本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類(lèi)新型的含有酰腙結(jié)構(gòu)的苯環(huán)丙胺類(lèi)化合物、它們的制備方法及其作為組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶抑制劑在制備抗腫瘤先導(dǎo)化合物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤是威脅人類(lèi)健康的頭號(hào)重大疾病。世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究中心發(fā)布的《世界癌癥報(bào)告》警告全球癌癥發(fā)病率猛增，預(yù)計(jì)2020年，全世界癌癥發(fā)病率將增加50％，每年增加1500萬(wàn)新病例。全國(guó)腫瘤登記中心發(fā)布的《2012年中國(guó)腫瘤登記年報(bào)》表明，中國(guó)近20年來(lái)，每年新發(fā)腫瘤病例約312萬(wàn)例，平均每天8550人。目前中國(guó)的腫瘤發(fā)病率以每年3％-5％的速度增長(zhǎng)。

表觀遺傳學(xué)是指在不改變DNA序列的前提下，通過(guò)對(duì)核苷酸或染色體的可逆性修飾以調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，這種修飾又是可遺傳的?，F(xiàn)代腫瘤學(xué)觀點(diǎn)認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟及多階段的復(fù)雜過(guò)程，不僅與遺傳改變有關(guān)，最近研究表明：表觀遺傳異常是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的原動(dòng)力之一。近年來(lái)，有關(guān)表觀遺傳學(xué)在惡性腫瘤發(fā)病中的作用及以其調(diào)控蛋白為靶點(diǎn)的藥物設(shè)計(jì)已經(jīng)越來(lái)越多的引起了人們的重視，成為抗腫瘤藥物研發(fā)過(guò)程中一個(gè)重要分支和研究領(lǐng)域，尤其是2006年FDA批準(zhǔn)第一個(gè)組蛋白去乙?；敢种苿￢orinostat(伏立諾他，Suberoylanilide hydroxamic acid)的上市，掀起了新的表觀遺傳學(xué)抑制劑研究熱潮。

組蛋白賴(lài)氨酸特異性去甲基化酶1(LSD1)是2004年首次發(fā)現(xiàn)的組蛋白修飾酶，在輔酶黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)存在下可特異性的去除H3K4和H3K9的單、雙甲基化。LSD1同時(shí)還可以去除抑癌基因p53、轉(zhuǎn)錄因子E2F1、DNA甲基轉(zhuǎn)移化酶1等非組蛋白底物的甲基化進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn)，在多種腫瘤細(xì)胞(神經(jīng)母瘤細(xì)胞、前列腺癌、肺癌、乳腺癌、胃癌等)中LSD1的表達(dá)量或活性均高于其相對(duì)應(yīng)的正常細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)證明通過(guò)抑制LSD1的表達(dá)量或活性可有效的抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，例如Schulte等報(bào)道LSD1與神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化密切相關(guān)，發(fā)現(xiàn)低分化的神經(jīng)母細(xì)胞瘤中LSD1高表達(dá)，利用siRNA技術(shù)敲除LSD1后，瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受抑制，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)LSD1可以抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)(Nature.2007.449(7158):105-108)。

目前，已報(bào)道的LSD1抑制劑可分為多肽類(lèi)、苯環(huán)丙胺類(lèi)、多胺類(lèi)等。其中，苯環(huán)丙胺類(lèi)化合物具有較好的選擇性和對(duì)LSD1的抑制活性，引起了廣泛的關(guān)注。目前，葛蘭素史克(GSK)公司開(kāi)發(fā)的GSK2879552和西班牙Orzyon公司開(kāi)發(fā)的ORY-1001已進(jìn)入臨床階段研究，展現(xiàn)了良好的抗腫瘤價(jià)值。(其結(jié)構(gòu)如下)

因此，開(kāi)發(fā)新的具有良好組蛋白賴(lài)氨酸酶抑制活性的化合物，是靶向抗腫瘤藥物研究的重要內(nèi)容。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一類(lèi)未經(jīng)報(bào)道、新的含酰腙結(jié)構(gòu)的苯環(huán)丙胺類(lèi)化合物，另一目的在于提供其制備方法及其作為抗腫瘤藥物在抑制組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶方面的應(yīng)用。

