本公開廣泛涉及現(xiàn)成的免疫細(xì)胞產(chǎn)品領(lǐng)域。更具體地，本公開涉及開用于發(fā)能夠在體內(nèi)遞送治療相關(guān)特性的多功能效應(yīng)細(xì)胞的策略。根據(jù)本公開開發(fā)的細(xì)胞產(chǎn)品解決了患者來源的細(xì)胞療法的關(guān)鍵限制。

背景技術(shù)：

1、過繼性細(xì)胞療法領(lǐng)域目前的重點是使用患者來源的細(xì)胞和供體來源的細(xì)胞，這使得實現(xiàn)癌癥免疫療法的持續(xù)制造以及向所有可能從中受益的患者遞送療法尤其困難。還需要改善過繼轉(zhuǎn)移的淋巴細(xì)胞的功效和存留，以促進(jìn)良好的患者結(jié)果。淋巴細(xì)胞(諸如t細(xì)胞和自然殺傷(nk)細(xì)胞)是有效的抗腫瘤效應(yīng)子，其在先天性和適應(yīng)性免疫中起重要作用。然而，將這些免疫細(xì)胞用于過繼性細(xì)胞療法仍然有挑戰(zhàn)性，并且尚未滿足改善的需求。因此，在過繼性免疫療法中，仍有大量機(jī)會來利用t細(xì)胞和nk細(xì)胞或其他免疫效應(yīng)細(xì)胞的全部潛能。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、需要功能上改善的效應(yīng)細(xì)胞，以在以下范圍內(nèi)解決問題：從反應(yīng)速率、細(xì)胞耗竭、輸血細(xì)胞損失(存活和/或存留)、腫瘤經(jīng)由標(biāo)靶損失或譜系轉(zhuǎn)換逃逸、腫瘤靶向精確度、脫靶毒性、腫瘤外效應(yīng)到針對實體瘤的功效，即腫瘤微環(huán)境和相關(guān)免疫抑制、募集、運輸和浸潤。

2、本發(fā)明的實施方案的目的是用以產(chǎn)生由單一細(xì)胞衍生ipsc(誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞)克隆系分化的衍生非多能細(xì)胞的方法和組合物，該ipsc系包含在其基因組中的一種或幾種基因修飾。在一些實施方案中，該一種或幾種基因修飾包括dna插入、缺失和取代中的一者或多者，并且該修飾在分化、擴(kuò)增、傳代和/或移植之后在隨后衍生細(xì)胞中保留并且保持功能性。

3、本技術(shù)的ipsc衍生非多能細(xì)胞包括但不限于cd34+細(xì)胞、生血內(nèi)皮細(xì)胞、hsc(造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞)、造血多潛能祖細(xì)胞、t細(xì)胞祖細(xì)胞、nk細(xì)胞祖細(xì)胞、t細(xì)胞、nkt細(xì)胞、nk細(xì)胞和b細(xì)胞。本技術(shù)的ipsc衍生非多能細(xì)胞通過由包含相同基因修飾的ipsc分化在它們的基因組中包含一種或多種基因修飾。在一些實施方案中，用于獲得基因工程改造的衍生細(xì)胞的工程改造的克隆ipsc分化策略受益于ipsc在定向分化中的發(fā)育潛能，該定向分化不會顯著地受到ipsc中的工程改造模式的不利影響，并且也要求工程改造模式如預(yù)期那樣在衍生細(xì)胞中起作用。此外，這一策略克服工程改造的原代淋巴細(xì)胞(例如由外周血獲得的t細(xì)胞或nk細(xì)胞)的現(xiàn)有障礙，因此細(xì)胞難以工程改造，并且工程改造這類細(xì)胞通常缺乏再現(xiàn)性和均勻性，使得細(xì)胞展現(xiàn)伴隨高細(xì)胞死亡和低細(xì)胞擴(kuò)增的不良細(xì)胞存留。此外，這一策略避免產(chǎn)生使用起始時是異質(zhì)的原代細(xì)胞源以其他方式獲得的異質(zhì)效應(yīng)細(xì)胞群。

4、因此，在一個方面，本發(fā)明提供了一種細(xì)胞或其群體，其中：(i)該細(xì)胞是(a)免疫細(xì)胞；(b)誘導(dǎo)性多能細(xì)胞(ipsc)；或(c)從分化ipsc獲得的衍生效應(yīng)細(xì)胞；(ii)該細(xì)胞包含實體瘤靶向骨架，該實體瘤靶向骨架包含以下中的兩種或更多種：(a)編碼c-x-c基序趨化因子受體或其變體的多核苷酸；(b)編碼tgfβ信號傳導(dǎo)重定向受體(tgfβ-srr)的多核苷酸，該tgfβ-srr包含轉(zhuǎn)化生長因子β受體(tgfβr)的胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)的部分或全部肽；以及(c)編碼同種異體免疫防御受體(adr)的多核苷酸。在一些實施方案中，該adr對4-1bb具有特異性。在一些實施方案中，與沒有實體瘤靶向骨架的對應(yīng)細(xì)胞相比，該細(xì)胞在實體瘤中具有改善的運輸、腫瘤微環(huán)境(tme)抗性和/或同種異體反應(yīng)性抗性。在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，該實體瘤靶向骨架還包括：(i)cd38敲除；(ii)編碼外源cd16或其變體的多核苷酸；以及(iii)編碼細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體的多核苷酸，該細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體包含細(xì)胞表面表達(dá)的外源細(xì)胞因子和/或其受體的部分或全部肽。在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，該細(xì)胞還包括以下中的一者或多者：(i)嵌合抗原受體(car)；(ii)hla-i缺乏和/或hla-ii缺乏；(iii)hla-g或不可裂解的hla-g的引入，或cd58和cd54中的一者或兩者的敲除；(iv)b2m、ciita、tap1、tap2、tapasin、nlrc5、rfxank、rfx5、rfxap、tcr、nkg2a、nkg2d、cd25、cd44、cd54、cd56、cd58、cd69、cis、cbl-b、socs2、pd1、ctla4、lag3、tim3和tigit中的至少一者的破壞；(v)hla-e、4-1bbl、cd3、cd4、cd8、cd47、cd113、cd131、cd137、cd80、pdl1、a2ar、抗原特異性tcr、嵌合融合受體(cfr)、fc受體、抗體或其功能性變體或片段、檢查點抑制劑、銜接子和用于與激動劑偶聯(lián)的表面觸發(fā)受體中的至少一者的引入；或(vi)表4中所列的基因型中的至少一者。

