本發(fā)明涉及一種抗體領(lǐng)域。特別地，其涉及用于治療涉及異常細胞的疾病的治療性抗體領(lǐng)域，該療性抗體包括人類抗體。此外，其涉及結(jié)合egfr和cmet的抗體，其包括多特異性抗體，以及它們在結(jié)合egfr和cmet陽性細胞特別是腫瘤細胞中的用途。

背景技術(shù)：

1、表皮生長因子(egf)受體(egfr)是細胞外蛋白配體的表皮生長因子家族(egf家族)成員的細胞表面受體。egfr也稱為erbb-1受體。該受體在過去被賦予各種名稱(egfr；erbb；erbb1；her1；pig61；mena)。在本發(fā)明中，其在人類中的名稱erbb-1、egfr或her1將可互換使用。egfr是erbb受體家族的成員，具以下四個密切相關(guān)的受體酪氨酸激酶亞家族：erbb-1(egfr)、erbb-2(her2/c-neu；her2)、erbb-3(her?3)和erbb-4(her?4)。

2、egfr存在于細胞表面，可通過結(jié)合其特異性配體(包括表皮生長因子和類型轉(zhuǎn)變生長因子α(tgfα))而被活化。在被其生長因子配體活化后，受體可進行從無活性的主要單體形式到有活性的同二聚體的轉(zhuǎn)變。除了在與配體結(jié)合后形成同二聚體之外，egfr也可與erbb受體家族的另一成員(例如erbb2)配對，以產(chǎn)生活化的異二聚體。二聚體也可在沒有配體結(jié)合的情況下形成，且活化的egfr簇可能在與配體結(jié)合后形成。

3、egfr二聚化刺激內(nèi)在的細胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶(ptk)的活性。此活性誘導(dǎo)數(shù)個導(dǎo)致細胞增殖和分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)。egfr的激酶結(jié)構(gòu)域可交叉磷酸化與其復(fù)合的其他受體的酪氨酸殘基，且本身可以此種方式被活化。

4、涉及egfr的突變已在數(shù)種類型的癌癥中被發(fā)現(xiàn)。其為不斷增加的抗癌療法類別的靶點。此類療法包括用于肺癌的egfr酪氨酸激酶抑制劑(egfr-tki)例如吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)，以及用于結(jié)腸癌和頭頸癌的抗體例如西妥昔單抗(cetuximab)和帕尼單抗(panitumumab)。

5、西妥昔單抗(cetuximab)和帕尼單抗(panitumumab)為抑制受體的單克隆抗體。臨床開發(fā)中的其他單克隆抗體為札魯木單抗(zalutumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)和馬妥珠單抗(matuzumab)。單克隆抗體旨在阻斷細胞外配體-誘導(dǎo)的受體活化，主要是通過阻斷配體與受體的結(jié)合。由于結(jié)合位點被阻斷，信號-誘導(dǎo)分子可能無法有效附著，因此也無法活化下游信號。配體-誘導(dǎo)的受體活化也可通過將未活化受體構(gòu)形(馬妥珠單抗(matuzumab))穩(wěn)定化而抑制。

6、迄今為止，egfr靶向治療已與隨時間發(fā)展出的治療抗性有關(guān)。對egfr-tki抗性的各種機制已被描述。在晚期非小細胞肺癌(nsclc)患者中，抗性機制包括二級或三級突變的發(fā)生(例如，t790m、c797s、l718q、外顯子20插入突變)、替代信號的活化(例如，met、hgf、axl、hh、igf-1r)、異常下游路徑(例如，akt突變、pten缺失)、egfr-tkis-介導(dǎo)的細胞凋亡路徑受損(例如，bcl2-樣11/bim缺失多態(tài)性)和組織學(xué)類型轉(zhuǎn)變。盡管已辨識出一些抗性機制，但其他機制仍有待辨識。此外，就第三代tki抗性機制而言，nsclc的分子異質(zhì)性影響目前發(fā)現(xiàn)的廣譜抗性畸變的貢獻。類似地，接受egfr抗體治療的結(jié)直腸癌患者也會隨著時間發(fā)展出抗性。這可能是通過kras突變的出現(xiàn)而發(fā)生。對于那些沒有kras突變者，met原致癌基因的擴增可能與抗-egfr治療期間的獲得性抗性相關(guān)(bardelli等人,2013；cancerdiscov.jun；3(6):658-73.doi:10.1158/2159-8290.cd-12-0558)。腫瘤可能從一開始就具有抗性，也可能在治療過程中發(fā)展出抗性。在許多egfr陽性癌癥中發(fā)現(xiàn)對egfr-靶向治療的抗性，并已說明本領(lǐng)域需要更有效的egfr癌癥治療，這些治療可以提高護理標(biāo)準(zhǔn)，且在解決egfr-靶向治療抗性的能力方面具有優(yōu)勢。

