本發(fā)明屬于飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑及制備方法。
背景技術(shù)：
近年來國內(nèi)外學者對益生菌的研究報道逐漸增多，益生菌在在提高畜牧養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益上的效果不斷被報道。隨著經(jīng)濟與科技的發(fā)展，人們對動物食品的需求不僅在數(shù)量上，而且在質(zhì)量上都提出了更高的要求，特別是對藥物的殘留提出更加嚴格的限制。益生菌的主要作用是通過動物消化道生物的競爭排斥作用，幫助動物建立有利于宿主的胃腸道微生物區(qū)系，預防腹瀉，降低藥物依賴，促進生長，提高飼料利用率，生產(chǎn)無污染、無公害的畜禽產(chǎn)品。因此，益生菌對于建立一個可持續(xù)的生態(tài)畜牧業(yè)具有廣闊的應用前景。
當前動物益生菌產(chǎn)業(yè)中，缺乏專門針對某一種動物開發(fā)的益生菌產(chǎn)品。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一是提供一種畢赤酵母菌菌株，其可以用于制備提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑。
本發(fā)明的目的之二是提供一種由上述畢赤酵母菌菌種制得的提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑及制備方法。
本發(fā)明的目的之三是上述酵母益生菌制劑的應用。
為此，本發(fā)明第一方面提供了一種畢赤酵母菌菌株，其為畢赤酵母菌dcrp株，保藏編號為：cgmccno.12209。
本發(fā)明第二方面提供了一種用于提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑，其為本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌菌株作為發(fā)酵菌種進行發(fā)酵培養(yǎng)獲得的畢赤酵母泥與脫脂乳粉、海藻糖、甘油和蔗糖混合后獲得的酵母益生菌制劑前體混合物的冷凍干燥產(chǎn)物。
在本發(fā)明的一些實施例中，所述酵母益生菌制劑中畢赤酵母活菌數(shù)含量≥4.5×1010cfu/g。
在本發(fā)明的另一些實施例中，以質(zhì)量份計，所述酵母益生菌制劑前體混合物的組成如下：
本發(fā)明第三方面提供了一種用于提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑的制備方法，所述方法包括：
步驟b，將發(fā)酵菌種接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)獲得畢赤酵母發(fā)酵液，經(jīng)離心處理，獲得畢赤酵母泥；
步驟c，將畢赤酵母泥與脫脂乳粉、海藻糖、甘油和蔗糖的混合后獲得的酵母益生菌制劑前體混合物進行低溫平衡后再進行預凍處理，獲得預凍酵母益生菌制劑前體混合物；
步驟d，將預凍酵母益生菌制劑前體混合物冷凍干燥后獲得酵母益生菌制劑；
其中，所述發(fā)酵菌種由相應的菌株經(jīng)過種子培養(yǎng)獲得；
所述發(fā)酵菌種的相應的菌株為與本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌菌株的16srdna的同源性至少為90％的菌株；
優(yōu)選發(fā)酵菌種的相應的菌株為與本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌菌株的16srdna的同源性至少為95％的菌株；
進一步優(yōu)選發(fā)酵菌種的相應的菌株為如本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌菌株。
在本發(fā)明的一些實施例中，以質(zhì)量份計，所述酵母益生菌制劑前體混合物的組成如下：
根據(jù)本發(fā)明，步驟b中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基以水作為溶劑，每1l水中的添加以下重量的組分：
在本發(fā)明的一些實施例中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的ph值為6.0-6.5。
根據(jù)本發(fā)明，在步驟b的在發(fā)酵培養(yǎng)過程中采用流加的方式補充碳源，并且補充碳源以補料培養(yǎng)基的方式加入。