5、在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該c-x-c基序趨化因子受體包含cxcr2或cxcr3。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該tgfβ-srr還包含細(xì)胞因子受體的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)的部分或全部肽，該細(xì)胞因子受體包括il2r、il12r、il18r、il21r或它們的任何組合。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，(a)該細(xì)胞因子受體是il2rβ，從而形成tgfβr2-il2rβ重定向受體，并且il2rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由seq?id?no:11(ncrntgpwlkkvlkcntpdpskffsqlssehggdvqkwlsspfpsssfspgglapeisplevlerdkvtqlllqqdkvpepaslssnhsltscftnqgyfffhlpdaleieacqvyftydpyseedpdegvagaptgsspqplqplsgeddayctfpsrddlllfspsllggpsppstapggsgageermppslqervprdwdpqplgpptpgvpdlvdfqpppelvlreageevpdagpregvsfpwsrppgqgefralnarlplntdaylslqelqgqdpthlv)表示的氨基酸序列；或(b)該細(xì)胞因子受體是il12rβ，從而形成tgfβr2-il12rβ重定向受體，并且il12rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由(i)seq?id?no:12(hyfqqkvfvllaalrpqwcsreipdpanstcakkypiaeektqlpldrllidwptpedpeplvisevlhqvtpvfrhppcsnwpqrekgiqghqasekdmmhsassppppralqaesrqlvdlykvlesrgsdpkpenpacpwtvlpagdlpthdgylpsniddlpsheapladsleelepqhislsvfpssslhpltfscgdkltldqlkmrcdslml)或(ii)seq?id?no:13(sdpkpenpacpwtvlpagdlpthdgylpsniddlpsheapladsleelepq)表示的氨基酸序列；或(c)該細(xì)胞因子受體是il18rβ，從而形成tgfβr2-il18rβ重定向受體，并且il18rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由seq?id?no:14(yrvdlvlfyrhltrrdetltdgktydafvsylkecrpengeehtfaveilprvlekhfgyklciferdvvpggavvdeihslieksrrliivlsksymsnevryelesglhealverkikiilieftpvtdftflpqslkllkshrvlkwkadkslsynsrfwknllylmpaktvkpgrdepevlpvlses)表示的氨基酸序列；或(d)該細(xì)胞因子受體是il21r，從而形成tgfβr2-il21r重定向受體，并且il21rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由seq?id?no:15(slkthplwrlwkkiwavpsperffmplykgcsgdfkkwvgapftgsslelgpwspevpstlevyschpprspakrlqltelqepaelvesdgvpkpsfwptaqnsggsayseerdrpyglvsidtvtvldaegpctwpcsceddgypaldldaglepspgledplldagttvlscgcvsagspglggplgslldrlkppladgedwagglpwggrspggvseseagsplagldmdtfdsgfvgsdcsspvecdftspgdegpprsylrqwvvippplsspgpqas)表示的氨基酸序列；或(e)tgfβr的胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)包含由seq?id?no:10(tipphvqksvnndmivtdnngavkfpqlckfcdvrfstcdnqkscmsncsitsicekpqevcvavwrkndenitletvchdpklpyhdfiledaaspkcimkekkkpgetffmcscssdecndniifseeyntsnpdlllvifq)表示的氨基酸序列。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該細(xì)胞因子受體是il2rβ的片段，形成tgfβr2-tril12rβ重定向受體，其包含與由seq?id?no:16

6、(tipphvqksvnndmivtdnngavkfpqlckfcdvrfstcdnqkscmsncsitsicekpqevcvavwrkndenitletvchdpklpyhdfiledaaspkcimkekkkpgetffmcscssdecndniifseeyntsnpdlllvifqvtgisllpplgvaisviiifycyrvnsdpkpenpacpwtvlpagdlpthdgylpsniddlpsheapladsleelepq)表示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、或97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，其中由seq?id?no:16中所包含的seq?id?no:17(vtgisllpplgvaisviiifycyrvn)表示的氨基酸序列可以變化。

7、在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，將實體瘤靶向骨架的兩個或更多個多核苷酸插入內(nèi)源cd38基因座以敲除cd38。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，編碼外源cd16或其變體的多核苷酸和實體瘤靶向骨架的兩個或更多個多核苷酸在三順反子構(gòu)建體中共表達(dá)。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該外源cd16或其變體包含以下中的至少一者：(a)高親和力不可裂解的cd16(hncd16)；(b)cd16的胞外域中的f176v和s197p；(c)源自cd64的全部或部分胞外域；(d)非原生(或非cd16)跨膜結(jié)構(gòu)域；(e)非原生(或非cd16)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；(f)非原生(或非cd16)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；(g)非原生刺激結(jié)構(gòu)域；以及(h)并非源自cd16并且源自相同或不同多肽的跨膜結(jié)構(gòu)域、信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和刺激結(jié)構(gòu)域。

8、在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，該細(xì)胞還包含細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體，該細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體包含：(a)細(xì)胞表面表達(dá)的外源細(xì)胞因子或其受體的部分或全部肽，其包含il2、il4、il6、il7、il9、il10、il11、il12、il15、il18、il21或其相應(yīng)受體中的至少一者；或(b)以下中的至少一者：(i)在其間具有自裂解肽的il15和il15rα的共表達(dá)；(ii)il15和il15rα的融合蛋白；(iii)il15rα的胞內(nèi)域截短的il15/il15rα融合蛋白；(iv)il15和il15rα的膜結(jié)合sushi結(jié)構(gòu)域的融合蛋白；(v)il15和il15rβ的融合蛋白；(vi)il15和共同受體γc的融合蛋白，其中該共同受體γc是原生的或經(jīng)過修飾的；以及(vii)il15rβ的同源二聚體；任選地其中(b)(i)至(vii)中的任一者都能夠在單獨構(gòu)建體中或在雙順反子構(gòu)建體中與car共表達(dá)；或(c)以下中的至少一者：(i)il7和il7rα的融合蛋白；(ii)il7和共同受體γc的融合蛋白，其中該共同受體γc是原生的或經(jīng)修飾的；以及(iii)il7rβ的同源二聚體，任選地其中(c)(i)-(iii)中的任一者任選地在單獨構(gòu)建體中或在雙順反子表達(dá)盒中與car共表達(dá)；以及任選地，(d)是瞬時表達(dá)的。

