織提取液用3KD分子量膜過(guò)濾后采用高速離心,即3-5℃以8000-12000g離心50-70min;優(yōu)化方案中提純步驟為脂肪組織提取液用3KD分子量膜過(guò)濾后采用高速離心,即4℃以10000g離心60min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠的應(yīng)用,其特征在于:在體內(nèi)促進(jìn)脂肪再生中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂肪組織來(lái)源外泌體膠的應(yīng)用,其特征在于:在各種損傷造成的軟組織缺損模型上的應(yīng)用。