本發(fā)明涉及羅漢果提取物的生產(chǎn)方法，具體涉及一種從羅漢果鮮果中同時(shí)提取無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷和水溶性膳食纖維的方法。

背景技術(shù)：

羅漢果甜度高，熱量低，具有提高免疫力、保護(hù)肝臟、降血糖、抗癌、抗氧化等保健功能，因此，國(guó)家衛(wèi)生部、中醫(yī)藥管理局將其列入第一批“既是食品又是藥品的品種名單”，同時(shí)，又將其作為理想的天然甜味劑來(lái)源。

目前，我國(guó)羅漢果提取物行業(yè)發(fā)展已經(jīng)初具規(guī)模，主要是以提取和分離羅漢果甜苷為主。然而，羅漢果中的有益成分除了羅漢果甜苷以外，還有其它重要成分，如膳食纖維。單純利用羅漢果中的甜苷，而把其它成分當(dāng)成廢棄物或廢水處理，是當(dāng)前羅漢果提取物行業(yè)的一貫做法，不僅對(duì)環(huán)境造成了嚴(yán)重的污染，增加了污水治理的成本，同時(shí)也是對(duì)羅漢果資源的巨大浪費(fèi)。另外，由于農(nóng)藥的濫用、生產(chǎn)工藝的落后以及加工設(shè)備的粗糙等原因，市面上的羅漢果提取物大多數(shù)難以達(dá)到低農(nóng)殘、甚至無(wú)農(nóng)殘的質(zhì)量要求。

cn105273033a公開(kāi)了一種從羅漢果中提取羅漢果甜苷的方法，是以羅漢果干果為原料，通過(guò)粉碎、微波輔助提取、超濾、納濾、濃縮、干燥等步驟，得到羅漢果甜苷。但是，由于該方法對(duì)原料中的農(nóng)藥殘留沒(méi)有針對(duì)性的處理，產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)法達(dá)到無(wú)農(nóng)殘的有機(jī)標(biāo)準(zhǔn)，且該方法只能得到羅漢果甜苷，羅漢果中的其它成分并未加以利用。

cn102742801a公開(kāi)了羅漢果高膳食纖維果粉及其制備方法，是通過(guò)將羅漢果粉碎、提取、濃縮、醇沉、堿處理、酸處理等步驟，得到羅漢果高膳食纖維素果粉。但是，由于該方法大量使用有機(jī)溶劑和酸堿，污染大，成本高，且并未分離出羅漢果中最具經(jīng)濟(jì)價(jià)值的羅漢果甜苷，不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)的要求。

cn105124520a公開(kāi)了用于從羅漢果提取物去除農(nóng)藥殘留物的方法，是將粉狀的羅漢果提取物溶于水后，通過(guò)顆?；钚蕴康闹?。但是，該方法去除農(nóng)藥殘留僅使用活性炭一種途徑，因此，去除農(nóng)殘的種類和去除的效果都有限。此外，該方法不涉及甜苷和膳食纖維的分離，且該方法需要以羅漢果提取物成品為原料，成本高昂，不適宜產(chǎn)業(yè)化。

cn104431841a公開(kāi)了一種降低羅漢果提取物中多菌靈的方法，是將活性炭柱先用堿和酸處理，再將羅漢果提取物水溶液流過(guò)活性炭柱，洗脫，納濾，真空濃縮，噴霧干燥，得到多菌靈含量低于0.01mg/kg，羅漢果甙v含量高于40%的提取物。但是，該方法僅對(duì)羅漢果提取物中的多菌靈一種農(nóng)藥殘留有部分去除的作用，且提取物羅漢果甙v的含量偏低。此外，該方法只能得到含有羅漢果甜甙v的羅漢果提取物，并不能得到羅漢果膳食纖維。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種產(chǎn)品收率、純度高、無(wú)農(nóng)殘，且工藝過(guò)程可操作性強(qiáng)，成本低，零污染，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)的從羅漢果中同時(shí)提取無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷和水溶性膳食纖維的方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案如下：一種同時(shí)提取無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷和水溶性膳食纖維的方法，包括以下步驟：