7、met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)和肝細胞生長因子(hgf)的失調(diào)已在多種腫瘤中報導(dǎo)。已在數(shù)種癌癥中觀察到配體-驅(qū)動的cmet活化。在肺癌、乳癌和多發(fā)性骨髓瘤中觀察到升高的血清和腫瘤內(nèi)hgf(j.m.siegfried等人,ann?thorac?surg?66,1915(1998)；p.c.ma等人,anticancer?res?23,49(2003)；b.e.elliott?et?al.can?j?physiolpharmacol?80,91(2002)；c.seidel等人,med?oncol?15,145(1998))。cmet的過表達、cmet擴增或突變已在各種癌癥如結(jié)直腸癌、肺癌、胃癌和腎癌中報導(dǎo)，并可驅(qū)動非配體-依賴性受體活化(c.birchmeier等人,nat?rev?mol?cell?biol?4,915(2003)；g.maulik等人,cytokine?growth?factor?rev?13,41(2002))。hgf的表達也與hgf/cmet信號路徑的活化有關(guān)，并且也是egfr靶向治療篩選下的腫瘤逃逸機制之一。此外，用cmet酪氨酸激酶抑制劑(如卡馬替尼(capmatinib)或特泊替尼(tepotinib))治療，與cmet畸變逃逸機制的出現(xiàn)有關(guān)。

8、cmet受體是通過將共同前體進行蛋白水解加工而成單通道、雙硫鍵連接的α/β異二聚體而形成的。cmet的細胞外部分由三種結(jié)構(gòu)域類型組成。n-末端區(qū)域折疊形成大的信號素(semaphoring)(sema)結(jié)構(gòu)域，它包含整個α-亞單元和部分β-亞單元。叢蛋白-信號素-整合素(psi)結(jié)構(gòu)域位于sema結(jié)構(gòu)域之后，包括四個雙硫鍵。此結(jié)構(gòu)域經(jīng)由四個免疫球蛋白-叢蛋白-轉(zhuǎn)錄(ipt)結(jié)構(gòu)域(其與免疫球蛋白-樣結(jié)構(gòu)域相關(guān))連接到跨膜螺旋。在細胞內(nèi)，cmet受體包含側(cè)接有獨特的近膜和羧基末端序列的酪氨酸激酶催化域(organ及tsao.therapeutic?advances?in?medical?oncology?3.1_增刊(2011):s7-s19，其通過參考整體并入本文中)。

9、cmet的配體，肝細胞生長因子(hgf；也稱為分散因子)及其剪接異構(gòu)體(nk1、nk2)為已知的cmet受體的配體。hgf于1991年被發(fā)現(xiàn)為有效的有絲分裂原/形態(tài)發(fā)生因子。hgf/cmet信號傳遞路徑在多種癌癥的發(fā)展和進展中扮演重要角色。人類癌癥中hgf或cmet的失調(diào)和/或過度活化與預(yù)后不良有關(guān)。cmet可經(jīng)由過表達、擴增或突變而活化?；罨纱龠M癌癥的發(fā)展、進展、侵襲性生長和轉(zhuǎn)移。cmet可以與hgf相關(guān)和與非hgf-依賴性的方式被活化。非hgf-依賴性活化發(fā)生在cmet過表達的情況下。在沒有配體的情況下，大量的cmet也可能觸發(fā)(異)二聚化和細胞內(nèi)信號傳遞。額外的配體似乎不影響此種cmet過表達細胞的功能。cmet擴增與cmet過表達有關(guān)，并已成為腫瘤亞型的生物標(biāo)志物。

