本發(fā)明涉及一種OsSGT1蛋白及其編碼基因在調(diào)控植物耐鹽抗性中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：非生物脅迫如鹽堿、干旱和低溫嚴(yán)重地影響作物的高產(chǎn)和穩(wěn)產(chǎn)，是威脅世界糧食安全的主要因素土壤鹽漬化是限制農(nóng)作物生長、造成糧食減產(chǎn)的主要非生物脅迫因子之一。近年來，土壤次生鹽漬化面積在逐年增加，鹽脅迫已成為世界范圍內(nèi)影響生物農(nóng)業(yè)生產(chǎn)最重要的環(huán)境脅迫因子之一。鹽脅迫主要表現(xiàn)為滲透脅迫，影響植株對Na+和K+的吸收和排斥，以及細(xì)胞正常離子的分布和動態(tài)平衡。水稻是禾本科模式植物，也是一種對鹽中度敏感的作物，鹽脅迫已成為中國鹽堿稻區(qū)水稻穩(wěn)定生產(chǎn)的主要制約因素。鹽脅迫耐性相關(guān)基因包括參與信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝相關(guān)的基因和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因等。水稻鹽脅迫應(yīng)答的分子機(jī)制研究取得了一些實質(zhì)性進(jìn)展，主要表現(xiàn)在多個與鹽脅迫耐受相關(guān)的基因和調(diào)控因子被成功鑒定，部分基因的生物學(xué)功能也闡述得比較清楚。目前雖已鑒定了一些鹽脅迫相關(guān)的分子標(biāo)記和基因(或QTL)位點(diǎn)，由于鹽脅迫耐性是一個數(shù)量性狀，受多個基因調(diào)控。因此還需要加大水稻耐鹽種質(zhì)資源的發(fā)掘和利用，加強(qiáng)水稻耐鹽分子標(biāo)記的定位研究，克隆耐鹽基因，并研究其作用機(jī)制。挖掘植物耐鹽基因，了解鹽脅迫的發(fā)生機(jī)理，尋找植物響應(yīng)鹽脅迫的信號途徑節(jié)點(diǎn)，提高水稻的抗病性和耐鹽性，培育耐鹽性強(qiáng)的水稻品種，具有重要的理論意義和生產(chǎn)應(yīng)用價值。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種OsSGT1蛋白及其編碼基因在調(diào)控植物耐鹽抗性中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括如下步驟：將編碼OsSGT1蛋白的基因?qū)氤霭l(fā)植物，得到耐鹽性降低的轉(zhuǎn)基因植物。所述OsSGT1蛋白，獲自水稻，是如下(a1)或(a2)：(a1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(a2)將序列2的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐鹽性相關(guān)的由序列2衍生的蛋白質(zhì)。為了使(a1)中的OsSGT1蛋白便于純化和檢測，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。表1標(biāo)簽的序列標(biāo)簽殘基序列Poly-Arg5-6(通常為5個)RRRRRPoly-His2-10(通常為6個)HHHHHHFLAG8DYKDDDDKStrep-tagII8WSHPQFEKc-myc10EQKLISEEDL上述(a2)中的OsSGT1蛋白可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá)得到。上述(a2)中的OsSGT1蛋白的編碼基因可通過將序列表中序列1所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。所述“編碼OsSGT1蛋白的基因(簡稱OsSGT1基因)”為如下(b1)或(b2)或(b3)：(b1)編碼區(qū)如序列表的序列1自5’末端第1-1104位核苷酸所示的DNA分子；(b2)在嚴(yán)格條件下與(b1)限定的DNA序列雜交且編碼與植物耐鹽性相關(guān)的蛋白質(zhì)的DNA分子；(b3)與(b1)或(b2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且編碼與植物耐鹽性相關(guān)的蛋白質(zhì)的DNA分子。上述嚴(yán)格條件可為用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA雜交實驗中65℃下雜交并洗膜。所述方法中，所述OsSGT1基因可以通過重組表達(dá)載體導(dǎo)入出發(fā)植物。所述重組表達(dá)載體可通過Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)等常規(guī)生物學(xué)方法轉(zhuǎn)化到植物細(xì)胞或組織中?？捎矛F(xiàn)有的植物表達(dá)載體構(gòu)建含有所述基因的重組表達(dá)載體。所述植物表達(dá)載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等。