1.一種減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌,其特征在于:所述工程菌是其基因組中已敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶)且含有過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的銅綠假單胞菌(Pseudomas aeruginosa),命名為PAO1aroA;其中,所述過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.權(quán)利要求1所述減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌的構(gòu)建方法,步驟是:
利用假單胞菌噬菌體的重組酶構(gòu)建的同源重組系統(tǒng),將一段50bp-100bp的攜帶短同源臂的抗性基因DNA片段整合到銅綠假單胞菌(Pseudomas aeruginosa)的染色體上,實(shí)現(xiàn)敲除芳香族氨基酸合成的基因aroA(5-烯醇丙酮酞莽草酸-3-磷酸合成酶),獲得減毒銅綠假單胞菌,再構(gòu)建包含鼠李糖脂合成的轉(zhuǎn)運(yùn)酯酶基因EstA和鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物基因RhlAB,慶大霉素抗性基因,接合轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)oriT和一個(gè)廣譜型復(fù)制子pBBRI的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pBBR1-oriT-rhlAB-estA-genta,并將該過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入獲得的減毒銅綠假單胞菌中,即得到通過(guò)多拷貝質(zhì)粒增加該菌鼠李糖脂合成相關(guān)基因的拷貝數(shù)實(shí)現(xiàn)的減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌。
3.一種用于構(gòu)建減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌的重組酶表達(dá)質(zhì)粒,其特征在于:所述質(zhì)粒是過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pBBRI-rha-redgam-BAS-kan,該質(zhì)粒包含鼠李糖脂合成的轉(zhuǎn)運(yùn)酯酶基因EstA和鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物基因RhlAB,慶大霉素抗性基因,接合轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)oriT和一個(gè)廣譜型復(fù)制子pBBRI,其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;所述質(zhì)粒不需要抗生素的選擇壓力,能在構(gòu)建的減毒的銅綠假單胞菌中穩(wěn)定復(fù)制。
4.權(quán)利要求1所述減毒高產(chǎn)鼠李糖脂的重組綠膿桿菌工程菌在工業(yè)化生產(chǎn)鼠李糖脂中的應(yīng)用。