10、hgf在全身廣泛表達，說明此生長因子是系統(tǒng)性可獲得的細胞因子，并來自腫瘤間質(zhì)。cmet活化的正向旁分泌和/或自分泌環(huán)可導(dǎo)致進一步的cmet表現(xiàn)。hgf特異性抗體利妥木單抗(rilotumumab)(amg102)是針對胃癌開發(fā)。第i期和第ii期試驗似乎很有希望，但在預(yù)先-計劃的數(shù)據(jù)監(jiān)測委員會對研究20070622進行安全性審查后，一項以順鉑和卡培他濱(capecitabine)作為胃癌的第一線治療藥物的第iii期研究(rilomet-2)被終止。

11、cmet/hgf信號與egfr-靶向治療抗性的相關(guān)性已促進處理抗性的方法的發(fā)展。迄今為止，基于抗體的方法包括抗-hgf抗體；抗cmet或cmet抗體和cmet/egfr(綜覽于lee等人,2015；immunotargets?and?therapy?4:35–44)，尚未在臨床上有效。cmet抗體奧妥珠單抗(onartuzumab)(metmabtm)和艾貝珠單抗(emibetuzumab)(ly-2875358)已在第ii期臨床試驗中進行評估。其中，奧妥珠單抗(onartuzumab)在與egfr-抑制劑厄洛替尼(erlotinib)聯(lián)合治療時，似乎對結(jié)直腸癌有效。然而，這些結(jié)果無法在隨機第iii期臨床試驗中重復(fù)。metmab是一種針對cmet的單價單克隆抗體(mab)，可阻斷hgf與cmet的結(jié)合以及隨后的路徑活化(jin等人,2008cancer?research第68卷:第4360-68頁)。

12、為了克服抗-egfr、cmet和hgf免疫療法的問題，本發(fā)明提供新穎的雙特異性抗體，其包含可結(jié)合表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合cmet原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。

13、迄今為止，本領(lǐng)域已描述某些雙特異性egfr?x?cmet抗體。castoldi?r.等人(2013)描述一種名為mether1的雙特異性egfr?x?cmet抗體，其具有抗體5d5(或metmab)的cmet結(jié)合位點和西妥昔單抗(cetuximab)的egfr結(jié)合位點。該雙特異性抗體具有2:1的固定egfr及cmet結(jié)合化學(xué)計量比(請見補充附圖)。

14、us20140378664在各種其他抗體中描述一種cmet?x?egfr雙特異性抗體。完整的雙特異性抗體被制造為單一蛋白，其之后經(jīng)蛋白分解切割。該二vh/vl結(jié)構(gòu)域以單鏈fv片段制造。該抗體的結(jié)合于胃癌細胞株中誘導(dǎo)cmet的降解及akt的磷酸化。moores等人(2016)描述一種通過控制fab-臂交換(cfae)而制造，命名為jnj-61186372的雙特異性cmet?x?egfr抗體，于位置405及409處有突變(根據(jù)eu編號)，其可能有免疫原性的潛力。jnj-61186372已顯示具有體內(nèi)活性，使用表達cmet配體hgf的腫瘤細胞株h1975的異種移植模型。已知此腫瘤模型依賴于抗體的adcc活性(ahmed等人，2015)。已報導(dǎo)jnj-61186372具有不平衡的親和力，對cmet的親和力較egfr高約40倍(moores等人(2016))，且已知扎妥木單抗(zalutumumab)衍生的抗-egfr臂會引起輸液相關(guān)反應(yīng)、皮膚疾病等問題。

15、ly3164530為一種雙特異性cmet?x?egfr抗體，其包含西妥昔單抗的egfr結(jié)合域作為單鏈fv片段與cmet結(jié)合抗體ly2875358(艾貝珠單抗(emibetuzumab)；kim及kim?2017)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域融合。其也稱為雙重可變結(jié)構(gòu)域抗體，其包含針對每一抗原的兩個結(jié)合位點。未提供該抗體對于hgf抑制的數(shù)據(jù)。據(jù)報導(dǎo)該抗體結(jié)合且內(nèi)化cmet及egfr而無協(xié)同活性。作者回顧各種cmet、egfr及cmet?x?egfr靶標(biāo)療法，并得出結(jié)論為迄今這些抑制劑于臨床試驗中沒有顯示出顯著的功效。