9、在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，該細(xì)胞還包含car，其中該car是：(i)t細(xì)胞特異性的或nk細(xì)胞特異性的；(ii)雙特異性抗原結(jié)合car；(iii)可切換的car；(iv)二聚化car；(v)分離car；(vi)多鏈car；(vii)誘導(dǎo)性car；(viii)與另一個car共表達(dá)；(ix)在雙順反子構(gòu)建體中與細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體共表達(dá)；(x)任選地在單獨構(gòu)建體中或在雙順反子構(gòu)建體中，與檢查點抑制劑共表達(dá)；(xi)對至少一種腫瘤相關(guān)抗原具有特異性，該腫瘤相關(guān)抗原包括cd19、b7h3、bcma、cd20、cd22、cd38、cd123、cd79b、cd52、egfr、egp2/epcam、gd2、gprc5d、her2、klk2、mica/b、msln、vegf-r2、psma和pdl1；和/或(xii)對至少一種腫瘤相關(guān)抗原具有特異性，該腫瘤相關(guān)抗原包括：adgre2、碳酸酐酶ix(caix)、ccr1、ccr4、癌胚抗原(cea)、cd3、cd5、cd7、cd8、cd10、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd41、cd44、cd44v6、cd49f、cd56、cd70、cd74、cd99、cd123、cd133、cd138、cds、clec12a、巨細(xì)胞病毒(cmv)感染的細(xì)胞的抗原、上皮糖蛋白2(egp-2)、上皮糖蛋白40(egp-40)、上皮細(xì)胞粘附分子(epcam)、egfrviii、受體酪氨酸-蛋白激酶erb-b2,3,4、egfir、egfr-viii、erbb葉酸結(jié)合蛋白(fbp)、胎兒型乙酰膽堿受體(achr)、葉酸受體α、神經(jīng)節(jié)苷脂g2(gd2)、神經(jīng)節(jié)苷脂g3(gd3)、人表皮生長因子受體2(her2)、人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(htert)、icam-1、整合素b7、白介素13受體亞單位α2(il13rα2)、κ輕鏈、激酶插入結(jié)構(gòu)域受體(kdr)、路易斯a(ca19.9)、路易斯y(ley)、l1細(xì)胞粘附分子(l1-cam)、lilrb2、黑色素瘤抗原家族a1(mage-a1)、mica/b、粘蛋白1(muc-1)、粘蛋白16(muc-16)、間皮素(msln)、nkcsi、nkg2d配體、c-met、癌癥-睪丸抗原ny-eso-1、癌胚抗原(h5t4)、prame、前列腺干細(xì)胞抗原(psca)、prame前列腺特異性膜抗原(psma)、腫瘤相關(guān)糖蛋白72(tag-72)、tim-3、trbci、trbc2、血管內(nèi)皮生長因子r2(vegf-r2)、維爾姆斯瘤蛋白(wt-1)和病原體抗原；并且任選地，其中(i)至(xii)中的任一者的所述car插入在tcr基因座處和/或由tcr的內(nèi)源啟動子驅(qū)動，并且/或者該tcr通過car插入而被敲除。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該tcr基因座是tcrα和/或tcrβ的恒定區(qū)，并且任選地其中該car與tcr的內(nèi)源啟動子可操作地連接。

10、在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該car包含：(a)胞外域，其包含對腫瘤相關(guān)抗原具有特異性的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；(b)跨膜結(jié)構(gòu)域；以及(c)包含至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的胞內(nèi)域；其中至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域特異性地對car與腫瘤相關(guān)抗原的結(jié)合作出響應(yīng)，從而產(chǎn)生癌癥抗原特異性反應(yīng)。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含：(a)以下中的任一者：2b4(自然殺傷細(xì)胞受體2b4)、4-1bb(腫瘤壞死因子受體超家族成員9)、cd28(t細(xì)胞特異性表面糖蛋白cd28)、cd3ζ(t細(xì)胞表面糖蛋白cd3ζ鏈)、dap10(造血細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)器)、dap12(tyro蛋白酪氨酸激酶結(jié)合蛋白)、dnam1(cd226抗原)、fceriγ(高親和性免疫球蛋白ε受體亞單位γ)、il21r(白介素21受體)、il2rβ/il15rβ(白介素2受體亞單位β)、il2rγ(細(xì)胞因子受體通用亞單位γ)、il7r(白介素7受體亞單位α)、kir2ds2(殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體2ds2)、nkg2d(nkg2-d?ii型整合膜蛋白)、nkp30(天然細(xì)胞毒性觸發(fā)受體3)、nkp44(天然細(xì)胞毒性觸發(fā)受體2)、nkp46(天然細(xì)胞毒性觸發(fā)受體1)、cs1(slam家族成員7)和cd8(t細(xì)胞表面糖蛋白cd8α鏈)；(b)與分別由seq?id?no:54-76表示的2b4、41bb、cd16、cd2、cd28、cd28h、cd3ζ、dap10、dap12、dnam1、fceriγ、il21r、il2rβ(il15rβ)、il2rγ、il7r、kir2ds2、nkg2d、nkp30、nkp44、nkp46、cd3ζ1xx、cs1或cd8的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或其部分具有至少約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列；和/或(c)與2b4、cd28、cd3ζ、dap10、nkg2d、cd3ζ、cd3ζ1xx、dnam1、cs1或它們的組合的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或其部分具有至少約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該胞內(nèi)域包含兩個不同的信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，并且其中所述胞內(nèi)域包含融合的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或其部分，呈以下形式中的任一種：cd28-cd3ζ、cd28-cd3ζ1xx、41bb-cd3ζ、41bb-cd3ζ1xx、2b4-cd3ζ和2b4-cd3ζ1xx。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該跨膜結(jié)構(gòu)域包含與cd2、cd3δ、cd3ε、cd3γ、cd3ζ、cd4、cd8、cd8a、cd8b、cd16、cd27、cd28、cd28h、cd40、cd84、cd166、4-1bb、ox40、icos、icam-1、ctla4、pd1、lag3、2b4、btla、dnam1、dap10、dap12、fceriγ、il7、il12、il15、kir2dl4、kir2ds1、kir2ds2、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c、nkg2d、cs1或t細(xì)胞受體多肽的跨膜區(qū)或其部分具有至少約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該跨膜結(jié)構(gòu)域包含與分別由seq?id?no:32-53表示的2b4、cd2、cd16、cd28、cd28h、cd3ζ、dap10、dap12、dnam1、fceriγ、kir2ds2、nkg2d、nkp30、nkp44、nkp46、cs1或cd8的跨膜區(qū)或其部分具有至少約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該跨膜結(jié)構(gòu)域及其直接連接的信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域來自相同的蛋白質(zhì)或來自不同的蛋白質(zhì)。

