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檢測尿液病原菌的試劑盒及應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12712791閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.檢測尿液病原菌的試劑盒,其特征在于,包括尿液前處理試劑、病原菌ATP裂解液、中和液、ATP檢測試劑;

所述的尿液前處理試劑包括:體細(xì)胞消化液和ATP酶,所述的體細(xì)胞消化液包括體積分?jǐn)?shù)為0.3~0.7%Triton和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.03~0.07%TCA,所述的ATP酶為95~105U/mL三磷酸腺苷雙磷酸酶;

所述病原菌ATP裂解液包括:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2~5%TCA;

所述中和液包括:100~123.4mmol/L Tris-base、2~2.34mmol/L醋酸鎂,pH為8.2;

所述的ATP檢測試劑包括:12~20μg/mL熒光素酶、16~24μg/mL熒光素、18~22mmol/L Tris-base、1.5~2.5mmol/L醋酸鎂,pH調(diào)至7.2~7.8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測尿液病原菌的試劑盒,其特征在于,所述的體細(xì)胞消化液包括體積分?jǐn)?shù)0.5%Triton和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%TCA,所述的ATP酶為100U/mL三磷酸腺苷雙磷酸酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測尿液病原菌的試劑盒,其特征在于,所述病原菌ATP裂解液包括:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%TCA。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測尿液病原菌的試劑盒,其特征在于,所述中和液包括:123.4mmol/L Tris-base、2.34mmol/L醋酸鎂,pH為8.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測尿液病原菌的試劑盒,其特征在于,所述的ATP檢測試劑包括:16μg/mL熒光素酶、20μg/mL熒光素、20mmol/L Tris-base、2mmol/L醋酸鎂,pH調(diào)至7.6。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測尿液病原菌的試劑盒,其特征在于,所述尿液的包括血尿、乳糜尿、蛋白尿、一般尿液。

7.檢測尿液中病原菌的方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)取尿液900μL,加入100μL體細(xì)胞消化液和5μL的三磷酸腺苷雙磷酸酶,混勻后放入30度水浴鍋中消化10min,然后2000g離心1min,棄沉淀后備用;

(2)取步驟(1)得到的上清液500μL進(jìn)行過柱,過柱所用濾膜為0.45μm孔徑的濾膜,小柱置于2mL套管上,然后6000g離心1min,棄濾液,加入生理鹽水500μL清洗1次,再6000g離心1min,棄濾液,最后12000g甩30s,將小柱換入一個(gè)新的套管中,備用;

(3)在小柱中加入100μL病原菌ATP裂解液,常溫下裂解5min,釋放出病原菌中的ATP,后加入400μL中和液,離心,收集濾液;

(4)取出步驟(3)中濾液50μL于96孔微孔板中并放入orinII微孔板式發(fā)光檢測儀中,把ATP檢測試劑注入該儀器的進(jìn)樣器2中,通過進(jìn)樣器加入100μL熒光素酶反應(yīng)液,加完后測量其發(fā)光值,檢測時(shí)間為5s,記錄其信號(hào)值。

8.權(quán)利要求1~6任一所述檢測尿液病原菌的試劑盒在檢測尿液病原菌中的應(yīng)用。

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