使用所述基因構(gòu)建重組表達(dá)載體時，可在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前加上任何一種增強(qiáng)型、組成型、組織特異型或誘導(dǎo)型啟動子，它們可單獨(dú)使用或與其它的植物啟動子結(jié)合使用；此外，使用所述基因構(gòu)建重組表達(dá)載體時，還可使用增強(qiáng)子，包括翻譯增強(qiáng)子或轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，這些增強(qiáng)子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植物進(jìn)行鑒定及篩選，可對所用植物表達(dá)載體進(jìn)行加工，如加入在植物中表達(dá)可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因、具有抗性的抗生素標(biāo)記物或是抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因等。所述重組表達(dá)載體具體可為將載體pGWB18中插入了序列表的序列1所示的雙鏈DNA分子得到的重組質(zhì)粒。以上任一所述出發(fā)植物為單子葉植物或雙子葉植物。所述單子葉植物可為禾本目植物。所述禾本目植物可為禾本科植物。所述禾本科植物可為稻屬植物。所述稻屬植物具體可為水稻，例如日本晴水稻。所述耐鹽性降低具體體現(xiàn)為如下(d1)-(d3)中的至少一種：(d1)高鹽條件下，存活率低于出發(fā)植物；(d2)高鹽條件下，過氧化物酶活性低于出發(fā)植物；(d3)高鹽條件下，丙二醛含量高于出發(fā)植物。所述高鹽條件具體可為100mMNaCl處理。本發(fā)明還保護(hù)OsSGT1蛋白的應(yīng)用，為如下(c1)或(c2)：(c1)調(diào)控植物耐鹽性；(c2)降低植物耐鹽性。本發(fā)明還保護(hù)以上任一所述方法在植物育種中的應(yīng)用。所述育種的目的是選育耐鹽性低的植物。本發(fā)明還保護(hù)一種植物育種方法，包括如下步驟：增加植物中OsSGT1蛋白的表達(dá)量和/或活性，得到耐鹽性降低的水稻。本發(fā)明還保護(hù)一種降低植物耐鹽性的方法，包括如下步驟：增加植物中OsSGT1蛋白的表達(dá)量和/或活性，從而降低植物耐鹽性。以上任一所述植物為單子葉植物或雙子葉植物。所述單子葉植物可為禾本目植物。所述禾本目植物可為禾本科植物。所述禾本科植物可為稻屬植物。所述稻屬植物具體可為水稻，例如日本晴水稻。本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)OsSGT1蛋白及其編碼基因具有調(diào)控植物耐鹽性的功能。上調(diào)植物中OsSGT1基因的表達(dá)可以顯著降低植物的耐鹽性。本發(fā)明對于挖掘植物耐鹽基因，了解鹽脅迫的發(fā)生機(jī)理，提高植物耐鹽性，培育耐鹽性強(qiáng)的植物品種，具有重要的理論指導(dǎo)意義和生產(chǎn)應(yīng)用價值。附圖說明圖1為部分轉(zhuǎn)基因植株的PCR鑒定結(jié)果。圖2為轉(zhuǎn)基因植株的Westernblot結(jié)果。圖3為野生型植株和轉(zhuǎn)基因植株耐鹽表型觀察結(jié)果。圖4為野生型植株和轉(zhuǎn)基因植株存活率統(tǒng)計結(jié)果。圖5為野生型植株和轉(zhuǎn)基因植株MDA(丙二醛)含量統(tǒng)計結(jié)果。圖6為野生型植株和轉(zhuǎn)基因植株P(guān)OD(過氧化物酶)活性統(tǒng)計結(jié)果。具體實施方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。OsSGT1基因的編碼區(qū)序列如序列表的序列1所示，編碼序列表的序列2所示的蛋白質(zhì)(OsSGT1蛋白)。水稻品系日本晴：參考文獻(xiàn)：李磊，薛薌，左示敏，等.水稻品種日本晴最適葉片卷曲度研究[J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2013(2)：47-51.；公眾可以從中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所獲得。載體pDONR201：Invitrogen公司，貨號：11798-014。載體pGWB18：BioVectorNTCC典型培養(yǎng)物保藏中心。誘導(dǎo)培養(yǎng)基：CaCl2·2H2O440mg，KH2PO4170mg，MgSO4·7H2O370mg，NH4NO31650mg，KNO31900mg，KI0.83mg，CoCl2·6H2O0.025mg，H3BO36.2mg，Na2MoO4·2H2O0.25mg，MnSO4·4H2O22.3mg，CuSO4·5H2O0.025mg，ZnSO4·7H2O8.6mg，Na2-EDTA·2H2O37.3mg，F(xiàn)eSO4·7H2O27.8mg，VB10.1mg，VB60.5mg，煙酸0.5mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，2，4-D2mg，水解酪蛋白2g，麥芽糖30g，瓊脂3g，去離子水加至1L。