11、在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，該腫瘤相關(guān)抗原包含her2，并且其中該car包含：(a)胞外域，該胞外域包含識別her2(人表皮生長因子受體2)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中該抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：(i)重鏈可變(vh)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:103(nygms)的重鏈互補決定區(qū)1(h-cdr1)、含有seq?id?no:104(tinnngggtyypdsvkg)的重鏈互補決定區(qū)2(h-cdr2)和含有seq?id?no:105(pgllwda)的重鏈互補決定區(qū)3(h-cdr3)；以及任選的(ii)輕鏈可變(vl)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:106(kssqslldsdgrtyln)的輕鏈互補決定區(qū)1(l-cdr1)、含有seq?id?no:107(lvsklds)的輕鏈互補決定區(qū)2(l-cdr2)和含有seq?id?no:108(wqgthfpqt)的輕鏈互補決定區(qū)3(l-cdr3)；(b)跨膜結(jié)構(gòu)域；以及(c)包含至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的胞內(nèi)域；其中至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域特異性地對car與在癌細(xì)胞上表達(dá)的her2抗原的結(jié)合作出響應(yīng)，從而產(chǎn)生癌癥抗原特異性反應(yīng)。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該car的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域：(a)包含與seq?id?no:109具有至少80％序列同一性的vh結(jié)構(gòu)域；(b)包含與seq?id?no:110具有至少80％序列同一性的vl結(jié)構(gòu)域；(c)包含單鏈可變片段(scfv)，其包含vh-接頭-vl或vl-接頭-vh，其中該接頭在長度和序列上不同，并且任選地其中該接頭與seq?id?no:111-114具有至少80％的序列同一性；(d)包含由與seq?id?no:115或seq?id?no:116具有至少約99％、約98％、約96％、約95％、約90％、約85％或約80％同一性的氨基酸序列表示的scfv，其中seq?id?no:115和116中的每一者包含在長度和序列上不同的接頭；并且/或者(e)是人源化的。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該胞外域還包含以下中的一者或多者：(a)信號肽；和/或(b)間隔區(qū)/鉸鏈。在一些實施方案中，間隔區(qū)/鉸鏈包含：(a)igg4間隔區(qū)、cd28間隔區(qū)、cd8間隔區(qū)、ch3間隔區(qū)、ch2/ch3間隔區(qū)或它們的任何組合；(b)約10個至約80個氨基酸的短間隔區(qū)；超過80個至約180個氨基酸的中等間隔區(qū)；或超過180個氨基酸的長間隔區(qū)；和/或(c)與seq?id?no:96-100中的任一者具有至少約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，間隔區(qū)/鉸鏈包含中等間隔區(qū)，其中該間隔區(qū)包含與seq?id?no:99具有至少約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。

12、在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，該car包含與seq?id?no:117具有至少約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在一些實施方案中，其中該car的至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域特異性地對car與在癌細(xì)胞上表達(dá)的her2抗原的結(jié)合作出響應(yīng)，從而產(chǎn)生癌癥抗原特異性反應(yīng)，該癌細(xì)胞是乳腺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞、唾液腺癌細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、結(jié)腸直腸癌細(xì)胞或頭頸癌細(xì)胞。

13、在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，(i)ipsc是克隆ipsc、單細(xì)胞解離的ipsc、ipsc細(xì)胞系細(xì)胞或ipsc主細(xì)胞庫(mcb)細(xì)胞；或(ii)衍生細(xì)胞包括衍生cd34+細(xì)胞、衍生造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞、衍生造血多潛能祖細(xì)胞、衍生t細(xì)胞祖細(xì)胞、衍生nk細(xì)胞祖細(xì)胞、衍生t譜系細(xì)胞、衍生nkt譜系細(xì)胞、衍生nk譜系細(xì)胞或衍生b譜系細(xì)胞；或(iii)衍生細(xì)胞包括具有一種或多種功能特征的衍生效應(yīng)細(xì)胞，該一種或多種功能特征不存在于對應(yīng)的原代t細(xì)胞、nk細(xì)胞、nkt細(xì)胞和/或b細(xì)胞中。在一些實施方案中，與從外周血、臍帶血或任何其他供體組織獲得的沒有相同基因編輯的該衍生細(xì)胞的對應(yīng)原代細(xì)胞相比，該衍生細(xì)胞具有包括以下中的一者或多者的治療特性：(i)增加的細(xì)胞毒性；(ii)改善的存留和/或存活；(iii)增強(qiáng)的將旁鄰免疫細(xì)胞遷移到腫瘤部位以及/或者激活或募集旁鄰免疫細(xì)胞的能力；(iv)改善的腫瘤浸潤；(v)增強(qiáng)的降低腫瘤免疫抑制的能力；(vi)提高的挽救腫瘤抗原逃逸的能力；(vii)控制的凋亡；(viii)增強(qiáng)或獲得的adcc；以及(ix)避免自相殘殺的能力。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該細(xì)胞是nk譜系細(xì)胞或t譜系細(xì)胞，其中：(i)nk譜系細(xì)胞或t譜系細(xì)胞在腫瘤部位具有改善的浸潤和/或滯留；(ii)nk譜系細(xì)胞能夠募集t細(xì)胞和/或?qū)細(xì)胞遷移到腫瘤部位；或(iii)在存在一種或多種檢查點抑制劑的情況下，nk譜系細(xì)胞或t譜系細(xì)胞能夠降低腫瘤免疫抑制。