16、因此，目前需要新穎的雙特異性cmet?x?egfr抗體，包括該等可能具有如本文所述的優(yōu)越特性的抗體。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、在某些方面中，本發(fā)明提供一種雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域，供使用于個體癌癥的治療方法中，該個體已接受過i)第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療。

2、在某些方面中，本發(fā)明提供一種雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域，供使用于個體癌癥的治療方法中，該個體已接受過ii)化療和酪氨酸激酶抑制劑的先前治療。

3、在某些方面中，本發(fā)明提供一種雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域，供使用于個體癌癥的治療方法中，該個體已接受過iii)cmet酪氨酸激酶抑制劑的先前治療。

4、在某些方面中，本發(fā)明提供一種雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域，供使用于個體癌癥的治療方法中，該個體iv)未接受過先前抗癌治療。在某些方面中，所述癌癥包含cmet外顯子14跳躍突變。

5、在某些方面中，本發(fā)明提供一種治療個體的癌癥的方法，該個體已接受過i)第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，所述治療包括向該個體施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。

6、在某些方面中，本發(fā)明提供一種治療個體的癌癥的方法，該個體已接受過ii)化療和egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，所述治療包括向該個體施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。

7、在某些方面中，本發(fā)明提供一種治療個體的癌癥的方法，該個體已接受過iii)cmet酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，所述治療包括向該個體施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。

8、在某些方面中，本發(fā)明提供一種治療個體的癌癥的方法，該個體iv)未接受過任何先前抗癌治療，所述治療包含向該個體施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體，其包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。在某些方面中，所述癌癥包含cmet外顯子14跳躍突變。

9、在某些方面中，本發(fā)明提供一種使用根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體在制備治療個體中癌癥的藥物中的用途，該個體已接受過i)第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，該雙特異性抗體包含可結(jié)合(或結(jié)合)人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。

10、在某些方面中，本發(fā)明提供一種使用根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體在制備治療個體中癌癥的藥物中的用途，該個體已接受過ii)化療和egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，該雙特異性抗體包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合(或結(jié)合)人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。

11、在某些方面中，本發(fā)明提供一種使用根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體在制備治療個體中癌癥的藥物中的用途，該個體已接受過iii)cmet酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，該雙特異性抗體包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合(或結(jié)合)人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。

12、在某些方面中，本發(fā)明提供一種使用根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體在制備治療個體中癌癥的藥物中的用途，該個體iv)未接受過任何先前抗癌治療，該雙特異性抗體包含可結(jié)合人類表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合(或結(jié)合)人類met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域。在某些方面中，該癌癥包含cmet外顯子14跳躍突變。

13、在某些方面中，該癌癥是egfr陽性癌癥、cmet陽性癌癥、或egfr和cmet陽性癌癥。在某種方面中，該癌癥包含egfr畸變、cmet畸變、或egfr和cmet畸變。

14、在某些方面中，已接受包含根據(jù)i)的第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療的個體或癌癥，對用第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的治療具有抗性。

15、在某些方面中，已接受包含根據(jù)ii)的化療和egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療的個體或癌癥，對用第一代、第二代、和/或第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的治療具有抗性。

16、在某些方面中，已接受包含根據(jù)iii)的cmet酪氨酸激酶抑制劑的先前治療的個體或癌癥，對用cmet酪氨酸激酶抑制劑的治療具有抗性。

17、在某些方面中，根據(jù)i)的所述雙特異性抗體的施用是作為用第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑治療之后的第二線治療施用。

18、在某些方面中，根據(jù)ii)的所述雙特異性抗體的施用，是作為用化療和用egfr酪氨酸激酶抑制劑治療之后的第三線治療施用。

19、在某些方面中，根據(jù)iii)的所述雙特異性抗體的施用，是作為用cmet酪氨酸激酶抑制劑治療后的第二線治療施用。

20、在某些方面中，所述癌癥或個體已接受過用第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，和/或所述癌癥或個體對用第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑的治療具有抗性。優(yōu)選地，所述個體包括賦予對所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑抗性的egfr畸變、cmet畸變、或egfr和cmet畸變。在某些方面中，所述的第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑包含或為奧希替尼(osimertinib)。

