1.一種動物全身性表達(dá)重組人溶菌酶的方法，其特征在于第一步：人溶菌酶BAC克隆選擇Genome Systems公司的GenBank號為RP11-72P21作為目標(biāo)hLZ BAC克隆，該hLZ BAC克隆含有155kb 5’調(diào)控區(qū)—CPSF6冗余基因，4.8kb hLZ基因組序列和6kb 3’調(diào)控區(qū)；
第二步：冗余基因CPSF6的去除：為避免冗余基因CPSF6對hLZ基因的干擾，通過重組方法去除冗余基因CPSF6，具體步驟如下：
（1）hLZ BAC克隆通過電轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)入SW102菌株（該菌株已轉(zhuǎn)入了Red重組系統(tǒng)所需要的exo蛋白、bet蛋白、gam蛋白）；SW102菌株是美國國立衛(wèi)生研究院生物資源分部提供，
（2）選擇CPSF6冗余基因外顯子1為重組置換區(qū)域，設(shè)計同源臂，以pBR322-loxP-Neo質(zhì)粒設(shè)計引物擴(kuò)增loxP-Neo基因片段，同時將同源臂和引物連接，獲得包含如下重組引物的PCR產(chǎn)物，F(xiàn)-Neo：5’-TCT CTG AGG ATG CAG AAA CAA GAC ATT GTT TTT GGT CAT ACG CCG TTC ACA GAA TGC CCG CCG CCT CCA TCC AGT CTA TT -3’；R-Neo：5’-TTA TCT GTG GCT CCA AAA GTC AAA GGA CTT GTT GCA AAT GAG CCC GCA CCT CAG TCG CCT GTC GCC GCA TAC ACT ATT CT-3’，其中，CG CCT CCA TCC AGT CTA TT和GTC GCC GCA TAC ACT ATT CT為引物，其他為同源臂，
（3）重組引物所得到的PCR產(chǎn)物，切膠回收后，電擊轉(zhuǎn)入含有含hLZ BAC的SW102菌株中，發(fā)生重組，獲得去除冗余基因的人溶菌酶pBAC-hLZ-Neo。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物全身性表達(dá)重組人溶菌酶的方法，其特征在于A、 SW102菌株的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)制備
a．初始培養(yǎng)，用槍頭挑取SW102菌株單克隆，加入盛有5ml LB培養(yǎng)基的滅菌管中，32℃，220rpm，過夜培養(yǎng)；
b．?dāng)U大培養(yǎng)，將過夜培養(yǎng)液按大約1:70的比例轉(zhuǎn)移到盛有50ml LB培養(yǎng)基的滅菌三角瓶中，32℃，220rpm，待OD600達(dá)到0.4時，停止培養(yǎng)；
c．將菌液平均分成2份，第一份于42℃（嚴(yán)格）水浴，220rpm，振蕩孵育15min；第二份為對照，32℃水浴，220rpm，振蕩孵育15min；
d．將2份菌液在冰水浴中快速冷卻10min以上，之后于4℃，5000rpm離心10min；
e．棄上清，重新將管置于冰水浴中，加入1ml冰上預(yù)冷的ddH2O，輕輕轉(zhuǎn)動重懸，再加入10ml預(yù)冷的ddH2O，快速倒轉(zhuǎn)幾次，4℃，5000rpm離心5min；
f．棄上清，重新將管置于冰水浴中，加入1ml冰上預(yù)冷的10%甘油+90% ddH2O，輕輕轉(zhuǎn)動重懸，再加入10ml預(yù)冷的10%甘油+90% ddH2O，快速倒轉(zhuǎn)幾次，4℃，5000rpm離心5min；
g．棄上清，加入100-200 μL預(yù)冷的10%甘油+90% ddH2O，重懸沉淀；
h．分裝，每0.5ml的小管中加入40μl，液氮速凍后-80℃保存，備用，該保存、備用物即為感受態(tài)細(xì)胞；
B、 感受態(tài)細(xì)胞與PCR產(chǎn)物的電轉(zhuǎn)化
a．取40 μl含有hLZ BAC克隆的感受態(tài)細(xì)胞與5μl 的PCR產(chǎn)物混合，然后將混合物轉(zhuǎn)移至冰浴充分的0.2 cm電擊杯中，注意不能形成氣泡；
b．將電擊杯周圍的水擦干，置于電擊槽中，啟動細(xì)菌的電擊程序；
c．聽見“噗”的一聲后，電擊轉(zhuǎn)化結(jié)束，向電擊杯中加入0.8ml SOC培養(yǎng)基，用槍吸出，置于1.5ml 離心管，32℃水浴振蕩恢復(fù)培養(yǎng)2小時；
d．涂布于含有相應(yīng)的抗生素的LB板上，32℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜；
e．PCR和Cracking法鑒定陽性克??；
C、帶有同源臂的PCR長片段引物設(shè)計
帶有同源臂的長片段引物一般結(jié)構(gòu)為：在普通PCR引物的5’端各帶上大約50-60bp的同源序列，并可在同源臂和普通引物之間引入酶切位點等序列，修飾hLZ BAC克隆同源臂的設(shè)計如下：選取目標(biāo)序列的5’端緊鄰約50-60bp序列作為5’同源臂，加到一條普通引物的5’端；選取目標(biāo)序列的3’端緊鄰約50-60bp序列，取其反向互補(bǔ)序列加到另一條普通引物的5’端，作為3’同源臂；
D、 陽性克隆的PCR和測序法鑒定
使用P-Neo雜合引物（F：5’-CGC CAG AGA CAA CCT ACT GT-3’和R：5’- GTC GCC GCA TAC ACT ATT CT -3’）鑒定重組后的陽性克隆菌株，如果發(fā)生了重組則可擴(kuò)增出2.5 kb的條帶，未發(fā)生重組的菌株不能擴(kuò)增出條帶（圖1.B）；
PCR產(chǎn)物進(jìn)一步測序，和原序列比對后發(fā)現(xiàn)，重組后產(chǎn)生的DNA置換位點和目標(biāo)設(shè)計完全一致（圖1.C）；人溶菌酶全身性表達(dá)載體pBAC-hLZ-Neo構(gòu)建完成。