（1）榨汁提取：將羅漢果鮮果洗凈，室溫下榨汁，果渣再用水淋洗，合并果汁和淋洗液，得提取液；

（2）煮沸：將步驟（1）所得提取液煮沸，冷卻至室溫，離心，得離心液；

（3）層析：將步驟（2）所得離心液通過(guò)前后串聯(lián)的氧化鋁層析柱和活性炭層析柱，收集流出液；

（4）超濾：將步驟（3）所得流出液用超濾膜過(guò)濾，分別收集超濾截留液和超濾透過(guò)液；

（5）納濾、濃縮：將步驟（3）所得超濾透過(guò)液用納濾膜過(guò)濾，分別收集納濾截留液和納濾透過(guò)液，將納濾截留液減壓濃縮，干燥，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷；將所得納濾透過(guò)液與步驟（4）所得超濾截留液合并，減壓濃縮，干燥，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果水溶性膳食纖維。

優(yōu)選地，步驟（1）中，所述羅漢果鮮果中，羅漢果甜苷v的質(zhì)量含量為0.3～0.8%，水溶性膳食纖維的質(zhì)量含量為5～10%。所述水溶性膳食纖維包括大分子的果膠、聚葡萄糖等，以及小分子的低聚果糖、低聚異麥芽糖、低聚乳糖、低聚木糖等。

優(yōu)選地，步驟（1）中，所述榨汁的方式為螺旋擠壓式榨汁。榨汁所使用的設(shè)備為螺旋擠壓式榨汁機(jī)，該榨汁機(jī)榨汁效率高，果渣容易淋洗及榨干；所述洗凈的目的是除去鮮果表面大部分的農(nóng)殘；室溫榨汁的目的是避免高溫榨汁時(shí)雜質(zhì)的浸出。

優(yōu)選地，步驟（1）中，用于淋洗的水的用量為鮮果質(zhì)量的0.8～1.2倍。

優(yōu)選地，步驟（2）中，所述煮沸的時(shí)間為10～30min。煮沸的目的是使提取液中的蛋白質(zhì)在高溫下變性、凝聚，若煮沸的時(shí)間過(guò)短，則蛋白質(zhì)來(lái)不及變性而無(wú)法凝聚；若煮沸的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則提取液中的水溶性膳食纖維和羅漢果甜苷易焦糊甚至碳化。

優(yōu)選地，步驟（2）中，所述離心的轉(zhuǎn)速為8000～30000r/min。離心的目的是通過(guò)離心力將液固分離，若離心的轉(zhuǎn)速過(guò)慢，則難以達(dá)到徹底固液分離的目的；若離心的轉(zhuǎn)速過(guò)快，則易造成設(shè)備的損耗。

優(yōu)選地，步驟（3）中，所述氧化鋁層析柱中氧化鋁的用量為羅漢果鮮果質(zhì)量的0.05～1.00倍（更優(yōu)選0.08～0.50倍，更進(jìn)一步優(yōu)選0.1～0.2倍）。若氧化鋁的用量過(guò)少，則雜質(zhì)的吸附不夠徹底；若氧化鋁的用量過(guò)多，則易造成物料的浪費(fèi)。

優(yōu)選地，步驟（3）中，所述氧化鋁的粒徑為100～300目。所述氧化鋁的類型為酸性氧化鋁、中性氧化鋁或堿性氧化鋁，氧化鋁層析的目的是吸附離心液中的有機(jī)酸類、黃酮類、多酚類及脂溶性農(nóng)藥殘留等雜質(zhì)成分。

優(yōu)選的，步驟（3）中，所述氧化鋁層析柱的高徑比為1～12:1（更優(yōu)選5～10:1），上柱的流速為0.4～5.0bv/h（更優(yōu)選0.5～2.0bv/h）。若氧化鋁層析柱高徑比過(guò)小或流速過(guò)快，雜質(zhì)都將難以充分吸附；若氧化鋁層析柱高徑比過(guò)大或流速過(guò)小，都將延長(zhǎng)生產(chǎn)的周期并增加生產(chǎn)的成本。

優(yōu)選地，步驟（3）中，所述活性炭層析柱中活性炭的用量為羅漢果鮮果質(zhì)量的0.05～2.00倍（更優(yōu)選0.08～0.50倍，更進(jìn)一步優(yōu)選0.1～0.2倍）。若活性炭的用量過(guò)少，則雜質(zhì)將吸附得不徹底；若活性炭的用量過(guò)多，則易造成物料的浪費(fèi)。

