本發(fā)明涉及小麥蛋白的精深加工技術(shù)，具體涉及一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法。
背景技術(shù)：
高f值寡肽是由2-9個(gè)氨基酸殘基所組成且體系中支鏈氨基酸(簡(jiǎn)稱(chēng)bcaa：亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸)與芳香族氨基酸(簡(jiǎn)稱(chēng)aaa：酪氨酸、苯丙氨酸)的摩爾比值f(fischerratio)大于20的肽。高f值寡肽是一類(lèi)具有高支鏈、低芳香族氨基酸組成的生理功能寡肽，因支鏈氨基酸含量較高，所以支鏈氨基酸的生理功能是高f值寡肽的主要功能。具體包括：①促進(jìn)骨骼及皮膚傷口愈合；降低體內(nèi)血糖濃度。②治療精神障礙；增進(jìn)食欲，抗貧血。③維持神經(jīng)系統(tǒng)正常；增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，輔助治療肝昏迷，促進(jìn)t淋巴細(xì)胞的成熟。此外，由于高f值寡肽還具有易吸收、抗氧化性強(qiáng)和降血壓等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于輔助治療肝性腦病、抗疲勞、治療苯丙酮尿癥和改善手術(shù)后病人的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)。
自1976年高f值寡肽首先被yamashitam發(fā)現(xiàn)以來(lái)，就引起了人們極大的興趣，對(duì)其的研究也經(jīng)久不衰。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，對(duì)高f值寡肽的制備技術(shù)及功能機(jī)理的研究也不斷深入，在制備方面取得的成果主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：(1)制備原料越來(lái)越豐富，人們已經(jīng)在大豆蛋白、玉米蛋白粉、乳清蛋白、魚(yú)蛋白、牛乳酪蛋白、魔芋飛粉、多種海產(chǎn)品中分離得到高f值寡肽；(2)所用蛋白酶品種越來(lái)越多，堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、中性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、鏈霉蛋白酶、肌動(dòng)蛋白酶等都被用來(lái)水解原料并取的較高水解度；(3)分離、純化方法越來(lái)越多，人們已將凝膠層析、高效液相色譜分離、離子交換色譜分離、離子交換樹(shù)脂分離、透析等技術(shù)應(yīng)用到高f值寡肽的分離純化中。
目前制備高f值寡肽主要采用“三酶分二次加入酶解”工藝，具體為：以堿性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶“三酶”結(jié)合，通過(guò)兩次酶解工藝生產(chǎn)，第一次酶解是將蛋白質(zhì)水解成苯丙氨酸在肽鏈末端的肽，然后，用另一種蛋白酶脫去鏈末端的苯丙氨酸，使之游離，再用活性炭吸附分離法將被脫下苯丙氨酸即芳香族氨基酸除去，獲得高f值寡肽。例如在《高f值寡肽的制備》(王穎，天津科技大學(xué)，2011年，工程科技ⅰ輯b024.32.1-59)中，以玉米醇溶蛋白為原料，首先用alcalase堿性蛋白酶水解玉米醇溶蛋白，復(fù)合風(fēng)味酶去除水解過(guò)程中產(chǎn)生的苦味，接著用木瓜蛋白酶切斷芳香族氨基酸旁的肽鍵，將其從肽鏈中釋放出來(lái)，最后用活性炭進(jìn)行脫色處理。但該法三次加酶，操作復(fù)雜，并且酶本身也是一種由氨基酸組成的蛋白質(zhì)，不僅會(huì)在寡肽終產(chǎn)品中帶來(lái)不同程度的殘留，而且會(huì)增加終產(chǎn)品純化過(guò)程的難度，難以得到高純度的高f值寡肽，即使得到了高純度寡肽，也會(huì)使成本大幅度增加。
另外，高f值寡肽主要以大豆蛋白和玉米蛋白為原料制備，很少以小麥蛋白為原料。但相對(duì)于大豆和玉米蛋白，對(duì)小麥蛋白過(guò)敏人群更少，并且目前世界上沒(méi)有商業(yè)化種植的轉(zhuǎn)基因小麥，小麥蛋白的食品安全性更高。我國(guó)河南省中東部和黃河以北大面積種植小麥，小麥蛋白來(lái)源豐富。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，以小麥蛋白為原料，來(lái)源豐富，并且用超聲破碎技術(shù)代替堿性?xún)?nèi)切蛋白酶和外切風(fēng)味蛋白酶來(lái)降解小麥蛋白，得到高純度的高f值寡肽。
本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:8～13的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220～250w功率下超聲破碎8～2分鐘，得到寡肽混合物；
超聲波頻率高、能量大，具有能量傳遞的特性。當(dāng)強(qiáng)度超過(guò)一定值時(shí)，它就可以通過(guò)與傳播超聲波的媒質(zhì)的相互作用，改變以致破壞后者的狀態(tài)、性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。
小麥蛋白熱敏性差，加熱到80℃才會(huì)凝膠化，這表明其分子間多以s-s交聯(lián)成牢固的三級(jí)或四級(jí)結(jié)構(gòu)。本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)超聲波能量在一定范圍內(nèi)，能夠斷開(kāi)小麥蛋白質(zhì)分子間s-s鍵，破壞其三級(jí)或四級(jí)機(jī)構(gòu)，并斷開(kāi)芳香族氨基酸的構(gòu)成肽鍵，使芳香族氨基酸的c端或n端大部分暴露出來(lái)，形成寡肽混合物。
在超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽時(shí)，強(qiáng)度過(guò)大會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變形，強(qiáng)度過(guò)低使得氨基酸肽鍵不能按照上述設(shè)定方式斷開(kāi)，因此必須注意控制超聲波功率及超聲時(shí)間。本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選在220～240w功率下超聲破碎8～2分鐘，得到寡肽混合物。
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1.5～3.0％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120-60分鐘，得到酶解粗濾液；
本發(fā)明在寡肽混合物中添加木瓜蛋白酶，其作用是使芳香族氨基酸和少量的其他氨基酸游離出來(lái)。
(3)在步驟(2)所得酶解粗濾液中加入占總體積8～12％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下攪拌，進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)中曾選用工業(yè)專(zhuān)用活性炭，污水處理專(zhuān)用活性炭、食品(味精)專(zhuān)用活性炭和糖用活性炭等多種類(lèi)別的活性炭，在本發(fā)明其他實(shí)驗(yàn)條件相同的情況下，只有糖用活性炭能得到高f值寡肽。這是由于糖類(lèi)活性炭經(jīng)過(guò)特殊工藝加工而成，具有發(fā)達(dá)的打孔和過(guò)濾孔結(jié)構(gòu)，更利于吸附游離的芳香族氨基酸和其他氨基酸，純化寡肽，提高寡肽的f值，同時(shí)，糖類(lèi)活性炭還是優(yōu)良的脫色材料，適用于高f值寡肽溶液的脫色、脫苦。