21、在某些方面中，所述癌癥或個體已接受過用化療和第一代或第二代或第三代酪氨酸激酶抑制劑的先前治療。在某些方面中，所述癌癥或個體對第一代或第二代或第三代酪氨酸激酶抑制劑的治療有抗性、或?qū)Φ谝淮偷诙野彼峒っ敢种苿┯锌剐?、或?qū)Φ谝淮?、第二代和第三代酪氨酸激酶抑制劑有抗性。在某些方面中，所述個體包含賦予對所述第一、第二或第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑抗性的egfr畸變、或cmet畸變、或egfr和cmet畸變。

22、在某些方面中，所述癌癥或個體已接受過cmet酪氨酸激酶抑制劑的先前治療，和/或所述癌癥或個體對用所述cmet酪氨酸激酶抑制劑的治療具有抗性。在某些方面中，所述個體包含賦予對所述cmet酪氨酸激酶抑制劑抗性的cmet畸變。在某些方面中，所述cmet抑制劑包含卡馬替尼(capmatinib)或特泊替尼(tepotinib)。

23、在某些方面中，所述個體包含賦予對所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑抗性的egfr和/或cmet畸變。在某些方面中，所述的第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑包含或為奧希替尼(osimertinib)。

24、在某些方面中，作為先前治療提供的第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑包含或為奧希替尼(osimertinib)、拉澤替尼(lazertinib)、阿氟替尼(alflutinib)、瑞齊替尼(rezivertinib)、羅西替尼(rociletinib)、奧莫替尼(olmutinib)、阿美替尼(almonertinib)、艾維替尼(abivertinib)、ask120067、貝福替尼(befotertinib)(也稱為bpi-d0316或d-0316)、sh-1028、納扎替尼(nazartinib)(egf816)、納奎替尼(naquotinib)(asp8273)、馬維替尼(mavelertinib)(pf-0647775)、奧拉菲替尼(olafertinib)(ck-101)、克耐替尼(keynatinib)或es-072，在某些方面中為奧希替尼(osimertinib)。在某些方面中，所述egfr酪氨酸激酶抑制劑為奧希替尼(osimertinib)、bpi-d0316/貝福替尼(befotertinib)、拉澤替尼(lazertinib)或阿美替尼(almonertinib)。

25、在某些方面中，與該化療一同提供為先前治療的所述第一代egfr酪氨酸激酶抑制劑包含或為吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)或?？颂婺?icotinib)。

26、在某些方面中，作為先前治療提供的所述第二代酪氨酸激酶抑制劑包含或為阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、xl647、ap26113、co-1686或來那替尼(neratinib)。

27、在某些方面中，作為先前治療提供的所述cmet酪氨酸激酶抑制劑為或包含卡馬替尼(capmatinib)、特泊替尼(tepotinib)、克唑替尼(crizotenib)、卡博替尼(cabozantinib)、賽沃替尼(savolitinib)、格沙替尼(glesatinib)、西曲伐替尼(sitravatinib)、bms-777607、梅沙替尼(merestinib)、替凡替尼(tivantinib)、戈伐替尼(golvatinib)、福瑞替尼(foretinib)、amg-337或bms-794833。

28、在某些方面中，所述先前接受過的化療包括鉑-系化療、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、吉西他濱(gemcitabine)、長春瑞濱(vinorelbine)、依托泊苷(etoposide)或培美曲塞(pemetrexed)，或其任何組合，在某些方面中為包含順鉑或卡鉑的組合物。

29、在某些方面中，該個體為人類個體。

30、在某些方面中，所述癌癥為非小細胞肺癌(nsclc)、頭頸癌，特別是頭頸鱗狀細胞癌；胃癌，特別是胃腺癌；或食道癌，特別是食道鱗狀細胞癌；胃/食道接合處癌、乳癌、結(jié)腸癌、胰臟癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌或膀胱癌。在某些方面中，所述癌癥或個體包含活化egfr突變、已核準(zhǔn)酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、三級酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、降低第三代酪氨酸激酶抑制劑與egfr的結(jié)合的突變、獲得性酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、egfr基因擴增、cmet突變、cmet畸變或增加的hgf表達。

31、在某些方面中，所述癌癥或個體包含框內(nèi)egfr外顯子20插入突變。

32、在某些方面中，癌癥包含cmet畸變，例如cmet擴增、cmet過表達、cmet路徑信號增強、cmet基因擴增、和/或cmet蛋白活性增加。在某些方面中，所述癌癥包括增加的hgf表達。在某些方面中，所述癌癥包含cmet外顯子14跳躍突變。