優(yōu)選地，步驟（3）中，所述活性炭的粒徑為10～500目（更優(yōu)選100～400目）。

優(yōu)選地，步驟（3）中，所述活性炭為木質(zhì)活性炭或煤質(zhì)活性炭?；钚蕴繉游龅哪康氖俏窖趸X流出液中的色素和水溶性農(nóng)藥殘留等雜質(zhì)成分。由于活性炭對(duì)脂溶性農(nóng)殘幾乎沒(méi)有吸附能力，且極易被脂溶性農(nóng)殘污染而喪失對(duì)水溶性農(nóng)殘的吸附，因此，必須將氧化鋁層析柱置于活性炭層析柱的前面。

優(yōu)選地，步驟（3）中，所述活性炭層析柱的高徑比為1～10:1（更優(yōu)選4～8:1），上柱的流速為0.4～5.0bv/h（更優(yōu)選0.5～2.0bv/h）。若活性炭層析柱高徑比過(guò)小或流速過(guò)快，雜質(zhì)都將難以充分吸附；若活性炭層析柱高徑比過(guò)大或流速過(guò)小，都將延長(zhǎng)生產(chǎn)的周期并增加生產(chǎn)的成本。

優(yōu)選地，步驟（4）中，所述超濾膜的截留分子量為1～5萬(wàn)da，過(guò)濾的壓力為0.1～1.2mpa（更優(yōu)選0.5～1.0mpa）。超濾的目的是除去分子量比羅漢果甜苷大的物質(zhì)，因此，超濾截留液中的主要成分為果膠、聚葡萄糖等。若超濾膜截留分子量過(guò)小，羅漢果甜苷將部分保留在超濾截留液中，將造成羅漢果甜苷的收率偏低；若超濾膜截留分子量過(guò)大，部分大分子量的雜質(zhì)將和羅漢果甜苷分子同時(shí)穿過(guò)超濾膜，且后續(xù)步驟無(wú)法分離，造成羅漢果甜苷的純度偏低。

優(yōu)選地，步驟（5）中，所述納濾膜的截留分子量為1000～5000da（更優(yōu)選2000～3000da），過(guò)濾的壓力為0.2～2.0mpa（更優(yōu)選1.0～1.5mpa）。納濾的目的是除去分子量比羅漢果甜苷小的物質(zhì)，因此，納濾透過(guò)液中的主要成分為低聚果糖、低聚異麥芽糖、低聚乳糖、低聚木糖等。若納濾膜截留分子量過(guò)小，部分小分子量的雜質(zhì)將無(wú)法通過(guò)納濾膜，同羅漢果甜苷一起部分保留在納濾截留液中，造成羅漢果甜苷的純度偏低；若納濾膜截留分子量過(guò)大，部分羅漢果甜苷也將通過(guò)納濾膜，將造成羅漢果甜苷的收率偏低。

優(yōu)選地，步驟（5）中，所述減壓濃縮的真空度為-0.06～-0.09mpa，溫度為65～80℃，濃縮至固含量為20～50%（更優(yōu)選25～40%）。

優(yōu)選地，步驟（5）中，所述干燥為微波干燥，微波干燥的溫度為60～80℃，微波干燥的真空度為-0.05～-0.09mpa，微波干燥的時(shí)間為1～4h。

本發(fā)明方法中的用水均為蒸餾水或純凈水，也可以是步驟（5）減壓濃縮所收集的蒸餾水；由于純凈水或蒸餾水中無(wú)農(nóng)殘，可以避免附加的農(nóng)殘污染。

本發(fā)明方法的原理為：羅漢果榨汁提取液通過(guò)氧化鋁層析柱可以除去有機(jī)酸類、黃酮類、多酚類及脂溶性農(nóng)藥殘留等雜質(zhì)，活性炭層析柱可以除去色素和水溶性農(nóng)藥殘留等雜質(zhì)，而其中的羅漢果甜苷和水溶性膳食纖維成分可以通過(guò)超濾膜和納濾膜的篩選而分離，從而可以得到無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷和無(wú)農(nóng)殘羅漢果水溶性膳食纖維。

本發(fā)明方法的有益效果如下：

（1）經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明方法所得羅漢果甜苷和羅漢果水溶性膳食纖維均無(wú)農(nóng)藥殘留，達(dá)到了歐盟農(nóng)殘限量標(biāo)準(zhǔn)；羅漢果甜苷中苷v的含量高達(dá)90.6%，羅漢果甜苷v的收率高達(dá)96.3%；羅漢果水溶性膳食纖維的產(chǎn)品純度高達(dá)95%，收率高達(dá)91%；