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
進(jìn)一步的，所述步驟(3)可替換為將步驟(2)所得的酶解粗濾液進(jìn)行物理分離，加入占總體積6～15％的活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理3～4小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液。該步驟中增加物理分離，除去步驟(2)中微量多余的木瓜蛋白酶。這樣做不僅可以避免常規(guī)加熱或者沸騰除木瓜蛋白酶對(duì)寡肽活性的破壞，而且可以節(jié)省能源，保護(hù)環(huán)境。
優(yōu)選地，所述物理分離為選用孔徑為0.05um～1nm超濾膜過(guò)濾。
優(yōu)選地，步驟(4)所述干燥是真空冷凍干燥、減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。
優(yōu)選地，步驟(1)中超聲破碎是在220～240w功率下超聲破碎5～3分鐘，在優(yōu)化的料水質(zhì)量比、木瓜蛋白酶和活性炭使用量條件下，所得寡肽f值在30-39之間。
優(yōu)選地，所述步驟(1)中料水質(zhì)量比為1:10～12。
優(yōu)選地，所述步驟(2)中加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5～3.0％的木瓜蛋白酶。
優(yōu)選地，所述步驟(3)中加入占總體積9～10％的粉末狀糖用活性炭。
優(yōu)選地，所述小麥蛋白是小麥分離蛋白，由于小麥分離蛋白的肽含量比小麥蛋白更高，采用本發(fā)明所述超聲破碎方法時(shí)，更容易獲得高f值寡肽。
進(jìn)一步的，采用超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法所制備的寡肽在生物醫(yī)藥、食品、保健品、香精香料和動(dòng)物飼料中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果：
(1)本發(fā)明以小麥蛋白為原料，來(lái)源豐富，價(jià)格低廉，且小麥蛋白f值高，在3～4之間。
(2)本發(fā)明采用物理方法—超聲波破碎技術(shù)降解小麥蛋白，代替了傳統(tǒng)使用的堿性?xún)?nèi)切蛋白酶和外切風(fēng)味蛋白酶，這不僅減少了酶的使用，簡(jiǎn)化了工藝，而且減少了各種反應(yīng)酶引起的殘留，有利于寡肽的純化過(guò)程，便于得到高f值的寡肽。
(3)本發(fā)明用超聲波破碎代替堿性?xún)?nèi)切蛋白酶和外切風(fēng)味蛋白酶，避免了調(diào)整到適合這些酶所需ph、溫度等環(huán)境的生化物質(zhì)(如磷酸緩沖液、氫氧化鈉等)的使用，節(jié)省了反應(yīng)時(shí)間，減低了成本。
(4)本發(fā)明選用糖用活性炭用于氨基酸的吸附、脫色和脫苦，由于其經(jīng)過(guò)特殊工藝加工而成，具有發(fā)達(dá)的打孔和過(guò)濾孔結(jié)構(gòu)，相對(duì)于其他常規(guī)工業(yè)專(zhuān)用活性炭，污水處理專(zhuān)用活性炭、食品(味精)專(zhuān)用活性炭等，更利于吸附游離的芳香族氨基酸和其他氨基酸，純化寡肽，提高寡肽的f值，同時(shí)，糖類(lèi)活性炭還是優(yōu)良的脫色材料，適用于高f值寡肽溶液的脫色、脫苦。
(5)本發(fā)明采用物理分離除去微量多余的木瓜蛋白酶，該方法不僅可以避免常規(guī)加熱或者沸騰去除木瓜蛋白酶對(duì)寡肽活性的破壞，而且可以節(jié)省能源，保護(hù)環(huán)境。
(6)本發(fā)明利用超聲波技術(shù)制備高f值寡肽，工藝簡(jiǎn)單，成本低，便于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
(7)本發(fā)明制得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比小于13％，f值大于20，且制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液，適用于生物醫(yī)藥、食品、保健品、香精香料和動(dòng)物飼料中。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)特定的具體實(shí)施說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說(shuō)明書(shū)所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。
本發(fā)明所用儀器和原料如下：
小麥蛋白，安徽瑞福祥食品有限公司；
小麥分離蛋白，河北百味生物科技有限公司；
木瓜蛋白酶，廣西南寧龐博生物工程有限公司；
糖用活性炭，常州智廣活性炭有限公司；
粉末狀糖用活性炭，常州智廣活性炭有限公司；
電子天平，al204型號(hào)，上海梅特勒-托利多公司；
多功能數(shù)顯電子恒溫水浴鍋，天津泰斯特儀器有限公司；
氨基酸自動(dòng)分析儀，日立880℃，mitamurarikenkogyo公司；
ph計(jì)，phs-3型精密，上海雷磁儀器廠；
冷凍離心機(jī)，gl-20g-ii，上海安亭科學(xué)儀器廠。
實(shí)施例1
實(shí)施例1提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:8的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎8分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3.0％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)在步驟(2)所得酶解粗濾液中加入占總體積12％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下攪拌，進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表1所示。
表1
(表中，asp為天門(mén)冬氨酸，met為蛋氨酸，thr為蘇氨酸，ser為絲氨酸，glu為谷氨酸，cys為胱氨酸，gly為甘氨酸，ala為丙氨酸，val為纈氨酸，tyr為酪氨酸，leu為亮氨酸，ile為異亮氨酸，his為組氨酸，phe為苯丙氨酸，pro為脯氨酸，arg為精氨酸，lys為賴(lài)氨酸)
f值＝(leu+ile+val)/(tyr+phe)(公式1)
式中氨基酸縮寫(xiě)指分子的摩爾數(shù)，val的分子量是117.2，ile的分子量是131.2，leu的分子量是131.2，phe的分子量是165.2，tyr的分子量是181.2。
根據(jù)表1和公式1計(jì)算f值為22.8，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是11.8％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例1的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例1所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例2
實(shí)施例2提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:8的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎8分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3.0％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積12％的粉末狀糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除粉末狀糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表2所示。