在本發(fā)明的一些實施例中，所述補料培養(yǎng)基以水作為溶劑，每1l水中添加以下重量的組分：
根據(jù)本發(fā)明，在步驟b中，發(fā)酵菌種以種子培養(yǎng)液的方式加入，種子培養(yǎng)液的加入量以發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計為5v％-10v％。
在本發(fā)明的一些實施例中，種子培養(yǎng)液的ph值為6-6.5。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，低溫平衡的溫度為2-4℃，優(yōu)選為4℃。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，低溫平衡的時間為1-2h，優(yōu)選為1h。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，預凍處理的-80℃至-60℃，優(yōu)選為-80℃。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，預凍處理的時間為12-24h，優(yōu)選為24h。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟d中，冷凍干燥的溫度≤-45℃，優(yōu)選為-50℃至-45℃。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟d中，冷凍干燥的時間≤2h。
本發(fā)明第四方面提供了一種如本發(fā)明第二方面所述的酵母益生菌制劑或如本發(fā)明第三方面所述的方法制備的酵母益生菌制劑在奶牛養(yǎng)殖中的應用，其中，所述酵母益生菌制劑的用量為每頭奶牛每日飼喂5-10g。
本發(fā)明有益技術(shù)效果
本發(fā)明涉及一種奶牛源畢赤酵母菌菌株，其具有提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的作用。本發(fā)明還涉及一種提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑及其制備方法與應用，該酵母益生菌制劑是以畢赤酵母菌菌株作為發(fā)酵菌種進行發(fā)酵培養(yǎng)獲得的畢赤酵母泥與脫脂乳粉、海藻糖、甘油和蔗糖混合后獲得的酵母益生菌制劑前體混合物的冷凍干燥產(chǎn)物，其中的畢赤酵母活菌數(shù)含量≥4.5×1010cfu/g。將該酵母益生菌制劑用于飼喂奶牛，結(jié)果表明，該制劑具有促進奶牛泌乳量增加，調(diào)節(jié)奶牛瘤胃微生物結(jié)構(gòu)，改善奶牛瘤胃發(fā)酵的作用，這為奶牛酵母益生菌在飼料加工中的應用奠定基礎(chǔ)。
附圖說明
圖1為畢赤酵母在固體培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)36h的生長圖；
圖2示出本發(fā)明的奶牛源畢赤酵母活菌制劑；
圖3示出實施例2中畢赤酵母菌制劑對奶牛泌乳量的影響；
圖4示出實施例2中畢赤酵母菌制劑對牛乳中體細胞數(shù)目的影響。
菌種保藏
畢赤酵母菌(pichiakudriavzevii)，由北京科技大學分離、鑒定，已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏(簡稱：cgmcc；地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所)進行保藏，保藏日期：2016年3月14日，保藏編號：cgmccno.12209。本發(fā)明中該菌株在被命名為畢赤酵母菌dcrp株(pichiakudriavzeviistraindcrp)。
具體實施方式
為使本發(fā)明容易理解，下面將詳細說明本發(fā)明。
如前所述，當前動物益生菌產(chǎn)業(yè)中，缺乏專門針對某一種動物開發(fā)的益生菌產(chǎn)品。為開發(fā)專門針對奶牛的母益生菌產(chǎn)品，本發(fā)明人首先根據(jù)奶牛瘤胃微生物生理特性對高產(chǎn)奶牛的瘤胃液酵母菌進行初步篩選，結(jié)合生理指標和分子生物學技術(shù)確定篩選微生物的種屬；本發(fā)明人經(jīng)過不懈的研究探索，終于從高產(chǎn)奶牛瘤胃液中成功分離得到一株具有提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)作用的酵母屬益生菌菌株，經(jīng)分離鑒定為畢赤酵母菌dcrp株(pichiakudriavzeviistraindcrp)，檢測結(jié)果表明，該菌株具有提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的能力。進一步研究結(jié)果表明，以該畢赤酵母菌dcrp株為發(fā)酵菌種，經(jīng)發(fā)酵、離心、清洗、添加保護劑、冷凍干燥等步驟可以制得奶牛源酵母菌制劑。經(jīng)試驗，該制劑對泌乳中期奶牛有促進泌乳量增加，調(diào)節(jié)奶牛瘤胃微生物結(jié)構(gòu)，改善奶牛瘤胃發(fā)酵的作用。本發(fā)明正是基于上述發(fā)現(xiàn)作出的。
