1.一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于它是按照以下步驟進(jìn)行的:
一、選取苗高為5~6cm的白樺組培苗,在超凈工作臺(tái)中將外植體葉片和莖段置于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)培養(yǎng)7~10天;
二、將步驟一在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的愈傷組織取出,轉(zhuǎn)移至含目的基因序列的根癌農(nóng)桿菌侵染液中,用真空泵中抽真空5~10min后,置于共培養(yǎng)的培養(yǎng)基上,黑暗處理48h;其中,侵染液OD600為0.6~0.8,
三、將步驟二黑暗處理后的愈傷組織置于加入抑菌劑的轉(zhuǎn)基因抗性篩選培養(yǎng)基上于25℃光照條件下進(jìn)行篩選培養(yǎng)40~50天,得到白樺抗性苗;
四、將步驟三的白樺抗性苗轉(zhuǎn)移到加選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)37~42天后,進(jìn)行分子檢測(cè)驗(yàn)證,檢測(cè)驗(yàn)證正確后,即表明獲得轉(zhuǎn)基因白樺苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于步驟一中所述的生根培養(yǎng)基含WPM、0.2mg/L的NAA、30g/L的蔗糖和3.0mg/L Phytagel,pH=5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于步驟一中所述的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基含WPM、0.8mg/L的6-BA、0.5mg/L的GA3、0.02mg/L的NAA、30g/L的蔗糖和3.0mg/L的Phytagel,pH=5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于步驟二中所述的共培養(yǎng)的培養(yǎng)基含WPM、1.0mg/L的6-BA、30g/L的蔗糖和3.0mg/L的Phytagel,pH=5.8。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于步驟二中所述的侵染液含WPM、150μM的As、30g/L的蔗糖,pH=5.8。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于步驟三中所述的篩選培養(yǎng)基含WPM、1.0mg/L的6-BA、30g/L的蔗糖、3.0mg/L的Phytagel、選擇劑和抑制劑,pH=5.8。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于選擇劑為30~50mg/L的卡那霉素,抑制劑為300~500mg/L的氨芐霉素。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于步驟四中所述的生根培養(yǎng)基含WPM、0.2mg/L的NAA、30g/L的蔗糖、3.0mg/L的Phytagel、選擇劑和抑制劑,pH=5.8。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于選擇劑為30~50mg/L的卡那霉素,抑制劑為300~500mg/L的氨芐霉素。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速高效的白樺轉(zhuǎn)基因方法,其特征在于步驟四選擇的抗性苗株高為1.5~2.0cm。