表2
根據(jù)表2和公式1計(jì)算f值為25.6，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.4％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例2的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例2所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例3
實(shí)施例3提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:8的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在250w功率下超聲破碎2分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積8％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表3所示。
表3
根據(jù)表3和公式1計(jì)算f值為21.4，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是12.2％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例3的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例3所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例4
實(shí)施例4提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:9的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎8分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3.0％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積12％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表4所示。
表4
根據(jù)表4和公式1計(jì)算f值為26，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.3％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例4的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例4所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例5
實(shí)施例5提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:9的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在250w功率下超聲破碎2分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)在步驟(2)所得的酶解粗濾液中加入占總體積8％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表5所示。
表5
根據(jù)表5和公式1計(jì)算f值為22，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是12.5％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例5的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例5所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例6
實(shí)施例6提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:10的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎5分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積10％的粉末狀糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除粉末狀糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表6所示。
表6
根據(jù)表6和公式1計(jì)算f值為38.4，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～850，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是8.2％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例6的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例6所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例7
實(shí)施例7提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:10的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎5分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)在步驟(2)所得的酶解粗濾液中加入占總體積10％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性
炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表7所示。
表7
根據(jù)表7和公式1計(jì)算f值為35.8，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～900，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是9.2％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例7的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例7所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例8
實(shí)施例8提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:10的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在240w功率下超聲破碎3分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積9％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表8所示。
表8