因此，本發(fā)明第一方面所涉及的畢赤酵母菌菌株為奶牛源奶牛源酵母益生菌，具有提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)作用，其采用以下固體篩選培養(yǎng)基進行篩選和培養(yǎng)獲得，該固體篩選培養(yǎng)基的組成如下(1000ml去離子水中)：
本發(fā)明篩選用于提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的畢赤酵母菌菌株的方法包括以下步驟：
(1)奶牛進食2h后無菌條件下抽取奶牛瘤胃液，置于無菌離心管中在冰浴條件下轉(zhuǎn)移至實驗室備用，在無菌條件下對奶牛瘤胃液分別進行梯度為100、10-1、10-2、10-3倍的稀釋。
(2)將稀釋后不同濃度的奶牛瘤胃液分別接種到固體培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)36h，通過菌落形態(tài)觀察并結(jié)合普通顯微鏡鏡檢，挑取菌落進行多次劃線分離，篩選得到一批酵母菌株，通過搖瓶培養(yǎng)獲取純培養(yǎng)物。
經(jīng)真菌rdna-its序列測序并用blast工具與在線數(shù)據(jù)庫比對，該酵母與畢赤酵母pichiakudriavzevii菌株同源性高達99％，確認該酵母為畢赤酵母?；谏鲜?，該菌株被鑒定并命名為畢赤酵母菌dcrp株(pichiakudriavzeviistraindcrp)。該菌株已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏(簡稱：cgmcc)進行保藏，保藏編號：cgmccno.12209。
畢赤酵母菌dcrp株在固體培養(yǎng)基1平板上培養(yǎng)36h的生長圖如圖1所示。
所述畢赤酵母菌dcrp株的rdna-its序列如序列表中的sequenceno1所示，genebank登陸：ku291169(saccharomycescerevisiaestrainumy539internaltranscribedspacer1,partialsequence；5.8sribosomalrnagene,completesequence；andinternaltranscribedspacer2,partialsequence)。
本發(fā)明第二方面所涉及的用于提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑為奶牛源奶牛源酵母益生菌制劑，是以本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌dcrp菌株作為發(fā)酵菌種進行發(fā)酵培養(yǎng)獲得的畢赤酵母泥與脫脂乳粉、海藻糖、甘油和蔗糖混合后獲得的酵母益生菌制劑前體混合物的冷凍干燥產(chǎn)物；優(yōu)選酵母益生菌制劑中畢赤酵母活菌數(shù)含量≥4.5×1010cfu/g。
在本發(fā)明的一些具體實施例中，以質(zhì)量份計，所述酵母益生菌制劑前體混合物的組成如下：
本發(fā)明第三方面所涉及的用于提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑的制備方法，其包括：
步驟b，將發(fā)酵菌種接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)獲得畢赤酵母發(fā)酵液，經(jīng)離心處理，獲得畢赤酵母泥；
步驟c，將畢赤酵母泥與脫脂乳粉、海藻糖、甘油和蔗糖的混合后獲得的酵母益生菌制劑前體混合物進行低溫平衡后再進行預凍處理，獲得預凍酵母益生菌制劑前體混合物；
步驟d，將預凍酵母益生菌制劑前體混合物冷凍干燥后獲得酵母益生菌制劑；