14、在另一個方面，本發(fā)明提供了一種細(xì)胞或其群體，其中：(i)該細(xì)胞是(a)免疫細(xì)胞；(b)誘導(dǎo)性多能細(xì)胞(ipsc)；或(c)從分化ipsc獲得的衍生效應(yīng)細(xì)胞；(ii)該細(xì)胞包含嵌合抗原受體(car)，該包含嵌合抗原受體包含：(a)胞外域，該胞外域包含識別her2(人表皮生長因子受體2)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中該抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：(1)重鏈可變(vh)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:103(nygms)的重鏈互補決定區(qū)1(h-cdr1)、含有seq?id?no:104(tinnngggtyypdsvkg)的重鏈互補決定區(qū)2(h-cdr2)和含有seq?id?no:105(pgllwda)的重鏈互補決定區(qū)3(h-cdr3)；以及(2)輕鏈可變(vl)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:106(kssqslldsdgrtyln)的輕鏈互補決定區(qū)1(l-cdr1)、含有seq?id?no:107(lvsklds)的輕鏈互補決定區(qū)2(l-cdr2)和含有seq?id?no:108(wqgthfpqt)的輕鏈互補決定區(qū)3(l-cdr3)；(b)跨膜結(jié)構(gòu)域；以及(c)包含至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的胞內(nèi)域；其中至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域特異性地對car與在癌細(xì)胞上表達(dá)的her2抗原的結(jié)合作出響應(yīng)，從而產(chǎn)生癌癥抗原特異性反應(yīng)。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域：(a)包含與seq?idno:109具有至少80％序列同一性的vh結(jié)構(gòu)域；(b)包含與seq?id?no:110具有至少80％序列同一性的vl結(jié)構(gòu)域；(c)包含單鏈可變片段(scfv)，其包含vh-接頭-vl或vl-接頭-vh，其中該接頭在長度和序列上不同，并且任選地其中該接頭與seq?id?no:111-114具有至少80％的序列同一性；(d)包含由與seq?id?no:115或seq?id?no:116具有至少約99％、約98％、約96％、約95％、約90％、約85％或約80％同一性的氨基酸序列表示的scfv，其中seq?id?no:115和116中的每一者包含在長度和序列上不同的接頭；并且/或者(e)是人源化的。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含：(a)以下中的任一者：2b4(自然殺傷細(xì)胞受體2b4)、4-1bb(腫瘤壞死因子受體超家族成員9)、cd16(igg?fc區(qū)受體iii-a)、cd2(t細(xì)胞表面抗原cd2)、cd28(t細(xì)胞特異性表面糖蛋白cd28)、cd28h(含跨膜和免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的蛋白2)、cd3ζ(t細(xì)胞表面糖蛋白cd3ζ鏈)、dap10(造血細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)器)、dap12(tyro蛋白酪氨酸激酶結(jié)合蛋白)、dnam1(cd226抗原)、fceriγ(高親和性免疫球蛋白ε受體亞單位γ)、il21r(白介素21受體)、il2rβ/il15rβ(白介素2受體亞單位β)、il2rγ(細(xì)胞因子受體通用亞單位γ)、il7r(白介素7受體亞單位α)、kir2ds2(殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體2ds2)、nkg2d(nkg2-d?ii型整合膜蛋白)、nkp30(天然細(xì)胞毒性觸發(fā)受體3)、nkp44(天然細(xì)胞毒性觸發(fā)受體2)、nkp46(天然細(xì)胞毒性觸發(fā)受體1)、cs1(slam家族成員7)和cd8(t細(xì)胞表面糖蛋白cd8α鏈)；(b)與分別由seq?id?no:54-76表示的2b4、4-1bb、cd16、cd2、cd28、cd28h、cd3ζ、cd3ζ1xx、dap10、dap12、dnam1、fceriγ、il21r、il2rβ(il15rβ)、il2rγ、il7r、kir2ds2、nkg2d、nkp30、nkp44、nkp46、cs1或cd8的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或其部分具有至少約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列；和/或(c)與2b4、cd28、cd3ζ、dap10、nkg2d、cd3ζ1xx、dnam1、cs1或它們的組合的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或其部分具有至少約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該胞內(nèi)域包含兩個不同的信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，并且其中所述胞內(nèi)域包含融合的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域或其部分，呈以下形式中的任一種：2b4-cd3ζ/1xx、2b4-dnam1、2b4-fceriγ、2b4-dap10、cd16-dnam1、cd16-dap10、cd16-dap12、cd2-cd3ζ/1xx、cd2-dnam1、cd2-fceriγ、cd2-dap10、cd28-dnam1、cd28-fceriγ、cd28-dap10、cd28-dap12、cd28-cd3ζ/1xx、cd28h-cd3ζ/1xx、dap10-cd3ζ/1xx、dap10-dap12、dap12-cd3ζ/1xx、dap12-dap10、dnam1-cd3ζ/1xx、kir2ds2-cd3ζ/1xx、kir2ds2-dap10、kir2ds2-2b4或nkp46-2b4。

15、在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該跨膜結(jié)構(gòu)域包含與以下的跨膜區(qū)或其部分具有至少約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列：(a)cd2、cd3δ、cd3ε、cd3γ、cd3ζ、cd4、cd8、cd8a、cd8b、cd16、cd27、cd28、cd28h、cd40、cd84、cd166、4-1bb、ox40、icos、icam-1、ctla4、pd1、lag3、2b4、btla、dnam1、dap10、dap12、fceriγ、il7、il12、il15、kir2dl4、kir2ds1、kir2ds2、nkp30、nkp44、nkp46、nkg2c、nkg2d、cs1或t細(xì)胞受體多肽；(b)2b4、cd2、cd16、cd28、cd28h、cd3ζ、dap10、dap12、dnam1、fceriγ、kir2ds2、nkg2d、nkp30、nkp44、nkp46、cs1或cd8；或(c)2b4、cd28、cd28h、dap10、dnam1、kir2ds2和nkg2d。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該跨膜結(jié)構(gòu)域及其直接連接的信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域來自相同的蛋白質(zhì)或來自不同的蛋白質(zhì)。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該胞外域還包含以下中的一者或多者：(a)信號肽；和/或(b)間隔區(qū)/鉸鏈。在一些實施方案中，間隔區(qū)/鉸鏈包含：(a)igg4間隔區(qū)、cd28間隔區(qū)、cd8間隔區(qū)、ch3間隔區(qū)、ch2/ch3間隔區(qū)或它們的任何組合；(b)約10個至約80個氨基酸的短間隔區(qū)；超過80個至約180個氨基酸的中等間隔區(qū)；或超過180個氨基酸的長間隔區(qū)；和/或(c)與seq?id?no:96-100中的任一者具有至少約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在一個實施方案中，該間隔區(qū)/鉸鏈包含中等間隔區(qū)，其中該間隔區(qū)包含與seq?idno:99具有至少約80％、約85％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。