侵染培養(yǎng)基：配制方法參見參考文獻(xiàn)：HieiY，OhtaS，KomariT，etal.Efficienttransformationofrice(Oryzasativa，L.)mediatedbyAgrobacterium，andsequenceanalysisoftheboundariesoftheT-DNA[J].PlantJournal，1994，6(2)：271-282.。將參考文獻(xiàn)中乙酰丁香酮的濃度替換為200μM。共培養(yǎng)培養(yǎng)基：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入乙酰丁香酮和葡萄糖，使乙酰丁香酮在培養(yǎng)基中的終濃度為200μM，葡萄糖在培養(yǎng)基中的終濃度為10g/L。抑菌培養(yǎng)基：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中頭孢霉素，使頭孢霉素在培養(yǎng)基中的終濃度為500mg/L。篩選培養(yǎng)基：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入潮霉素和頭孢霉素，使潮霉素在培養(yǎng)基中的終濃度為65mg/L，頭孢霉素在培養(yǎng)基中的終濃度為500mg/L。預(yù)再生培養(yǎng)基：CaCl2·2H2O440mg，KH2PO4170mg，MgSO4·7H2O370mg，NH4NO31650mg，KNO31900mg，KI0.83mg，CoCl2·6H2O0.025mg，H3BO36.2mg，Na2MoO4·2H2O0.25mg，MnSO4·4H2O22.3mg，CuSO4·5H2O0.025mg，ZnSO4·7H2O8.6mg，Na2-EDTA·2H2O37.3mg，F(xiàn)eSO4·7H2O27.8mg，VB10.1mg，VB60.5mg，煙酸0.5mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，水解酪蛋白2g，麥芽糖30g，瓊脂3g，激動素2mg，萘乙酸1mg，去離子水加至1L；倒平板之前加入潮霉素并使其濃度為50mg/L。再生培養(yǎng)基：CaCl2·2H2O440mg，KH2PO4170mg，MgSO4·7H2O370mg，NH4NO31650mg，KNO31900mg，KI0.83mg，CoCl2·6H2O0.025mg，H3BO36.2mg，Na2MoO4·2H2O0.25mg，MnSO4·4H2O22.3mg，CuSO4·5H2O0.025mg，ZnSO4·7H2O8.6mg，Na2-EDTA·2H2O37.3mg，F(xiàn)eSO4·7H2O27.8mg，VB10.1mg，VB60.5mg，煙酸0.5mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，水解酪蛋白2g，麥芽糖30g，瓊脂6g，激動素2mg，萘乙酸1mg，去離子水加至1L；倒平板之前加入潮霉素并使其濃度為50mg/L。POD反應(yīng)液：在50ml0.1M磷酸緩沖液(pH6.0)中加入愈創(chuàng)木酚28μL，磁力攪拌器加熱攪拌使之完全溶解，冷卻后加入30％(體積百分比)H2O2水溶液19μL混合。MDA反應(yīng)液：0.6gTBA(硫代巴比妥酸)，先用少量1MNaOH水溶液溶解，然后用10％(體積百分比)TCA(三氯乙酸)水溶液定容至100毫升。實施例1、OsSGT1蛋白及其編碼基因的功能分析一、OsSGT1基因過表達(dá)載體的構(gòu)建1、提取日本晴水稻葉片的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA。2、以步驟1得到cDNA為模板，采用引物attB-F1和引物attB-R1進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物。attB-F1：5′-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTGCATGGCAACCGCCGCC-3′；attB-R1：5′-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTGAGTACTCCCATTTCTTAAGCTCC-3′。3、通過BP反應(yīng)，將步驟2得到的擴(kuò)增產(chǎn)物導(dǎo)入載體pDONR201，得到含有序列表序列1所示的雙鏈DNA分子的陽性入門克隆質(zhì)粒pDONR201-OsSGT1。BP反應(yīng)體系：擴(kuò)增產(chǎn)物2.7μL(50-100ng)，載體pDONR2011.0μL(30-50ng)，5×BPReactionBuffer1.0μL，BPEnzymemix0.3μL。BP反應(yīng)條件：25℃溫浴1h。