其中，所述發(fā)酵菌種由相應的菌株經(jīng)過種子培養(yǎng)獲得。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，目前，國際上常使用16sribosomalrna(16srrna)來進行細菌的分子鑒定，因此在相似性的比較上可以用16srrna來進行比對而得到其同源性。所以本發(fā)明所使用的發(fā)酵菌株并不限定于本發(fā)明所使用的野外分離株，16srrna基因是細菌染色體上編碼rrna相對應的dna序列，存在于所有細菌的染色體基因組中。
因此，本發(fā)明中，發(fā)酵菌種的相應的菌株為與本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌菌株(即畢赤酵母菌dcrp株)的16srdna的同源性至少為90％的菌株；優(yōu)選發(fā)酵菌種的相應的菌株為與本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌菌株(即畢赤酵母菌dcrp株)的16srdna的同源性至少為95％的菌株；進一步優(yōu)選發(fā)酵菌種的相應的菌株為如本發(fā)明第一方面所述的畢赤酵母菌菌株(即畢赤酵母菌dcrp株)。即在不改變畢赤酵母菌菌株(即畢赤酵母菌dcrp株)的16srdna的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過簡單的篩選或誘變本發(fā)明的畢赤酵母菌dcrp株，獲得與本發(fā)明畢赤酵母菌dcrp株16srdna高度同源的菌株，并獲得相應地具有相同或相似的提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的功能的菌株。
根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，本發(fā)明所涉及的用于提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑的制備方法還包括在步驟b之前種子培養(yǎng)的步驟a：將斜面畢赤酵母菌種接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)，完成畢赤酵母菌的擴增，獲得液體種子培養(yǎng)液(發(fā)酵菌種)。
在本發(fā)明的一些具體實施方式中，將斜面畢赤酵母菌種接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，ph6.0，培養(yǎng)溫度35±0.5℃，以200rmp的轉(zhuǎn)速振蕩培養(yǎng)24-36h，獲得液體種子培養(yǎng)液(發(fā)酵菌種)。
在本發(fā)明的一些實施例中，在所述種子培養(yǎng)液中，菌種的菌落形成單位(cfu)為(10-30)×108/ml。
根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，所述發(fā)酵培養(yǎng)為菌種游離的發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵菌種以種子培養(yǎng)液的形式接種到發(fā)酵培養(yǎng)基。例如，在步驟b中，發(fā)酵菌種以種子培養(yǎng)液的方式加入，種子培養(yǎng)液的加入量以發(fā)酵培養(yǎng)基的總體積計為5v％-10v％，優(yōu)選為5v％。
在本發(fā)明的一些實施例中，所述種子培養(yǎng)液的ph值為6-6.5，優(yōu)選ph值為6。
上述步驟b中，在4℃條件下，使用高速冷凍離心機以6000rpm的轉(zhuǎn)速對畢赤酵母發(fā)酵液進行分離，離心處理10min后收集畢赤酵母泥。
根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，在上述制備方法中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基以水作為溶劑，每1l水中的添加以下重量的組分：
為獲得較高的畢赤酵母泥的產(chǎn)率，本發(fā)明人對發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化研究，結(jié)果表明發(fā)酵培養(yǎng)基按照以下組成配制有利于發(fā)酵培養(yǎng)，所述發(fā)酵培養(yǎng)基以水作為溶劑，每1l水中的添加以下重量的組分：
在本發(fā)明的一些實施例中，采用40％(wt/v)的氫氧化鈉溶液和36％(v/v)鹽酸溶液調(diào)整發(fā)酵培養(yǎng)基的初始ph值，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的ph值為6.0-6.5；優(yōu)選所述發(fā)酵培養(yǎng)基的ph值為6.0。