16、在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該car包含與seq?id?no:117具有至少約90％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％同一性的氨基酸序列。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該細(xì)胞還包含實體瘤靶向骨架，該實體瘤靶向骨架包含以下中的至少一者：(a)編碼c-x-c基序趨化因子受體或其變體的多核苷酸；(b)編碼tgfβ信號傳導(dǎo)重定向受體(tgfβ-srr)的多核苷酸，該tgfβ-srr包含轉(zhuǎn)化生長因子β受體(tgfβr)的胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)的部分或全部肽；以及(c)編碼同種異體免疫防御受體(adr)的多核苷酸；任選地其中與沒有實體瘤靶向骨架的對應(yīng)細(xì)胞相比，該細(xì)胞在實體瘤中具有改善的運輸、腫瘤微環(huán)境(tme)抗性和/或同種異體反應(yīng)性抗性。在一些實施方案中，該adr對4-1bb具有特異性。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該實體瘤靶向骨架還包括：(i)cd38敲除；(ii)編碼外源cd16或其變體的多核苷酸；以及(iii)編碼細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體的多核苷酸，該細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體包含細(xì)胞表面表達(dá)的外源細(xì)胞因子和/或其受體的部分或全部肽。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該細(xì)胞還包含以下中的一者或多者：(i)hla-i缺乏和/或hla-ii缺乏；(ii)hla-g或不可裂解的hla-g的引入，或cd58和cd54中的一者或兩者的敲除；(iii)b2m、ciita、tap1、tap2、tapasin、nlrc5、rfxank、rfx5、rfxap、tcr、nkg2a、nkg2d、cd25、cd44、cd54、cd56、cd58、cd69、cis、cbl-b、socs2、pd1、ctla4、lag3、tim3和tigit中的至少一者的破壞；(iv)hla-e、4-1bbl、cd3、cd4、cd8、cd47、cd113、cd131、cd137、cd80、pdl1、a2ar、抗原特異性tcr、嵌合融合受體(cfr)、fc受體、抗體或其功能性變體或片段、檢查點抑制劑、銜接子和用于與激動劑偶聯(lián)的表面觸發(fā)受體中的至少一者的引入；或(v)表4中所列的基因型中的至少一者。

17、在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該c-x-c基序趨化因子受體包含cxcr2或cxcr3。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該tgfβ-srr還包含細(xì)胞因子受體的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)的部分或全部肽，該細(xì)胞因子受體包括il2r、il12r、il18r、il21r或它們的任何組合。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，(a)該細(xì)胞因子受體是il2rβ，從而形成tgfβr2-il2rβ重定向受體，并且il2rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由seq?id?no:11(ncrntgpwlkkvlkcntpdpskffsqlssehggdvqkwlsspfpsssfspgglapeisplevlerdkvtqlllqqdkvpepaslssnhsltscftnqgyfffhlpdaleieacqvyftydpyseedpdegvagaptgsspqplqplsgeddayctfpsrddlllfspsllggpsppstapggsgageermppslqervprdwdpqplgpptpgvpdlvdfqpppelvlreageevpdagpregvsfpwsrppgqgefralnarlplntdaylslqelqgqdpthlv)表示的氨基酸序列；或(b)該細(xì)胞因子受體是il12rβ，從而形成tgfβr2-il12rβ重定向受體，并且il12rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由seqid?no:12(hyfqqkvfvllaalrpqwcsreipdpanstcakkypiaeektqlpldrllidwptpedpeplvisevlhqvtpvfrhppcsnwpqrekgiqghqasekdmmhsassppppralqaesrqlvdlykvlesrgsdpkpenpacpwtvlpagdlpthdgylpsniddlpsheapladsleelepqhislsvfpssslhpltfscgdkltldqlkmrcdslml)或seq?id?no:13(sdpkpenpacpwtvlpagdlpthdgylpsniddlpsheapladsleelepq)表示的氨基酸序列；或(c)該細(xì)胞因子受體是il18rβ，從而形成tgfβr2-il18rβ重定向受體，并且il18rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由seq?id?no:14(yrvdlvlfyrhltrrdetltdgktydafvsylkecrpengeehtfaveilprvlekhfgyklciferdvvpggavvdeihslieksrrliivlsksymsnevryelesglhealverkikiilieftpvtdftflpqslkllkshrvlkwkadkslsynsrfwknllylmpaktvkpgrdepevlpvlses)表示的氨基酸序列；或(d)該細(xì)胞因子受體是il21r，從而形成tgfβr2-il21r重定向受體，并且il21rβ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)包含由seq?id?no:15(slkthplwrlwkkiwavpsperffmplykgcsgdfkkwvgapftgsslelgpwspevpstlevyschpprspakrlqltelqepaelvesdgvpkpsfwptaqnsggsayseerdrpyglvsidtvtvldaegpctwpcsceddgypaldldaglepspgledplldagttvlscgcvsagspglggplgslldrlkppladgedwagglpwggrspggvseseagsplagldmdtfdsgfvgsdcsspvecdftspgdegpprsylrqwvvippplsspgpqas)表示的氨基酸序列；或(e)tgfβr的胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)包含由seq?id?no:10(tipphvqksvnndmivtdnngavkfpqlckfcdvrfstcdnqkscmsncsitsicekpqevcvavwrkndenitletvchdpklpyhdfiledaaspkcimkekkkpgetffmcscssdecndniifseeyntsnpdlllvifq)表示的氨基酸序列。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該細(xì)胞因子受體是il2rβ的片段，從而形成tgfβr2-tril12rβ重定向受體，其包含與由seq?id?no:16(tipphvqksvnndmivtdnngavkfpqlckfcdvrfstcdnqkscmsncsitsicekpqevcvavwrkndenitletvchdpklpyhdfiledaaspkcimkekkkpgetffmcscssdecndniifseeyntsnpdlllvifqvtgisllpplgvaisviiifycyrvnsdpkpenpacpwtvlpagdlpthdgylpsniddlpsheapladsleelepq)表示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、或97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，其中由seq?idno:16中所包含的seq?id?no:17(vtgisllpplgvaisviiifycyrvn)表示的氨基酸序列可以變化。