（2）本發(fā)明方法與現(xiàn)有羅漢果提取方法相比，本發(fā)明方法在提取和分離過(guò)程只用少量水作為溶媒，不使用任何有機(jī)溶劑，且通過(guò)最后的濃縮步驟，回收的蒸餾水可以循環(huán)重復(fù)利用，整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程污水零排放，真正做到了清潔生產(chǎn)，綠色、經(jīng)濟(jì)、安全、環(huán)保；本發(fā)明方法設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

本發(fā)明實(shí)施例所使用的羅漢果鮮果購(gòu)于廣西桂林，羅漢果甜苷v的質(zhì)量含量為0.5%，水溶性膳食纖維的質(zhì)量含量為7.2%；原料農(nóng)殘的質(zhì)量含量為0.20ppm，其中，烯酰嗎啉0.05ppm，腈菌唑0.04ppm，氟環(huán)唑0.02ppm，惡霜靈0.03ppm，多菌靈0.06ppm；本發(fā)明方法中的用水均為無(wú)農(nóng)殘的蒸餾水；本發(fā)明實(shí)施例所使用的原料或化學(xué)試劑，如無(wú)特殊說(shuō)明，均通過(guò)常規(guī)商業(yè)途徑獲得。

本發(fā)明實(shí)施例中，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（gc-ms）檢測(cè)農(nóng)殘，采用酶重量法-液相色譜法檢測(cè)羅漢果水溶性膳食纖維的含量，采用高效液相色譜（hplc）外標(biāo)法檢測(cè)羅漢果甜苷v的含量。

實(shí)施例1

（1）榨汁提?。簩?00kg羅漢果鮮果用水洗凈，室溫下用螺旋擠壓式榨汁機(jī)榨汁，果渣再用500kg蒸餾水淋洗，合并果汁和淋洗液，得提取液750kg；

（2）煮沸：將步驟（1）所得提取液煮沸20min，冷卻至室溫，在轉(zhuǎn)速為10000r/min條件下離心，得離心液；

（3）層析：將步驟（2）所得離心液通過(guò)前后串聯(lián)的堿性氧化鋁層析柱和木質(zhì)活性炭層析柱，收集流出液；所述堿性氧化鋁的目數(shù)為100目，用量為50kg，氧化鋁層析柱的高徑比為5:1，上柱的流速為0.5bv/h；所述木質(zhì)活性炭的目數(shù)為100目，用量為60kg，活性炭層析柱的高徑比為5:1，上柱的流速為0.5bv/h；

（4）超濾：將步驟（3）所得流出液用截留分子量為1萬(wàn)da的超濾膜，在壓力為0.6mpa下過(guò)濾，分別收集超濾截留液和超濾透過(guò)液；

（5）納濾、濃縮：將步驟（3）所得超濾透過(guò)液用截留分子量為3000da的納濾膜，在壓力為1.5mpa下過(guò)濾，分別收集納濾截留液和納濾透過(guò)液，將納濾截留液在真空度為-0.08mpa，70℃下，減壓濃縮至固形物含量為25%，在68℃、真空度為-0.09mpa下，微波干燥2h，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷2.62kg；將所得納濾透過(guò)液與步驟（4）所得超濾截留液合并，在真空度為-0.08mpa，70℃下，減壓濃縮至固形物含量為20%，在68℃、真空度為-0.09mpa下，微波干燥2h，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果水溶性膳食纖維34.1kg。

經(jīng)gc-ms檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果甜苷和羅漢果水溶性膳食纖維中400余項(xiàng)農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果均符合歐盟農(nóng)殘限量標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)hplc檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果甜苷中苷v的含量為90.6%，羅漢果甜苷v的收率為95%；經(jīng)酶重量法-液相色譜法檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果水溶性膳食纖維的純度為95%，水溶性膳食纖維的收率為90%。