根據(jù)表8和公式1計(jì)算f值為36.2，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～900，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是9.1％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例8的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例8所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例9
實(shí)施例9提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:10的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在230w功率下超聲破碎4分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積8％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表9所示。
表9
根據(jù)表9和公式1計(jì)算f值為26.5，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.9％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例9的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例9所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例10
實(shí)施例10提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:11的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在240w功率下超聲破碎3分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積9％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表10所示。
表10
根據(jù)表10和公式1計(jì)算f值為34.6，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.4％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例10的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例10所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例11
實(shí)施例11提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:11的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎5分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積10％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表11所示。
表11
根據(jù)表11和公式1計(jì)算f值為34.8，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.3％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例11的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例11所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例12
實(shí)施例12提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:12的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎5分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3.0％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積10％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表12所示。
表12
根據(jù)表12和公式1計(jì)算f值為33.4，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.3％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例12的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例12所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例13
實(shí)施例13提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:12的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在240w功率下超聲破碎3分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積9％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表13所示。
表13
根據(jù)表13和公式1計(jì)算f值為31.4，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.2％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例13的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例13所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例14
實(shí)施例14提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:13的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在250w功率下超聲破碎2分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積8％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表14所示。
表14
根據(jù)表14和公式1計(jì)算f值為23，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是11.5％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例14的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例14所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例15
實(shí)施例15提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:13的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎8分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3.0％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)在步驟(2)所得的酶解粗濾液中加入占總體積12％的糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表15所示。