上述步驟b在發(fā)酵培養(yǎng)過程中采用流加的方式補充碳源，并且補充碳源以補料培養(yǎng)基的方式加入。
在本發(fā)明的一些實施方式中，所述補料培養(yǎng)基以水作為溶劑，每1l水中添加以下重量的組分：
根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，在步驟c中，向酵母益生菌制劑前體混合物中加入凍干保護劑，攪拌均勻，平衡后再進行預凍處理，獲得預凍酵母益生菌制劑前體混合物。
在本發(fā)明的一些實施例中，所述凍干保護劑與菌泥質(zhì)量比為1:5
在本發(fā)明的一些實施例中，所述凍干保護劑的配比如下：脫脂乳粉10g，海藻糖10g，丙三醇5g，蔗糖8g。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，低溫平衡的溫度為2-4℃，優(yōu)選為4℃。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，低溫平衡的時間為1-2h，優(yōu)選為1h。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，預凍處理的-80℃至-60℃，優(yōu)選為-80℃。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟c中，預凍處理的時間為12-24h，優(yōu)選為24h。
在本發(fā)明的一些具體實施例中，向含有67g酵母泥的酵母益生菌制劑前體混合物中添加33g凍干保護劑，攪拌均勻，平衡60min后放置在-80℃條件下預凍處理后，預凍酵母益生菌制劑前體混合物。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟d中，冷凍干燥的溫度≤-45℃，優(yōu)選冷凍干燥的溫度為-50℃至-45℃，優(yōu)選冷凍干燥的溫度為-50℃。
在本發(fā)明的一些實施例中，在步驟d中，冷凍干燥的時間≤2h。
在本發(fā)明的一些具體實施例中，將預凍酵母益生菌制劑前體混合物置于冷凍干燥機中，開啟冷凍干燥機，等溫度降至-50℃時進行冷凍干燥，24h后取出，獲得酵母益生菌制劑。
在本發(fā)明的一些具體實施例中，制備用于提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑，包括以下步驟：
(1)制備發(fā)酵培養(yǎng)基，用500ml三角瓶裝入配制好的液體發(fā)酵培養(yǎng)基100ml，瓶口用通空氣膜封口后在高溫(121℃)高壓(0.15mpa)下滅菌20min，然后在潔凈工作臺內(nèi)紫外線照射滅菌20min后使用。
(2)種子培養(yǎng)，將斜面畢赤酵母菌種接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，ph6.0，培養(yǎng)溫度30±0.5℃，振蕩培養(yǎng)24-36h，獲得液體種子培養(yǎng)液(發(fā)酵菌種)。
(3)發(fā)酵培養(yǎng)，將發(fā)酵菌種(種子培養(yǎng)液)將液體種子培養(yǎng)液按照5％(v/v)比例接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，ph6.0，培養(yǎng)溫度30±0.5℃，培養(yǎng)30h后獲得畢赤酵母發(fā)酵液。
上述步驟(3)的發(fā)酵過程中，采用流加方式補充碳源。
(4)分離制備畢赤酵母泥，在4℃條件下，使用高速冷凍離心機以6000rpm的轉(zhuǎn)速對畢赤酵母發(fā)酵液進行分離，離心處理10min后收集畢赤酵母泥。
(5)制備預凍酵母益生菌制劑前體混合物，向畢赤酵母泥1000質(zhì)量份中加入60質(zhì)量份的脫脂乳粉、60質(zhì)量份的海藻糖、30質(zhì)量份的甘油以及50質(zhì)量份的蔗糖，混合均勻后，在4℃條件下平衡1h后進行預凍處理，獲得預凍酵母益生菌制劑前體混合物。
(6)冷凍干燥，采用冷凍干燥機將預凍酵母益生菌制劑前體混合物在不高于-45℃條件下進行冷凍干燥24h，獲得酵母益生菌制劑。
本發(fā)明第四方面所涉及的酵母益生菌制劑在奶牛養(yǎng)殖中的應用可以理解為采用酵母益生菌制劑用于奶牛養(yǎng)殖的方法，其包括在奶牛飼料中添加本發(fā)明的酵母益生菌制劑，添加量為每頭奶牛每日飼喂5g本發(fā)明的酵母益生菌制劑。
發(fā)明用于培養(yǎng)基或發(fā)酵培養(yǎng)過程中的“水”，在沒有特別指定的情況下，是指經(jīng)0.45μ濾膜過濾獲得的去離子水。