實(shí)施例2

（1）榨汁提?。簩?500kg羅漢果鮮果用水洗凈，室溫下用螺旋擠壓式榨汁機(jī)榨汁，果渣再用1350kg蒸餾水淋洗，合并果汁和淋洗液，得提取液2100kg；

（2）煮沸：將步驟（1）所得提取液煮沸30min，冷卻至室溫，在轉(zhuǎn)速為20000r/min條件下離心，得離心液；

（3）層析：將步驟（2）所得離心液通過(guò)前后串聯(lián)的中性氧化鋁層析柱和木質(zhì)活性炭層析柱，收集流出液；所述中性氧化鋁的目數(shù)為300目，用量為180kg，氧化鋁層析柱的高徑比為10:1，上柱的流速為2bv/h；所述木質(zhì)活性炭的目數(shù)為200目，用量為150kg，活性炭層析柱的高徑比為8:1，上柱的流速為2bv/h；

（4）超濾：將步驟（3）所得流出液用截留分子量為3萬(wàn)da的超濾膜，在壓力為0.5mpa下過(guò)濾，分別收集超濾截留液和超濾透過(guò)液；

（5）納濾、濃縮：將步驟（3）所得超濾透過(guò)液用截留分子量為2000da的納濾膜，在壓力為1mpa下過(guò)濾，分別收集納濾截留液和納濾透過(guò)液，將納濾截留液在真空度為-0.08mpa，75℃下，減壓濃縮至固形物含量為25%，在70℃、真空度為-0.08mpa下，微波干燥1h，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷10.3kg；將所得納濾透過(guò)液與步驟（4）所得超濾截留液合并，在真空度為-0.08mpa，75℃下，減壓濃縮至固形物含量為25%，在70℃、真空度為-0.08mpa下，微波干燥1h，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果水溶性膳食纖維101.8kg。

經(jīng)gc-ms檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果甜苷和羅漢果水溶性膳食纖維中400余項(xiàng)農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果均符合歐盟農(nóng)殘限量標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)hplc檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果甜苷中苷v的含量為70.1%，羅漢果甜苷v的收率為96.3%；經(jīng)酶重量法-液相色譜法檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果水溶性膳食纖維的純度為92.3%，水溶性膳食纖維的收率為87%。

實(shí)施例3

（1）榨汁提取：將1000kg羅漢果鮮果用水洗凈，室溫下用螺旋擠壓式榨汁機(jī)榨汁，果渣再用1100kg蒸餾水淋洗，合并果汁和淋洗液，得提取液1600kg；

（2）煮沸：將步驟（1）所得提取液煮沸15min，冷卻至室溫，在轉(zhuǎn)速為30000r/min條件下離心，得離心液；

（3）層析：將步驟（2）所得離心液通過(guò)前后串聯(lián)的堿性氧化鋁層析柱和煤質(zhì)活性炭層析柱，收集流出液；所述堿性氧化鋁的目數(shù)為200目，用量為200kg，氧化鋁層析柱的高徑比為5:1，上柱的流速為1bv/h；所述煤質(zhì)活性炭的目數(shù)為400目，用量為150kg，活性炭層析柱的高徑比為6:1，上柱的流速為1bv/h；

（4）超濾：將步驟（3）所得流出液用截留分子量為2萬(wàn)da的超濾膜，在壓力為1.0mpa下過(guò)濾，分別收集超濾截留液和超濾透過(guò)液；

（5）納濾、濃縮：將步驟（3）所得超濾透過(guò)液用截留分子量為2500da的納濾膜，在壓力為1.5mpa下過(guò)濾，分別收集納濾截留液和納濾透過(guò)液，將納濾截留液在真空度為-0.075mpa，75℃下，減壓濃縮至固形物含量為35%，在80℃、真空度為-0.07mpa下，微波干燥3h，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果甜苷6.2kg；將所得納濾透過(guò)液與步驟（4）所得超濾截留液合并，在真空度為-0.075mpa，75℃下，減壓濃縮至固形物含量為35%，在80℃、真空度為-0.07mpa下，微波干燥3h，得無(wú)農(nóng)殘羅漢果水溶性膳食纖維71.6kg。

經(jīng)gc-ms檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果甜苷和羅漢果水溶性膳食纖維中400余項(xiàng)農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果均符合歐盟農(nóng)殘限量標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)hplc檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果甜苷中苷v的含量為75.2%，羅漢果甜苷v的收率為93.2%；經(jīng)酶重量法-液相色譜法檢測(cè)，本實(shí)施例所得羅漢果水溶性膳食纖維的純度為91.5%，水溶性膳食纖維的收率為91%。