4、取步驟3得到的陽性入門克隆質(zhì)粒pDONR201-OsSGT1，與載體pGWB18進(jìn)行LR反應(yīng)，得到含有序列表序列1所示的雙鏈DNA分子的35S：：MYC-OsSGT1表達(dá)載體(已經(jīng)測序驗證)。LR反應(yīng)體系：入門克隆質(zhì)粒pDONR201-OsSGT11μL(50-100ng)，載體pGWB181μL(50-100ng)，LRenzymemix0.5μL。LR反應(yīng)條件：25℃溫浴1h。二、過表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻的獲得1、取日本晴水稻的成熟種子，機(jī)械脫殼，挑取飽滿光潔無菌斑的種子進(jìn)行消毒。2、將步驟1消毒后的種子接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基28℃、暗培養(yǎng)14天左右，選取外觀良好，生長力好的愈傷組織。3、取步驟一構(gòu)建的表達(dá)載體35S：：MYC-OsSGT1，導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌EHA105，得到重組菌EHA105/35S：：MYC-OsSGT1。4、取步驟3得到的重組菌EHA105/35S：：MYC-OsSGT1，用侵染培養(yǎng)基重懸菌體，得到菌懸液(OD600nm＝1.0)。5、將完成步驟2的愈傷組織浸泡于步驟4制備的菌懸液中，侵染20min。侵染后將菌懸液倒掉，取愈傷組織，用無菌濾紙吸干水分，然后置于共培養(yǎng)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)28℃暗培養(yǎng)50-55h。6、完成步驟5后，挑選表面沒有明顯農(nóng)桿菌的愈傷組織移至抑菌培養(yǎng)基中，28℃暗培養(yǎng)3-4天。7、完成步驟6后，將愈傷組織移至篩選培養(yǎng)基上28℃暗培養(yǎng)培養(yǎng)30天，每10天繼代一次。8、完成步驟7后，取新鮮潮霉素抗性的愈傷組織，接于預(yù)再生培養(yǎng)基中，28℃暗培養(yǎng)7天，然后置于光照培養(yǎng)間(12h光照/12h黑暗)繼續(xù)培養(yǎng)7天后轉(zhuǎn)入再生培養(yǎng)基上，繼續(xù)光照培養(yǎng)，直至生長出再生植株，得到T0代植株。T0代植株自交，得到T1代植株。T1代植株自交，得到T2代植株。T2代植株自交，得到T3代植株。三、過表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻的鑒定1、取步驟二獲得的各個株系的T2代植株，提取植株葉片的總RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，采用引物Hyg-F和Hyg-R進(jìn)行PCR鑒定。采用過表達(dá)載體35S：：MYC-OsSGT1作為陽性對照，采用日本晴水稻的cDNA作為陰性對照。Hyg-F：5’-CTATTTCTTTGCCCTCGGAC-3’；Hyg-R：5’-CCTGACCTATTGCATCTCCC-3’。如果對于某一T0代植株，其抽樣檢測的T2代植株的PCR鑒定結(jié)果均為陽性，該T0代植株及其自交后代為一個純合的過轉(zhuǎn)基因株系。部分植株的PCR鑒定結(jié)果如圖1所示。圖1中，M為DNAMaker，+為陽性對照，-為陰性對照，泳道1-17依次對應(yīng)17個不同株系的T2代植株。結(jié)果表明，17個株系的植株均能擴(kuò)增出與質(zhì)粒載體潮霉素基因一致的特異條帶，17個株系均為純合的過轉(zhuǎn)基因株系。2、選取步驟1鑒定正確的6個轉(zhuǎn)基因株系(命名為SA11、SA22、SA24、SA28、SA35和SA36)，采用westernblot分析各株系T2代植株中OsSGT1蛋白表達(dá)量(MYC抗體)，鑒定轉(zhuǎn)基因株系的過表達(dá)效率。檢測結(jié)果如圖2所示。結(jié)果表明：6個轉(zhuǎn)基因株系中均檢測到目的條帶，在總蛋白上樣量一致的前提下，轉(zhuǎn)基因株系SA22、SA24和SA28中OsSGT1的蛋白積累量顯著高于轉(zhuǎn)基因株系SA11、SA35和SA36中OsSGT1的蛋白量。四、轉(zhuǎn)空載體株系的獲得采用載體pGWB18替代表達(dá)載體35S：：MYC-OsSGT1按照步驟二的1-8進(jìn)行操作，得到轉(zhuǎn)空載體株系。五、過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系的耐鹽性鑒定待測植株為：日本晴水稻(野生型)、過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系SA24的T3代植株、過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系SA28的T3代植株、轉(zhuǎn)空載體株系的T3代植株。1、將待測植株的種子放于50℃烘箱中烘3天，用0.5％(體積百分比)次氯酸鈉水溶液浸泡30分鐘對種子進(jìn)行表面消毒，然后在37℃培養(yǎng)箱中浸種、催芽至露白，期間約12h換一次水。