具體技術(shù)方案如下：

首先，本發(fā)明提供了一種通式(I)所示的新型含酰腙結(jié)構(gòu)的苯環(huán)丙胺類(lèi)化合物。

本發(fā)明所述的通式(I)具有如下特征：

R₁為苯環(huán)上任意位置單取代或雙取代基，取代基選氫、C1-5烷基、鹵素、甲氧基、羥基；

R₂為氫、C1-5烷基；

R₃為苯基、吡啶基、萘基、噻吩基、呋喃基、吲哚基、鹵代苯基；被C1-5烷基取代的苯基；被硝基取代的苯基；被甲氧基取代的苯基；被乙氧基取代的苯基；被羥基取代的苯基；被氨基取代的苯基；被C1-3烷基、氨基取代的苯基；被羥基、二甲基、氨基取代的苯基；被羥基、鹵素取代的苯基；被羥基、氨基取代的苯基；被羥基、甲氧基取代的苯基；被羥基、乙氧基取代的苯基；被羥基取代的萘基。

所述鹵素優(yōu)選氟、氯或溴。優(yōu)選如下取代基：

R₁為氟，在苯環(huán)上雙取代；

R₂為氫、甲基；

R₃為苯、呋喃基、噻吩基、單鹵代苯基、被氨基單取代的苯基；被硝基單取代的苯基；被甲氧基取代的苯基；被羥基取代的苯基；被羥基、二甲基、氨基取代的苯基；被羥基、鹵素取代的苯基；被羥基、氨基取代的苯基；被羥基、甲氧基取代的苯基；被羥基、乙氧基取代的苯基。

其次，本發(fā)明提供了通式(I)所示化合物的制備方法。其制備方法可用通如下路線進(jìn)行描述。

(1)在溶劑中，將化合物1和溴乙酸甲酯，在堿性物質(zhì)作用下，室溫中攪拌，反應(yīng)結(jié)束后除去溶劑，有機(jī)溶劑萃取、水洗、干燥，即可得到化合物2的粗品。所得粗品可不經(jīng)純化直接進(jìn)行下步反應(yīng)。

本反應(yīng)中，所用溶劑可以是四氫呋喃、乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯仿、二氧六環(huán)中之一或其混合溶劑。所用堿性物質(zhì)可以是三乙胺、N,N-二異丙基乙基胺、碳酸鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀中的一種或其混合物。

(2)在溶劑中，加入化合物2，冰浴冷卻后加入水合肼，室溫?cái)嚢?，反?yīng)結(jié)束后除去溶劑，有機(jī)溶劑萃取、水洗、干燥、即得到化合物3的粗品，所得粗品不需純化即可進(jìn)行下步反應(yīng)，亦可用相應(yīng)溶劑重結(jié)晶純化。

所用溶劑可以是甲醇、乙醇、乙腈、四氫呋喃、石油醚之一或其混合溶劑。

(3)將化合物3和相應(yīng)的醛、酮溶于溶劑中，回流反應(yīng)，冷卻至室溫后,柱層析純化可得化合物4。

所述溶劑可以是甲醇，乙醇，異丙醇，乙腈或其混合溶劑；所述醛、酮為通式(I)中R₂，R₃相對(duì)應(yīng)之化合物。具體來(lái)說(shuō)，當(dāng)R₂為氫時(shí)，所述化合物為醛，為苯甲醛、呋喃基甲醛、噻吩基甲醛、單鹵代苯甲醛、被氨基單取代的苯甲醛、被硝基單取代的苯甲醛、被甲氧基取代的苯甲醛、被羥基取代的苯甲醛、被羥基、二甲基、氨基取代的苯甲醛、被羥基、鹵素取代的苯甲醛、被羥基、氨基取代的苯甲醛、被羥基、甲氧基取代的苯甲醛、被羥基、乙氧基取代的苯甲醛；當(dāng)R₂為甲基時(shí)，所述化合物為酮，為苯乙酮、呋喃基乙酮、噻吩基乙酮、單鹵代苯乙酮、被氨基單取代的苯乙酮、被硝基單取代的苯乙酮、被甲氧基取代的苯乙酮、被羥基取代的苯乙酮、被羥基、二甲基、氨基取代的苯乙酮、被羥基、鹵素取代的苯乙酮、被羥基、氨基取代的苯乙酮、被羥基、甲氧基取代的苯乙酮、被羥基、乙氧基取代的苯乙酮。