33、在某些方面中，該cmet失調(diào)包含cmet擴增、cmet過表達、cmet路徑信號增強、cmet基因擴增、或cmet蛋白活性增加或由增加的hgf表達引起的cmet失調(diào)。在某些方面中，所述cmet畸變包含cmet外顯子14跳躍突變。cmet失調(diào)在某些方面中為或包含cmet信號傳遞的失調(diào)。

34、在某些方面中，該使用或治療包含向個體提供劑量為1000、1500或2000mg的雙特異性抗體。在某些方面中，所述雙特異性抗體每周提供一次或每兩周提供一次。在某些方面中，該使用或治療包含每兩周一次向個體提供劑量為1500mg的雙特異性抗體。

35、在某些方面中，本發(fā)明的雙特異性抗體表現(xiàn)出adcc活性，在某些方面中，該抗體具有提高的adcc活性。在此方面中，該抗體通過一或多個ch2突變可具有改變的adcc活性。因此進一步提供根據(jù)本發(fā)明的雙特異性抗體，其為去巖藻醣基化。在某些方面中，本發(fā)明抗體包含兩個去巖藻醣基化的ch2結(jié)構(gòu)域。在某些方面中，本發(fā)明抗體包含總共兩個ch2結(jié)構(gòu)域，這兩個ch2結(jié)構(gòu)域都是去巖藻醣基化。在某些方面中，本發(fā)明抗體包含兩個ch2結(jié)構(gòu)域，這兩個ch2結(jié)構(gòu)域都是去巖藻醣基化。

36、在某些方面中，本發(fā)明的雙特異性抗體表現(xiàn)出adcp活性，在某些方面中，該抗體具有提高的adcp活性。在某些方面中，egfr和cmet結(jié)合臂二者，或包含egfr和cmet結(jié)合臂的兩條重鏈都對adcp有貢獻。在某些方面中，本發(fā)明的雙特異性抗體具有或表現(xiàn)出對nsclc細胞的adcp活性。在某些方面中，本發(fā)明的雙特異性抗體誘導(dǎo)nsclc細胞的adcp。

37、該雙特異性抗體可包含共同輕鏈。在某些方面中，該第一和第二可變結(jié)構(gòu)域包含相同或?qū)嵸|(zhì)上相同的(共同)輕鏈可變區(qū)。所述共同輕鏈可變區(qū)可為已知與已進行重組的多種人類可變區(qū)基因片段良好配對者。在某些方面中，該共同輕鏈?zhǔn)怯缮诚祐k基因片段編碼的可變區(qū)，例如o12/igvκ1-39*01可變區(qū)基因片段。優(yōu)選的輕鏈可變區(qū)包含重排的igvκ1-39*01/igjκ1*01或igvκ1-39*01/igjκ5*01。在某些方面中，cmet結(jié)合臂的輕鏈和egfr結(jié)合臂的輕鏈?zhǔn)窍嗤?共同)輕鏈。在某些方面中，該共同輕鏈?zhǔn)侵嘏诺摩?kappa)輕鏈igvκ1-39*01/igjκ1*01或igvκ1-39*01/igjκ5*01，其連接到人類輕鏈恒定區(qū)。該雙特異性抗體可為人類抗體。該雙特異性抗體可為全長抗體。它可能具有一個可結(jié)合egfr的可變結(jié)構(gòu)域和一個可結(jié)合cmet的可變結(jié)構(gòu)域。在某些方面中，可結(jié)合人類egfr的可變結(jié)構(gòu)域也可有益地結(jié)合小鼠egfr和/或獼猴egfr。在某種方面中，該結(jié)合或可結(jié)合人類egfr的可變結(jié)構(gòu)域結(jié)合至人類egfr的結(jié)構(gòu)域iii。可結(jié)合cmet的可變結(jié)構(gòu)域可阻斷抗體5d5與cmet的結(jié)合?？山Y(jié)合cmet的可變結(jié)構(gòu)域可阻斷hgf與cmet的結(jié)合。該抗體對cmet的kd可相比于該抗體對egfr的kd低至少10倍。ch3結(jié)構(gòu)域中位置405和409的氨基酸可與其他ch3結(jié)構(gòu)域中相對應(yīng)位置的氨基酸相同(eu編號)。

