技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了豬帶絳蟲重組乳酸乳球菌胞內(nèi)型表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建和鑒定方法，包含TSOL18基因合成和引物設(shè)計、重組質(zhì)粒pMG36e?TSOL18的構(gòu)建及鑒定、豬帶絳蟲重組pMG36e?TSOL18/L.lactis的構(gòu)建及鑒定和蛋白表達(dá)鑒定等步驟。以乳酸乳球菌MG1363為宿主系統(tǒng)進(jìn)行基因優(yōu)化，合成目的基因TSOL18。雙酶切連接至pMG36e載體，構(gòu)建胞內(nèi)型表達(dá)載體pMG36e?TSOL18，再將其電穿孔轉(zhuǎn)化至L.lactis?MG1363，成功構(gòu)建豬帶絳蟲乳酸乳球菌表達(dá)系統(tǒng)pMG36e?TSOL18/L.lactis?MG1363。進(jìn)行PCR鑒定、SDS?PAGE和Western?blot分析TSOL18基因在胞內(nèi)檢測到目標(biāo)蛋白表達(dá)，通過AKTA蛋白純化鑒定及穩(wěn)定性分析，pMG36e?TSOL18質(zhì)粒在L.lactis?MG1363中連續(xù)傳代20代，有較好的遺傳穩(wěn)定性，為豬囊尾蚴病疫苗的開發(fā)與利用提供了有力的參考依據(jù)。

技術(shù)研發(fā)人員：周必英;孫俊超;李想;羅波;江楠
受保護(hù)的技術(shù)使用者：遵義醫(yī)學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：2017.08.04
技術(shù)公布日：2017.11.03