再次，本發(fā)明提供了通式(I)化合物在組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶抑制及抗腫瘤活性方面的用途。

通式(I)化合物按通用方法進(jìn)行組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶抑制活性測(cè)試，大部分化合物IC₅₀小于1uM，其中實(shí)施例21所述化合物4s IC₅₀為91nM，充分說(shuō)明通式(I)化合物在組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶抑制及抗腫瘤活性方面具有很好的活性和價(jià)值。

本發(fā)明中通式(I)的典型化合物，包括但不限于如下化合物：

本發(fā)明創(chuàng)新點(diǎn)在于：提供了一類(lèi)新的苯環(huán)丙胺類(lèi)化合物，研究表明該類(lèi)化合物在組蛋白賴(lài)氨酸酶抑制及抗腫瘤方面具有較好的活性；并提供了一種簡(jiǎn)單可行的合成方法，總收率達(dá)65％以上。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明并非限制本發(fā)明的范圍。

化合物的結(jié)構(gòu)是通過(guò)核磁共振(NMR)和高分辨率質(zhì)譜(HRMS)確定的。所用核磁共振儀為瑞典Bruker DPX-400型超導(dǎo)核磁共振儀，四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)；所用高分辨質(zhì)譜為Waters-Micromass公司Q-Tof質(zhì)譜儀。

實(shí)施例1化合物2a的制備

將(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)環(huán)丙胺(10g,1.0eq.)加入250mL圓底燒瓶中，加入乙腈80mL，加入N,N-二異丙基乙基胺(15.4mL,1.5eq.)，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)后，加入溴乙酸甲酯(5.5mL,1.0eq.)，攪拌過(guò)夜后將體系溶劑減壓除去，加入二氯甲烷(100mL)，水洗(60mL×1)，飽和氯化鈉溶液洗(60mL×1)、有機(jī)相無(wú)水硫酸鈉干燥、抽濾、濃縮，干燥，得到淡黃色油狀液體粗品，粗品可直接用于下步反應(yīng)，收率約為95％。

實(shí)施例2化合物3a的制備

將化合物2a(7.5g,1.0eq.)加入250mL圓底燒瓶中，加入甲醇60mL，冰浴攪拌下分批加入水合肼(8.55mL,3.0eq.)，室溫下攪拌5小時(shí)后將反應(yīng)體系溶劑減壓濃縮，二氯甲烷溶解(100mL)，水洗(40mL×1)，飽和氯化鈉溶液洗(40mL×1)，有機(jī)相無(wú)水硫酸鈉干燥、抽濾、濃縮，干燥，得到白色固體粗品，重結(jié)晶(石油醚/四氫呋喃)得化合物3a，收率約95％。

實(shí)施例3化合物4a的制備

將化合物3a(241mg,1.0eq.)、苯乙酮(180mg,1.5eq.)加入25mL茄型瓶中，加入乙醇5mL，回流5小時(shí)，TLC(5％MeOH/DCM)檢測(cè)，反應(yīng)完全后柱層析純化(3％CH₃OH/DCM)得到化合物4a。收率約69％。

白色固體，熔點(diǎn):47–49℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ10.60(s,1H),7.86–7.66(m,2H),7.49–7.33(m,3H),7.30–7.21(m,1H),7.16–7.05(m,1H),6.90(s,1H),3.78(s,1H),3.41(s,2H),2.46–2.30(m,1H),2.22(s,3H),1.97–1.86(m,1H),1.12–0.91(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ174.28,148.08,138.58,129.48,128.84,126.76,126.42,122.67,117.49,117.32,114.82,99.99,49.87,42.29,24.31,17.69,13.92.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₉F₂N₃O,[M+H]⁺m/z:344.1569,found:344.1574.