2、選步驟1發(fā)芽一致的種子進(jìn)行播種，用蒸餾水(pH＝5.5)培養(yǎng)一周，之后用Yoshida營養(yǎng)液(配制方法見參考文獻(xiàn)：YoshidaS，F(xiàn)ornoDA，CockJH.Laboratorymanualforphysiologicalstudiesofrice.Laboratorymanualforphysiologicalstudiesofrice.InternationalRiceResearchInstitute，1976.)28℃繼續(xù)培養(yǎng)至三葉期，然后將植株轉(zhuǎn)移至含有100mMNaCl的Yoshida營養(yǎng)液28℃繼續(xù)培養(yǎng)(鹽處理)，分別在鹽處理的第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天和第10天統(tǒng)計其存活率。結(jié)果如圖3和圖4所示。圖3為第10天的表型觀察結(jié)果。圖3中，左上和右上為野生型(CK)的表型觀察結(jié)果，左下為轉(zhuǎn)基因植株SA28的表型觀察結(jié)果，右下為轉(zhuǎn)基因植株SA24的表型觀察結(jié)果。圖4為存活率統(tǒng)計結(jié)果。結(jié)果表明，100mMNaCl處理第4天開始，野生型植株(CK)的存活率高于轉(zhuǎn)基因植株SA24和SA28，第10天，野生型植株的存活率分別為60％和80％，而轉(zhuǎn)基因植株SA24的存活率為13.3％，SA28的存活率為38％，即轉(zhuǎn)基因植株對鹽脅迫的敏感性顯著高于野生型。轉(zhuǎn)空載體植株的存活率與野生型無顯著性差異。3、取步驟2使用100mMNaCl處理第7天葉齡葉位長勢均相似的植物葉片，稱取0.5g，剪碎置于預(yù)冷的研缽中，加入3ml預(yù)冷的PBS(21.25ml0.2M的NaH2PO4水溶液與228.25ml0.2M的Na2HPO4水溶液混勻，蒸餾水定容至1000ml，pH＝7.8)充分研磨，將研磨液倒入離心管中，再用2ml預(yù)冷的PBS洗滌研缽，并倒入離心管中，4℃，6,000rpm離心30min，吸取5ml上清液(即酶提取液)，進(jìn)行POD(過氧化物酶)活性和MDA(丙二醛)含量的測定。(1)POD(過氧化物酶)活性測定：將20μL酶提取液和3mlPOD反應(yīng)液加至比色皿中，快速混勻并立即測定在470nm下的吸光值，每隔1分鐘讀數(shù)1次，共讀3次，以每分鐘吸光度變化值(ΔA470/min·g·F·W)表示酶活力的大小。設(shè)置采用20μLPBS代替酶提取液的空白對照，調(diào)零。POD活性(ΔA470/min·g·F·W)＝ΔA470×V×Va×W＝ΔA470×5×0.02×0.5＝ΔA470×500ΔA470：A470在0-3min的差值；V：提取液總體積(mL)；Va：測定酶提取液體積(mL)；W：葉片干重(g)；(2)MDA測定：將1ml酶提取液和2mlMDA反應(yīng)液加入到離心管中，封口沸水浴15min，迅速冷卻后，12,000rpm離心10min，吸取上清液并在600、532、450nm三個波長下測定其吸光值。MDA(μmol·g-1·F-1W-1)＝〔6.45×(D532-D600)-0.56×D450〕×V/Va/WV：提取液總體積(mL)；Va：測定酶提取液體積(mL)；W：葉片干重(g)；結(jié)果如圖5和圖6所示。圖5為MDA含量統(tǒng)計結(jié)果，圖6為POD活性統(tǒng)計結(jié)果。結(jié)果表明，鹽脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因植株葉片內(nèi)MDA的含量顯著高于野生型(CK)，細(xì)胞膜受情況比野生型嚴(yán)重，而POD酶活性顯著低于野生型，表明轉(zhuǎn)基因植株葉片內(nèi)不能有效的清除體內(nèi)的氧自由基，減小鹽脅迫產(chǎn)生的氧自由基對細(xì)胞膜造成的過氧化傷害。轉(zhuǎn)空載體植株的統(tǒng)計結(jié)果與野生型無顯著性差異。<110>中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院深圳生物育種創(chuàng)新研究院<120>OsSGT1蛋白及其編碼基因在調(diào)控植物耐鹽抗性中的應(yīng)用<160>2<210>1<211>1104<212>DNA<213>水稻（Oryzasativa）<400>1atggcaaccgccgccgcgtcggatctggagagcaaggccaaggcggccttcgtcgacgac60gacttcgagctcgccgccgagctctacacgcaggcaatcgaggccagccccgccaccgcc120gagctctacgccgaccgcgcccaggcccatatcaagctaggcaactacactgaggctgta180gctgatgctaacaaggccattgaacttgacccatcaatgcacaaggcttatcttcgtaaa240