38、在某些方面中，本發(fā)明抗體包含第一可變結(jié)構(gòu)域，其包含重鏈可變區(qū)，其具有cdr1序列sygis；cdr2序列wisayx1x2ntnyaqklqg和包含序列x3x4x5x6hwwlx7a的cdr3，

39、其中x1＝n或s；x2＝a或g；x3＝d或g；x4＝r、s或y；x5＝h、l或y；x6＝d或w、及x7＝d或g；在x1至x7以外的位置具有0至5個氨基酸插入、缺失、取代、添加或其組合。

40、在某些方面中，本發(fā)明的抗體包含第二可變結(jié)構(gòu)域，其包含重鏈可變區(qū)，其具有seq?id?no:1-23的序列之一的氨基酸序列，其具有0至10個、優(yōu)選0至5個氨基酸插入、缺失、取代、添加或其組合。

41、描述雙特異性抗體，其中

42、x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝s；x5＝y(tǒng)；x6＝w及x7＝g；

43、x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝s；x5＝y(tǒng)；x6＝w及x7＝g；

44、x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝s；x5＝y(tǒng)；x6＝w及x7＝g；

45、x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；

46、x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；

47、x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；

48、x1＝n；x2＝g；x3＝g；x4＝y(tǒng)；x5＝l；x6＝d及x7＝g；

49、x1＝n；x2＝a；x3＝g；x4＝y(tǒng)；x5＝l；x6＝d及x7＝g；或

50、x1＝s；x2＝g；x3＝g；x4＝y(tǒng)；x5＝l；x6＝d及x7＝g。

51、在某些方面中，x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；或x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；或x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d。

52、在某些方面中，x3-x7＝drhwd，以及x1和x2為ng；sg或na。

53、所描述的雙特異性抗體中，該第二可變結(jié)構(gòu)域的重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:1-3；7；8；10；13；15；16；17；21；22或23的序列之一的氨基酸序列，其具有0至10個、優(yōu)選0至5個氨基酸插入、缺失、取代、添加或其組合。本發(fā)明的一個優(yōu)點是在某些方面中，本發(fā)明的雙特異性抗體顯示出比阿米萬他單抗(amivantamab)更有效的adcc活性，尤其是針對包含cmet畸變的細胞或癌癥。

54、本發(fā)明也提供一種治療患有腫瘤的個體的方法，該方法包含向有需要的個體施用如本文所述的雙特異性抗體。通常，該個體患有涉及異常細胞的疾病，例如該個體可能患有腫瘤或癌癥。

55、本發(fā)明也提供一種雙特異性抗體，其包含可結(jié)合表皮生長因子受體(egfr)的胞外部分的第一可變結(jié)構(gòu)域和可結(jié)合met原致癌基因受體酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可變結(jié)構(gòu)域，其中該第一可變結(jié)構(gòu)域包含重鏈可變區(qū)，其具有cdr1序列sygis；cdr2序列wisayx1x2ntnyaqklqg和包含序列x3x4x5x6hwwlx7a的cdr3，其中

56、x1＝n或s；x2＝a或g；x3＝d或g；x4＝r、s或y；x5＝h、l或y；x6＝d或w、及x7＝d或g，在x1-x7以外的位置具有0至5個氨基酸插入、缺失、取代、添加或其組合，且其中該第二可變結(jié)構(gòu)域包含重鏈可變區(qū)，其具有seq?id?no:1-23的序列之一的氨基酸序列，其具有0至10個、優(yōu)選0至5個氨基酸插入、缺失、取代、添加或其組合。

57、在某些方面中，該第一可變結(jié)構(gòu)域包含重鏈可變區(qū)，其具有cdr1序列sygis；cdr2序列wisayngntnyaqklqg和包含序列drhwhwwldafdy的cdr3，以及該第二可變結(jié)構(gòu)域在某些方面中包含重鏈可變區(qū)，其具有cdr1序列sysmn；cdr2序列wintytgdptyaqgftg、和cdr3序列etyyydrggypfdp。