實(shí)施例4化合物4b的制備

4-氯苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):39–42℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ10.65(s,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),7.53–7.41(m,2H),7.24(d,J＝10.6Hz,1H),7.10(d,J＝10.3Hz,1H),6.91(s,1H),3.77(s,1H),3.42(s,2H),2.45–2.31(m,1H),2.21(s,3H),1.97–1.87(m,1H),1.10–0.94(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ174.31,168.56,151.02,148.47,146.92,141.02,137.39,134.16,128.80,128.48,128.14,122.64,117.46,114.82,49.81,42.21,24.33,17.66,13.77.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈ClF₂N₃O,[M+Na]⁺m/z:400.0999,found:400.1006.

收率約73％。

實(shí)施例5化合物4c的制備

4-溴苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):39–42℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ10.65(s,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.64–7.57(m,2H),7.24(d,J＝10.5Hz,1H),7.17–7.03(m,1H),6.91(s,1H),3.77(s,1H),3.42(s,2H),2.44–2.32(m,1H),2.21(s,3H),1.96–1.88(m,1H),1.08–0.95(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ174.35,168.58,151.02,148.46,146.99,141.01,137.76,131.73,128.76,128.42,122.89,117.46,114.81,49.82,42.24,24.35,17.69,13.72.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈BrF₂N₃O,[M+H]⁺m/z:422.0674,found:422.0676.

收率約71％。

實(shí)施例6化合物4d的制備

4-氟苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

棕色固體,熔點(diǎn):34–38℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ10.60(s,1H),7.89–7.75(m,2H),7.31–7.20(m,3H),7.14–7.06(m,1H),6.91(s,1H),3.77(s,1H),3.41(s,2H),2.44–2.33(m,1H),2.22(s,3H),1.97–1.87(m,1H),1.10–0.93(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ174.30,168.48,151.00,148.59,147.13,141.21,135.07,129.01,128.92,128.65,128.56,117.47,115.78,,114.80,49.83,42.28,24.35,17.71,13.93.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈F₃N₃O,[M+H]⁺m/z:362.1475,found:362.1484.

收率約67％。

實(shí)施例7化合物4e的制備

4-硝基苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):91–94℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ10.85(s,1H),8.30–8.22(m,2H),8.08–7.96(m,2H),7.32–7.18(m,1H),7.15–7.04(m,1H),6.90(s,1H),3.81(s,1H),3.46(s,2H),2.46–2.33(m,1H),2.28(s,3H),1.96–1.89(m,1H),1.09–0.94(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ174.66,168.96,151.00,148.45,147.75,145.90,144.64,140.93,127.80,127.45,123.95,122.59,117.43,114.80,49.79,42.19,24.37,17.67,13.80.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈F₂N₄O₃,[M+H]⁺m/z:389.1420,found:389.1425.

收率約73％。

實(shí)施例8化合物4f的制備

3-氨基苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):44–47℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ10.48(s,1H),7.31–7.17(m,1H),7.16–7.08(m,1H),7.08–6.94(m,2H),6.94–6.84(m,2H),6.63–6.54(m,1H),5.13(s,2H),3.75(s,1H),3.39(s,2H),2.45–2.31(m,1H),2.14(s,3H),1.96–1.87(m,1H),1.10–0.94(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ174.19,168.25,149.03,148.82,139.25,129.22,122.69,117.48,117.31,115.52,115.26,114.77,114.35,111.82,49.90,42.26,24.34,17.71,14.01.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₂₀F₂N₄O,[M+H]⁺m/z:359.1678,found:359.1683.

收率約68％。

實(shí)施例9化合物4g的制備

2-羥基苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):35–37℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ13.16(s,1H),7.61–7.56(m,1H),7.31–7.20(m,2H),7.14–7.06(m,1H),6.93–6.85(m,3H),3.47(s,2H),2.39–2.35(m,1H),2.33(s,3H),1.95–1.88(m,1H),1.09–0.96(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ168.91,158.99,155.58,140.88,131.49,128.76,122.72,119.76,118.94,117.68,117.45,117.29,114.92,114.75,50.67,42.15,24.29,17.47,13.81.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₉F₂N₃O₂,[M+Na]⁺m/z:382.1338,found:382.1346.