本發(fā)明中，所述離心分離處理，是指將待分離物裝入離心管中，在一定轉(zhuǎn)速下進行離心分離，然后將上清液與沉淀物分離的過程。
本發(fā)明中所有培養(yǎng)基配制完成后，均在115℃高壓滅菌30min后備用。
為使本發(fā)明更加容易理解，下面將結(jié)合附圖和實施例來進一步詳細說明本發(fā)明，這些實施例僅起說明性作用，并不局限于本發(fā)明的應用范圍。本發(fā)明中所使用的原料或組分若無特殊說明均可以通過商業(yè)途徑或常規(guī)方法制得。下列實施例中未注明具體實驗條件的實驗方法，通常按照常規(guī)實驗條件。
下列實施例中所使用海藻糖、脫脂乳粉、丙三醇和蔗糖均為市售食品級產(chǎn)品。
實施例1
(1)制備畢赤酵母泥
將斜面畢赤酵母菌種接種至液體培養(yǎng)基1中，ph6.0，培養(yǎng)溫度30℃，振蕩培養(yǎng)24h，獲得液體種子培養(yǎng)液，將液體種子培養(yǎng)液按照5％(v/v)比例接種至30l發(fā)酵培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)速0-6小時200rpm，6-12小時400rpm，12小時后600rpm，ph控制不低于6.0，曝氣1l/l·min。采用流加方式補充碳源，培養(yǎng)30h后獲得畢赤酵母發(fā)酵液，在4℃條件下6000rpm，離心10min，獲得畢赤酵母泥。
所述流加方式補充碳源步驟如下：在發(fā)酵開始第12h，開始勻速流加補料液。補加體積為1.5l。
所述補料液培養(yǎng)基通過如下步驟制備：葡萄糖500g/l，酵母膏15g/l，磷酸二氫鉀6g/l,無水硫酸鎂5g/l。
(2)配制保護劑，冷凍干燥前處理
按照質(zhì)量比為1:5(保護劑：菌泥)的比例加入保護劑，4℃條件下平衡1h，預凍，準備進行冷凍干燥。
所述保護劑每100g配比如下：脫脂乳粉30g，海藻糖30g，甘油15g，蔗糖25g。
(3)冷凍干燥
冷凍干燥機開機，預冷至-40℃，樣品在-80℃預凍后放入冷阱中，打開真空泵抽真空，直到系統(tǒng)壓力低于200mtorr,計時24h。
(4)活菌數(shù)檢測
冷凍干燥完成后，將樣品研磨成粉獲得如圖2所示的酵母益生菌制劑；采用稀釋平板計數(shù)，所得的樣品活菌數(shù)為4.5x1010cfu/g。
實施例2
選取3歲齡處于泌乳中期的荷斯坦奶牛，隨機分為2個處理組，每個處理組9頭奶牛，飼喂周期為28天。對照組飼喂添加凍干保護劑的飼料，試驗組飼喂添加畢赤酵母益生菌制劑的飼料，畢赤酵母益生菌制劑量為5g/天·頭，統(tǒng)計試驗第0、7、14、21和28天奶牛產(chǎn)奶量和奶中體細胞數(shù)目，結(jié)果顯示，整個試驗周期中，對照組奶牛產(chǎn)奶量和體細胞數(shù)目基本平穩(wěn)，約為23kg/天·頭和4.5×104個/ml，而飼喂添加畢赤酵母益生菌制劑的試驗組，從第7天開始奶牛產(chǎn)奶量明顯增加且奶中體細胞數(shù)目顯著下降，在28天時產(chǎn)奶量約為33kg/天·頭。
考察上述畢赤酵母菌制劑對奶牛泌乳量的影響，結(jié)果如圖3所示。從圖3可以看出，與對照相比提高約50％。
考察上述畢赤酵母菌制劑對牛乳中體細胞數(shù)目的影響，結(jié)果如圖4所示。從圖4可以看出，牛乳中體細胞數(shù)目8×103個/ml，與對照相比降低約80％。
應當注意的是，以上所述的實施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。通過參照典型實施例對本發(fā)明進行了描述，但應當理解為其中所用的詞語為描述性和解釋性詞匯，而不是限定性詞匯?？梢园匆?guī)定在本發(fā)明權(quán)利要求的范圍內(nèi)對本發(fā)明作出修改，以及在不背離本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)對本發(fā)明進行修訂。盡管其中描述的本發(fā)明涉及特定的方法、材料和實施例，但是并不意味著本發(fā)明限于其中公開的特定例，相反，本發(fā)明可擴展至其他所有具有相同功能的方法和應用。
sequencelisting
<110>北京科技大學
<120>提高奶牛產(chǎn)奶量和牛乳品質(zhì)的酵母益生菌制劑及制備方法
<130>none
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<213>畢赤酵母菌dcrp株的rdna-its序列
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