18、在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，將實體瘤靶向骨架的一個或多個多核苷酸插入內(nèi)源cd38基因座以敲除cd38。在一些實施方案中，編碼外源cd16或其變體的多核苷酸和實體瘤靶向骨架的兩個或更多個多核苷酸在三順反子構(gòu)建體中共表達(dá)。在一些實施方案中，該外源cd16或其變體包含以下中的至少一者：(a)不可裂解的高親和力cd16(hncd16)；(b)cd16的胞外域中的f176v和s197p；(c)源自cd64的全部或部分胞外域；(d)非原生(或非cd16)跨膜結(jié)構(gòu)域；(e)非原生(或非cd16)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；(f)非原生(或非cd16)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；(g)非原生刺激結(jié)構(gòu)域；以及(h)并非源自cd16并且源自相同或不同多肽的跨膜結(jié)構(gòu)域、信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和刺激結(jié)構(gòu)域。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該細(xì)胞還包含細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體，該細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體包含：(a)細(xì)胞表面表達(dá)的外源細(xì)胞因子或其受體的部分或全部肽，該細(xì)胞因子或其受體包括il2、il4、il6、il7、il9、il10、il11、il12、il15、il18、il21或其相應(yīng)受體中的至少一者；或(b)以下中的至少一者：(i)在其間具有自裂解肽的il15和il15rα的共表達(dá)；(ii)il15和il15rα的融合蛋白；(iii)il15rα的胞內(nèi)域截短的il15/il15rα融合蛋白；(iv)il15和il15rα的膜結(jié)合sushi結(jié)構(gòu)域的融合蛋白；(v)il15和il15rβ的融合蛋白；(vi)il15和共同受體γc的融合蛋白，其中該共同受體γc是原生的或經(jīng)過修飾的；以及(vii)il15rβ的同源二聚體；其中(b)(i)至(vii)中的任一者都能夠在單獨構(gòu)建體中或在雙順反子構(gòu)建體中與car共表達(dá)；或(c)以下中的至少一者：(i)il7和il7rα的融合蛋白；(ii)il7和共同受體γc的融合蛋白，其中該共同受體γc是原生的或經(jīng)修飾的；以及(iii)il7rβ的同源二聚體，其中(c)(i)-(iii)中的任一者任選地在單獨構(gòu)建體中或在雙順反子表達(dá)盒中與car共表達(dá)；以及任選地，(d)是瞬時表達(dá)的。在一些實施方案中，(i)該car在雙順反子構(gòu)建體中與細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體共表達(dá)；并且/或者(ii)其中該car被插入tcr基因座中，以及任選地與tcr的內(nèi)源啟動子可操作地連接。在一些實施方案中，(i)該tcr基因座是tcrα和/或tcrβ的恒定區(qū)；并且/或者(ii)該tcr通過該car插入被敲除。

19、在一些實施方案中，其中該car的至少一個信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域特異性地對car與在癌細(xì)胞上表達(dá)的her2抗原的結(jié)合作出響應(yīng)，從而產(chǎn)生癌癥抗原特異性反應(yīng)，該癌細(xì)胞是乳腺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞、唾液腺癌細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、結(jié)腸直腸癌細(xì)胞或頭頸癌細(xì)胞。

20、在細(xì)胞或其群體的各種實施方案中，(i)ipsc是克隆ipsc、單細(xì)胞解離的ipsc、ipsc細(xì)胞系細(xì)胞或ipsc主細(xì)胞庫(mcb)細(xì)胞；或(ii)衍生細(xì)胞包括衍生cd34+細(xì)胞、衍生造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞、衍生造血多潛能祖細(xì)胞、衍生t細(xì)胞祖細(xì)胞、衍生nk細(xì)胞祖細(xì)胞、衍生t譜系細(xì)胞、衍生nkt譜系細(xì)胞、衍生nk譜系細(xì)胞或衍生b譜系細(xì)胞；或(iii)衍生細(xì)胞包括具有一種或多種功能特征的衍生效應(yīng)細(xì)胞，該一種或多種功能特征不存在于對應(yīng)的原代t細(xì)胞、nk細(xì)胞、nkt細(xì)胞和/或b細(xì)胞中。在一些實施方案中，與從外周血、臍帶血或任何其他供體組織獲得的沒有相同基因編輯的該衍生細(xì)胞的對應(yīng)原代細(xì)胞相比，該衍生細(xì)胞具有包括以下中的一者或多者的治療特性：(i)增加的細(xì)胞毒性；(ii)改善的存留和/或存活；(iii)增強(qiáng)的將旁鄰免疫細(xì)胞遷移到腫瘤部位以及/或者激活或募集旁鄰免疫細(xì)胞的能力；(iv)改善的腫瘤浸潤；(v)增強(qiáng)的降低腫瘤免疫抑制的能力；(vi)提高的挽救腫瘤抗原逃逸的能力；(vii)控制的凋亡；(viii)增強(qiáng)或獲得的adcc；以及(ix)避免自相殘殺的能力。在細(xì)胞或其群體的一些實施方案中，該細(xì)胞是nk譜系細(xì)胞或t譜系細(xì)胞，其中：(i)nk譜系細(xì)胞或t譜系細(xì)胞在腫瘤部位具有改善的浸潤和/或滯留；(ii)nk譜系細(xì)胞能夠募集t細(xì)胞和/或?qū)細(xì)胞遷移到腫瘤部位；或(iii)在存在一種或多種檢查點抑制劑的情況下，nk譜系細(xì)胞或t譜系細(xì)胞能夠降低腫瘤免疫抑制。