收率約72％。

實(shí)施例10化合物4h的制備

2,5-二羥基苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):190–193℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ12.40(s,1H),8.90(s,1H),7.29–7.20(m,1H),7.15–7.06(m,1H),6.97–6.86(m,2H),6.77–6.68(m,2H),3.46(s,2H),2.42–2.31(m,1H),2.27(s,3H),1.95–1.88(m,1H),1.09–0.96(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6-D6)δ168.83,155.26,151.64,149.53,122.70,119.77,118.92,118.08,117.49,117.32,114.91,114.74,114.20,50.66,42.17,24.26,17.49,13.88.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₉F₂N₃O₃,[M+Na]⁺m/z:398.1287,found:398.1293.

收率約77％。

實(shí)施例11化合物4i的制備

2-羥基-5-氯苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):54–56℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ13.24(s,1H),7.59(d,J＝2.5Hz,1H),7.34–7.20(m,2H),7.15–7.05(m,1H),6.94–6.88(m,2H),3.47(s,2H),2.44–2.35(m,1H),2.34(s,3H),1.94–1.88(m,1H),1.09–0.96(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6-D6)δ169.12,157.67,154.34,148.58,131.02,128.06,122.53,121.25,119.48,117.49,117.32,114.91,114.74,50.59,42.14,24.28,17.49,13.98.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈ClF₂N₃O₂,[M+H]⁺m/z:394.1128,found:394.1136.

收率約82％。

實(shí)施例12化合物4j的制備

2-羥基-5-溴苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):61–63℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d6-D6)δ13.27(s,1H),7.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.46–7.39(m,1H),7.29–7.21(m,1H),7.14–7.06(m,1H),6.94–6.88(m,1H),6.88–6.84(m,1H),3.48(s,2H),2.43–2.37(m,1H),2.34(s,3H),1.95–1.88(m,1H),1.08–0.96(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6-D6)δ169.11,158.08,154.28,133.87,130.85,122.72,121.86,119.95,117.49,117.32,114.91,114.74,110.01,50.60,42.13,24.29,17.48,13.99.HRMS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈BrF₂N₃O₂,[M+Na]⁺m/z:460.0443,found:460.0447.

收率約78％。

實(shí)施例13化合物4k的制備

2-羥基-5-氟苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):97–101℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ12.96(s,1H),7.45–7.39(m,1H),7.30–7.20(m,1H),7.17–7.07(m,2H),6.94–6.86(m,2H),3.48(s,2H),2.39–2.34(m,1H),2.32(s,3H),1.95–1.88(m,1H),1.09–0.96(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ169.06,156.33,155.14,154.45,154.01,140.84,122.70,120.24,118.72,118.24,117.48,114.90,114.73,114.46,50.62,42.15,24.28,17.48,3.97.HRMS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₈F₃N₃O₂,[M+Na]⁺m/z:400.1243,found:400.1245.

收率約74％。

實(shí)施例14化合物4l的制備

2-羥基-3-氨基苯乙酮替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):120–123℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ13.34(s,1H),7.37–7.25(m,1H),7.21–7.13(m,1H),6.98(s,1H),6.92–6.86(m,1H),6.81–6.65(m,2H),4.78(s,2H),3.53(s,2H),2.45–2.40(m,1H),2.35(s,3H),2.02–1.94(m,1H),1.16–1.03(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6-D6)δ168.75,156.35,146.08,137.82,122.75,118.74,118.35,117.49,117.33,116.07,115.62,114.92,114.75,50.69,42.16,24.25,17.46,13.89.HRMS(ESI):Calcd.C₁₉H₂₀F₂N₄O₂,[M+Na]⁺m/z:397.1447,found:397.1450.

收率約79％。

實(shí)施例15化合物4m的制備

2-呋喃基甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):33–35℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.25(d,J＝40.6Hz,1H),7.98(d,J＝118.4Hz,1H),7.80(d,J＝11.5Hz,1H),7.31–7.19(m,1H),7.14–7.04(m,1H),6.94–6.82(m,2H),6.63–6.57(m,1H),3.67(s,1H),3.30(s,2H),2.44–2.26(m,1H),1.95–1.87(m,1H),1.08–0.93(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ168.23,149.88,149.56,145.46,145.28,137.05,133.82,122.62,117.44,114.61,113.67,112.47,51.40,42.18,24.28,17.74.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₆H₁₅F₂N₃O₂,[M+Na]⁺m/z:342.1025,found:342.1032.