ggcgctgcatgtatacgactggaggagtatcaaactgcaaaagcagctcttgaattgggt300tactcgttcgcatctggtgactcaaggtttactcgcctaatgaaggagtgtgatgagcgc360attgctgaggagcttagtgaagtccctgttaagaaggctgaagatggagcagctgccccc420tctgttgcttcttttgttgaggaaaaggatgatgctgcaaacatggataatacaccacca480atggtagaagtgaagccaaaatacaggcacgacttctacaacagtgctacagaagttgta540ttgacaatttttgcaaagggtgttcctgctgagaatgttgttgttgattttggtgaacaa600atgttaagtgtgtcgattgaagtccctggagaggagccgtaccattttcagcctcgtctg660ttttctaagatcatccctgagaaaagcagataccaagtgctatccacgaaggttgaaata720agactggctaaagctgaacagattacatggacctcacttgattatgataaaaaaccaaag780gctgttccacaaaagataatccctccagctgaatcggcccagaggccatcatatccttcc840tcaaaatccaagaaagactgggataaactggaagctgaagttaaaaaggaggagaaggag900gagaagcttgaaggcgatgctgcattgaacaaatttttccgtgacatctacagtgatgct960gatgaagacatgcgacgagcaatgatgaaatcttttgttgaatctaacggtactgttctg1020tcgaccaattggaaagatgttggctcgaagaaggtagagggaagcccacctgatgggatg1080gagcttaagaaatgggagtactaa1104<210>2<211>367<212>PRT<213>水稻（Oryzasativa）<400>2MetAlaThrAlaAlaAlaSerAspLeuGluSerLysAlaLysAlaAla151015PheValAspAspAspPheGluLeuAlaAlaGluLeuTyrThrGlnAla202530IleGluAlaSerProAlaThrAlaGluLeuTyrAlaAspArgAlaGln354045AlaHisIleLysLeuGlyAsnTyrThrGluAlaValAlaAspAlaAsn505560LysAlaIleGluLeuAspProSerMetHisLysAlaTyrLeuArgLys65707580GlyAlaAlaCysIleArgLeuGluGluTyrGlnThrAlaLysAlaAla859095LeuGluLeuGlyTyrSerPheAlaSerGlyAspSerArgPheThrArg100105110LeuMetLysGluCysAspGluArgIleAlaGluGluLeuSerGluVal115120125ProValLysLysAlaGluAspGlyAlaAlaAlaProSerValAlaSer130135140PheValGluGluLysAspAspAlaAlaAsnMetAspAsnThrProPro145150155160MetValGluValLysProLysTyrArgHisAspPheTyrAsnSerAla165170175ThrGluValValLeuThrIlePheAlaLysGlyValProAlaGluAsn180185190ValValValAspPheGlyGluGlnMetLeuSerValSerIleGluVal195200205ProGlyGluGluProTyrHisPheGlnProArgLeuPheSerLysIle210215220IleProGluLysSerArgTyrGlnValLeuSerThrLysValGluIle225230235240ArgLeuAlaLysAlaGluGlnIleThrTrpThrSerLeuAspTyrAsp245250255LysLysProLysAlaValProGlnLysIleIleProProAlaGluSer260265270AlaGlnArgProSerTyrProSerSerLysSerLysLysAspTrpAsp275280285LysLeuGluAlaGluValLysLysGluGluLysGluGluLysLeuGlu290295300GlyAspAlaAlaLeuAsnLysPhePheArgAspIleTyrSerAspAla305310315320AspGluAspMetArgArgAlaMetMetLysSerPheValGluSerAsn325330335GlyThrValLeuSerThrAsnTrpLysAspValGlySerLysLysVal340345350GluGlySerProProAspGlyMetGluLeuLysLysTrpGluTyr355360365當(dāng)前第1頁1 2 3