58、本發(fā)明也提供一種雙特異性抗體，用于治療患有涉及異常細胞的疾病(如腫瘤)的個體。

59、也提供使用本發(fā)明雙特異性抗體在制備用于治療個體中涉及異常細胞的疾病(如腫瘤或癌癥)的藥物中的用途，該個體接受過用i)第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑或ii)化療和egfr酪氨酸激酶抑制劑或iii)cmet酪氨酸激酶抑制劑的先前治療。

60、本發(fā)明的抗體抑制hgf和egf/hgf誘導(dǎo)的癌癥生長，該癌癥已接受過用i)第三代egfr酪氨酸激酶抑制劑，或ii)化療和酪氨酸激酶抑制劑，或iii)cmet酪氨酸激酶抑制劑的先前治療。

61、在某些方面中，本發(fā)明的抗體抑制hgf誘導(dǎo)的hgf反應(yīng)性細胞的生長，在某些方面中，抑制人類個體中的egfr?tki抗性或難治性腫瘤、腫瘤模型或細胞株，例如包括活化egfr突變、已核準(zhǔn)酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、三級酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、降低第三代酪氨酸激酶抑制劑與egfr的結(jié)合的突變、獲得性酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、egfr基因擴增、cmet突變或cmet畸變的細胞株或模型，在某些方面中，框內(nèi)的外顯子20插入突變。在某些方面中，該抑制作用在hgf存在時表現(xiàn)出。

62、在某些方面中，本發(fā)明的抗體抑制hgf誘導(dǎo)的hgf反應(yīng)性細胞的生長，在某些方面中，抑制人類個體的腫瘤，腫瘤模型或細胞株，該人類個體的腫瘤、腫瘤模型或細胞株包含活化egfr突變、已核準(zhǔn)酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、三級酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、降低第三代酪氨酸激酶抑制劑與egfr的結(jié)合的突變、獲得性酪氨酸激酶抑制劑抗性突變、egfr基因擴增、cmet突變或cmet畸變，或框內(nèi)的外顯子20插入突變。在某些方面中，該抑制作用在hgf存在時表現(xiàn)出。

63、本發(fā)明抗體抑制egf誘導(dǎo)的egf反應(yīng)性細胞的生長，但不誘導(dǎo)與高親和力二價egfr抗體相關(guān)的毒性例如皮疹和腹瀉。這使得該抗體非常適合與具有自身毒性特征的tki組合使用。

64、本發(fā)明的抗體可用于治療對egfr酪氨酸激酶抑制劑的治療具有抗性的腫瘤，例如對奧希替尼(osimertinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)或阿法替尼(afatinib)；奧希替尼(osimertinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)或阿法替尼(afatinib)的類似物，或一或多種相對應(yīng)化合物和/或其類似物的組合具有抗性或難治性的腫瘤。

65、本發(fā)明還還包含核酸分子或核酸分子組，其單獨或一起編碼本文揭示的雙特異性抗體或其變體的重鏈或重鏈可變區(qū)。也提供編碼本文揭示抗體的核酸分子或核酸分子組。

66、在某些方面中，該重鏈包含igg1抗體的恒定區(qū)，在某些方面中為人類igg1抗體。可對該iggl恒定區(qū)的ch2區(qū)進行改造，以改變該抗體的adcc和/或cdc活性，或不改變該抗體的adcc和/或cdc活性。在某些方面中，所述改變會導(dǎo)致adcc和/或cdc活性增強。在某些方面中，該抗體的ch3-區(qū)經(jīng)改造，以促進重鏈的異二聚化，該重鏈包含結(jié)合egfr的第一重鏈和結(jié)合cmet的第二重鏈。

67、本發(fā)明還包含一種細胞，其包含一種或多種核酸分子，其單獨或共同編碼本文揭示的雙特異性抗體或其變體。也提供使用上述細胞產(chǎn)生本文揭示的雙特異性抗體或其變體的方法，在某些方面中，結(jié)合從細胞培養(yǎng)物中收獲該雙特異性抗體或其變體。

68、本發(fā)明還包含一種細胞系統(tǒng)，其包含本文揭示的雙特異性抗體或其變體。

69、本發(fā)明還提供一種細胞，其表達該雙特異性抗體和/或包含編碼該雙特異性抗體的核酸分子。

70、本發(fā)明還包含一種如本文所揭示的雙特異性抗體，其還包含標(biāo)記，在某些方面中，其為用于體內(nèi)成像的標(biāo)記。