收率約74％。

實(shí)施例16化合物4n的制備

2-呋噻吩基甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):32–35℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.27(d,J＝53.2Hz,1H),8.29(d,J＝129.4Hz,1H),7.67–7.58(m,1H),7.43–7.36(m,1H),7.30–7.20(m,1H),7.15–7.05(m,2H),6.96–6.85(m,1H),3.66(s,1H),3.30(s,2H),2.44–2.29(m,1H),1.96–1.88(m,1H),1.08–0.94(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ168.14,142.36,139.33,138.80,131.13,130.59,129.16,128.63,128.29,122.63,117.44,114.90,51.38,42.23,24.34,17.67.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₆H₁₅F₂N₃OS,[M+H]⁺m/z:336.0977,found:336.0985.

收率約81％。

實(shí)施例17化合物4o的制備

3,4-二甲氧基苯甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):55–57℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.22(d,J＝47.3Hz,1H),8.03(d,J＝107.5Hz,1H),7.31–7.19(m,2H),7.19–7.06(m,2H),7.00(t,J＝8.3Hz,1H),6.94–6.87(m,1H),3.82–3.76(m,6H),3.36(s,2H),2.46–2.27(m,1H),1.93(s,1H),1.99–1.84(m,1H),1.12–0.92(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ168.82,155.28,151.65,149.54,122.76,119.78,118.93,118.08,117.49,117.32,114.91,114.74,114.20,55.76,50.67,42.16,24.26,17.48.HR-MS(ESI):Calcd.C₂₀H₂₁F₂N₃O₃,[M+Na]⁺m/z:412.1443,found:412.1447.

收率約65％。

實(shí)施例18化合物4p的制備

2-羥基苯甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):24–27℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.26(d,J＝65.5Hz,1H),8.35(d,J＝75.9Hz,1H),7.63–7.46(m,1H),7.34–7.19(m,2H),7.14–7.05(m,1H),6.95–6.83(m,3H),3.72(s,1H),3.35(s,2H),2.45–2.31(m,1H),1.97–1.88(m,1H),1.10–0.93(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6-D6)δ168.19,157.83,156.86,147.85,141.84,131.71,129.91,127.11,122.63,119.73,119.05,117.45,116.81,114.88,51.25,42.28,24.20,17.33.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₈H₁₇F₂N₃O₂,[M+Na]⁺m/z:368.1181,found:368.1184.

收率約67％。

實(shí)施例19化合物4q的制備

2-羥基-5-氯苯甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):68–71℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.40(s,1H),8.40(s,1H),7.60(d,J＝2.3Hz,1H),7.33–7.19(m,2H),7.15–7.05(m,1H),6.96–6.87(m,2H),3.73(s,1H),3.34(s,2H),2.44–2.30(m,1H),1.97–1.89(m,1H),1.08–0.94(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ168.37,156.38,155.58,145.22,131.10,127.94,125.31,123.35,121.10,118.62,117.48,114.88,114.71,51.23,42.28,40.56,24.20,17.36.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₈H₁₆ClF₂N₃O₂,[M+Na]⁺m/z:402.0791,found:402.0788.

收率約73％。

實(shí)施例20化合物4r的制備

2-羥基-5-溴苯甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):104–107℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.29(d,J＝88.3Hz,1H),8.29(d,J＝84.0Hz,1H),7.72(d,J＝1.9Hz,1H),7.43–7.34(m,1H),7.29–7.19(m,1H),7.14–7.06(m,1H),6.94–6.83(m,2H),3.76–3.71(m,1H),3.35(s,2H),2.47–2.30(m,1H),1.99–1.86(m,1H),1.10–0.96(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d6-D6)δ168.36,156.78,145.07,133.90,130.81,122.99,121.72,119.08,117.49,117.32,114.90,114.73,110.83,51.24,42.28,24.21,17.36.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₈H₁₆BrF₂N₃O₂,[M+Na]⁺m/z:446.0286,found:446.0294.