表15
根據(jù)表15和公式1計(jì)算f值為25.9，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.7％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例15的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例15所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例16
實(shí)施例16提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:13的比例，取小麥蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在230w功率下超聲破碎5分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積10％的粉末狀糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除粉末狀糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表16所示。
表16
根據(jù)表16和公式1計(jì)算f值為29.3，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是10.6％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例16的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例16所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例17
實(shí)施例17提供一種超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，依次包括如下步驟：
(1)按料水質(zhì)量比為1:10的比例，取小麥分離蛋白，投入水中，制備小麥蛋白懸浮液，在220w功率下超聲破碎4分鐘，得到寡肽混合物；
(2)在步驟(1)中得到的寡肽混合物中添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5％的木瓜蛋白酶，混合均勻，同時(shí)，調(diào)節(jié)ph值為6.5～8.5，恒溫35～55℃條件下保持120～60分鐘，得到酶解粗濾液；
(3)將步驟(2)所得的酶解粗濾液通過(guò)孔徑為0.05um～1nm超濾膜進(jìn)行物理分離，接著加入占總體積10％的粉末狀糖用活性炭，調(diào)節(jié)其ph值為6.0～7.5，置于40～50℃的溫度條件下進(jìn)行脫色、脫苦處理4～3小時(shí)，然后進(jìn)行精過(guò)濾，去除粉末狀糖用活性炭，經(jīng)滅菌處理獲得寡肽精濾液；
(4)對(duì)步驟(3)所得的寡肽精濾液，真空冷凍干燥，即可制得小麥蛋白寡肽粉。
根據(jù)gb/t5009.124-2003《食品中氨基酸的測(cè)定》用氨基酸自動(dòng)分析儀分析所得小麥蛋白寡肽中氨基酸組成，本實(shí)施例制備高f值寡肽氨基酸含量表(mg/ml)如表17所示。
表17
根據(jù)表17和公式1計(jì)算f值為38.6，本實(shí)施例所得產(chǎn)品的分子量為200～850，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比是8.3％，制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。
作為實(shí)施例17的變形，步驟(4)中的“真空冷凍干燥”可替換為減壓蒸發(fā)干燥、流化床氣流干燥和噴霧干燥中的一種。該替換對(duì)本實(shí)施例17所得產(chǎn)品的f值、分子量和游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比無(wú)明顯影響。
實(shí)施例1～17中提供的超聲破碎小麥蛋白制備高f值寡肽的方法，以小麥蛋白為原料，來(lái)源豐富，價(jià)格低廉，且小麥蛋白f值高，在3～4之間；且采用物理方法—超聲波破碎技術(shù)降解小麥蛋白，以代替?zhèn)鹘y(tǒng)方式的堿性?xún)?nèi)切蛋白酶和外切風(fēng)味蛋白酶，這不僅減少了酶的使用，簡(jiǎn)化了工藝，而且減少了各種反應(yīng)酶引起的殘留，有利于寡肽的純化過(guò)程，便于得到高f值的寡肽；用超聲波破碎代替堿性?xún)?nèi)切蛋白酶和外切風(fēng)味蛋白酶，避免了調(diào)整到適合這些酶所需ph、溫度等環(huán)境的生化物質(zhì)(如磷酸緩沖液、氫氧化鈉等)的使用，節(jié)省了反應(yīng)時(shí)間，減低了成本；選用糖用活性炭用于氨基酸的吸附、脫色和脫苦，由于其經(jīng)過(guò)特殊工藝加工而成，具有發(fā)達(dá)的打孔和過(guò)濾孔結(jié)構(gòu)，相對(duì)于其他常規(guī)工業(yè)專(zhuān)用活性炭，污水處理專(zhuān)用活性炭、食品(味精)專(zhuān)用活性炭等，更利于吸附游離的芳香族氨基酸和其他氨基酸，純化寡肽，提高寡肽的f值，同時(shí)，糖類(lèi)活性炭還是優(yōu)良的脫色材料，適用于高f值寡肽溶液的脫色、脫苦；采用物理分離除去微量多余的木瓜蛋白酶，該方法不僅可以避免常規(guī)加熱或者沸騰去除木瓜蛋白酶對(duì)寡肽活性的破壞，而且可以節(jié)省能源，保護(hù)環(huán)境。
實(shí)施例1～17中利用超聲波技術(shù)制備高f值寡肽，工藝簡(jiǎn)單，成本低，便于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
實(shí)施例1～17中制得產(chǎn)品的分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比不大于13％，f值大于20，且制得產(chǎn)品是由高含量的支鏈氨基酸和低含量的芳香族氨基酸組成的寡肽體系，無(wú)苦味、無(wú)異味、透明的溶液。適用于生物醫(yī)藥、食品、保健品、香精香料和動(dòng)物飼料中。
作為實(shí)施例1～16的變形，步驟(1)中所用的“小麥蛋白”都可以用“小麥分離蛋白”代替，由于小麥分離蛋白的肽含量比小麥蛋白更高，采用本發(fā)明所述超聲破碎方法時(shí)，更容易制備分子量為200～1000，游離氨基酸占高f值寡肽質(zhì)量百分比小13％，f值大于20的寡肽。
以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，上述實(shí)施例僅示例性說(shuō)明本發(fā)明的原理及其功效，而并非對(duì)本發(fā)明任何形式上和實(shí)質(zhì)上的限制。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還將可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡熟悉本專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，當(dāng)可利用以上所揭示的技術(shù)內(nèi)容而做出的些許更動(dòng)、修飾與演變的等同變化，均為本發(fā)明的等效實(shí)施例；同時(shí)，凡依據(jù)本發(fā)明得到實(shí)質(zhì)技術(shù)對(duì)上述實(shí)施例所作的任何等同變化的更動(dòng)、修飾與演變，均仍屬于本發(fā)明的技術(shù)方案的范圍內(nèi)。