收率約71％。

實(shí)施例21化合物4s的制備

2-羥基-4-(二乙胺基)苯甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

白色固體,熔點(diǎn):38–42℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.31(s,1H),8.22(s,1H),7.30–7.23(m,1H),7.22–7.05(m,2H),6.93–6.86(m,1H),6.30–6.18(m,1H),6.10(d,J＝2.2Hz,1H),3.34(s,2H),3.31(d,J＝5.6Hz,4H),2.42–2.29(m,1H),1.96–1.89(m,1H),1.10(t,J＝7.0Hz,6H),1.06–0.96(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ167.28,160.00,150.50,149.49,131.94,122.68,117.49,117.32,114.89,114.72,106.77,104.36,104.02,97.90,51.21,44.24,42.34,24.19,17.35,12.98.HR-MS(ESI):Calcd.C₂₂H₂₆F₂N₄O₂,[M+Na]⁺m/z:439.1916,found:439.1922.

收率約81％。

實(shí)施例22化合物4t的制備

2-羥基-4-甲氧基苯甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

棕色固體,熔點(diǎn):40–42℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.36(d,J＝107.5Hz,1H),8.25(d,J＝79.2Hz,1H),7.54–7.35(m,1H),7.30–7.19(m,1H),7.14–7.05(m,1H),6.96–6.86(m,1H),6.56–6.41(m,2H),3.79–3.72(m,3H),3.68(s,1H),3.34(s,2H),2.46–2.28(m,1H),1.99–1.85(m,1H),1.13–0.93(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ167.84,162.42,159.73,148.33,131.50,122.67,117.48,117.31,114.89,114.72,112.13,106.85,101.58,55.75,51.22,42.32,24.19,17.34.HR-MS(ESI):Calcd.C₁₉H₁₉F₂N₃O₃,[M+H]⁺m/z:376.1467,found:376.1477.

收率約68％。

實(shí)施例23化合物4u的制備

2-羥基-3-乙氧基苯甲醛替代苯乙酮，方法同實(shí)施例3。

黃色固體,熔點(diǎn):71–73℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d⁶)δ11.12(d,J＝179.8Hz,1H),8.35(d,J＝68.1Hz,1H),7.30–7.20(m,1H),7.20–7.04(m,2H),7.01–6.94(m,1H),6.94–6.87(m,1H),6.86–6.76(m,1H),4.08–4.02(m,2H),3.71(s,1H),3.34(s,2H),2.44–2.31(m,1H),1.96–1.89(m,1H),1.38–1.31(m,3H),1.09–0.95(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d⁶)δ168.13,150.90,147.83,147.46,141.95,121.45,119.44,119.32,118.67,117.48,117.31,115.55,114.71,64.55,51.26,42.33,24.20,17.35,15.19.HR-MS(ESI):Calcd.C₂₀H₂₁F₂N₃O₃,[M+Na]⁺m/z:412.1443,found:412.1448.

收率約75％。

實(shí)施例24組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶抑制活性測(cè)試

1.實(shí)驗(yàn)方法：

樣品為實(shí)施例3-23所合成的化合物；樣品儲(chǔ)備液：稱(chēng)取3-5mg樣品置于1.5mL EP管中，然后用DMSO配制成20nM的溶液，4℃保存放置，實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)所需濃度用DMSO稀釋。待測(cè)樣品與LSD1蛋白于室溫孵育后，加入LSD1反應(yīng)底物H3K4me2并孵育反應(yīng)，最后加入熒光染料Amplex和辣根過(guò)氧化酶HRP室溫孵育，在酶標(biāo)儀上激發(fā)光530nm，發(fā)射光590nm檢測(cè)熒光數(shù)值：

試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS軟件計(jì)算IC₅₀值。

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示:

測(cè)試結(jié)果表明，通式(I)化合物具有顯著的組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶抑制活性，明顯優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥物苯環(huán)丙胺(2-PCPA)，絕大部分化合物IC₅₀<1uM，化合物4s達(dá)到了91nM，是對(duì)照藥物2-PCPA的300倍，達(dá)到或優(yōu)于臨床期研究藥物(如GSK2879552，1.7uM)。結(jié)論：本發(fā)明中通式(I)化合物對(duì)組蛋白賴(lài)氨酸去甲基化酶1具有顯著的抑制活性。