21、在另一個方面，本發(fā)明提供了一種組合物，該組合物包含本文所提供的細(xì)胞或其群體。在組合物的各種實施方案中，該組合物還包含一種或多種治療劑。在組合物的一些實施方案中，該一種或多種治療劑包括肽、細(xì)胞因子、檢查點抑制劑、絲裂原、生長因子、小rna、dsrna(雙鏈rna)、單核血細(xì)胞、飼養(yǎng)細(xì)胞、飼養(yǎng)細(xì)胞組分或其置換因子、包含一種或多種所關(guān)注多核酸的載體、抗體、化學(xué)治療劑或放射性部分或免疫調(diào)節(jié)藥物(imid)。在其中治療劑是檢查點抑制劑的組合物的一些實施方案中，該檢查點抑制劑包含：(a)針對檢查點分子的一種或多種拮抗劑，該檢查點分子包括pd-1、pdl-1、tim-3、tigit、lag-3、ctla-4、2b4、4-1bb、4-1bbl、a2ar、bate、btla、cd39、cd47、cd73、cd94、cd96、cd160、cd200、cd200r、cd274、ceacam1、csf-1r、foxp1、garp、hvem、ido、edo、tdo、lair-1、mica/b、nr4a2、mafb、oct-2、rara(視黃酸受體α)、tlr3、vista、nkg2a/hla-e或抑制性kir；(b)阿特珠單抗、阿維魯單抗、度伐單抗、伊匹單抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木單抗、莫納利珠單抗、納武單抗、帕博利珠單抗和它們的衍生物或功能等效物中的一者或多者；或者(c)阿特珠單抗、納武單抗和帕博利珠單抗中的至少一者。在其中治療劑是抗體的組合物的一些實施方案中，該抗體包括：(a)抗cd20抗體、抗her2抗體、抗cd52抗體、抗egfr抗體、抗cd123抗體、抗gd2抗體、抗pdl1抗體或抗cd38抗體；或(b)利妥昔單抗、維妥珠單抗、奧法木單抗、烏妥昔單抗、奧卡妥珠單抗、奧妥珠單抗、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、阿倫單抗、西妥昔單抗、迪妥昔單抗、阿維魯單抗、達(dá)克利珠單抗、巴利昔單抗、m-a251、2a3、bc69、24204、22722、24212、mab23591、fn50、298614、af2359、cy1g4、df1513、比伐珠單抗、rg7356、g44-26、7g3、csl362、依托珠單抗、達(dá)雷木單抗、伊沙妥昔單抗(isatuximab)、mor202和它們的人源化或經(jīng)fc修飾的變體或片段和它們的功能等效物以及它們的生物類似物中的一者或多者。在其中治療劑是銜接子的組合物的一些實施方案中，該銜接子包含：(i)雙特異性t細(xì)胞銜接子(bite)；(ii)雙特異性殺傷細(xì)胞銜接子(bike)；或(iii)三特異性殺傷細(xì)胞銜接子(trike)；或者該銜接子包含：(a)第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域識別該細(xì)胞或旁路免疫效應(yīng)細(xì)胞的cd3、cd28、cd5、cd16、cd64、cd32、cd33、cd89、nkg2c、nkg2d或它們的任何功能性變體的胞外部分；以及(b)第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)Π韵轮械娜我徽叩目乖哂刑禺愋裕篵7h3、cd10、cd19、cd20、cd22、cd24、cd30、cd33、cd34、cd38、cd44、cd52、cd79a、cd79b、cd123、cd138、cd179b、cea、clec12a、cs-1、dll3、egfr、egfrviii、epcam、flt-3、folr1、folr3、gd2、gpa33、her2、hm1.24、lgr5、msln、mcsp、mica/b、muc1、muc16、pdl1、psma、pama、p-鈣粘素、ror1或vegf-r2。

22、在另一個方面，本發(fā)明提供了本文所提供的組合物的治療用途，該治療用途通過將該組合物引入需要過繼性細(xì)胞療法的受試者體內(nèi)，其中該受試者患有自身免疫性障礙、血液系統(tǒng)惡性腫瘤、實體瘤、癌癥或病毒感染。在另一個方面，本發(fā)明提供了一種包含本文所提供的克隆ipsc的主細(xì)胞庫(mcb)。

23、在另一個方面，本發(fā)明提供了一種制備本文所提供的衍生細(xì)胞的方法，其中該衍生細(xì)胞是免疫效應(yīng)細(xì)胞，并且該方法包括：(i)獲得基因工程改造的ipsc，其中該ipsc包含實體瘤靶向骨架，該實體瘤靶向骨架包含以下中的兩者或更多者：(a)編碼c-x-c基序趨化因子受體或其變體的多核苷酸；(b)編碼tgfβ信號傳導(dǎo)重定向受體(tgfβ-srr)的多核苷酸，該tgfβ-srr包含轉(zhuǎn)化生長因子β受體(tgfβr)的胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)的部分或全部肽；以及(c)編碼同種異體免疫防御受體(adr)的多核苷酸；(ii)使經(jīng)基因工程改造的ipsc分化成衍生cd34+細(xì)胞；以及(iii)將衍生cd34+細(xì)胞分化成免疫效應(yīng)細(xì)胞，其中該免疫效應(yīng)細(xì)胞保留實體瘤靶向骨架。在一些實施方案中，該adr對4-1bb具有特異性。在制備方法的一些實施方案中，獲得包含實體瘤靶向骨架的基因工程改造的ipsc包括：(a)將用于共表達(dá)的兩個或更多個多核苷酸整合到內(nèi)源cd38基因座中并敲除cd38；其中用于共表達(dá)的該兩個或更多個多核苷酸在順反子構(gòu)建體中；并且其中該多核苷酸編碼以下中的至少兩者：(i)c-x-c基序趨化因子受體；(ii)tgfβ-ssr；以及(iii)同種異體免疫防御受體(adr)。在制備方法的一些實施方案中，(i)該順反子構(gòu)建體還包含編碼外源cd16或其變體的多核苷酸；(ii)該c-x-c基序趨化因子受體包含cxcr2或cxcr3；(iii)該tgfβ-srr包含tgfβr2-il2rβ、tgfβr2-il12rβ、tgfβr2-il18rβ或tgfβr2-tril12rβ重定向受體；或(iv)該adr對4-1bb或cd38具有特異性。

24、在制備方法的各種實施方案中，該方法還包括通過將編碼嵌合抗原受體(car)的多核苷酸整合到tcr基因座處來對包含實體瘤靶向骨架的ipsc進(jìn)行基因工程改造，任選地其中(i)該car與該tcr的內(nèi)源啟動子可操作地連接，并且/或者(ii)該tcr通過該car插入被敲除。在一些實施方案中，該car在雙順反子構(gòu)建體中與細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體共表達(dá)；或者其中該tcr基因座是tcrα或tcrβ的恒定區(qū)。在一些實施方案中，該細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)復(fù)合體包含以下中的至少一者：(i)il7和il7rα的融合蛋白；(ii)il15和il15rα的融合蛋白；以及(iii)il15rα的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域截短的il15/il15rα融合蛋白。

25、在制備方法的一些實施方案中，該car是：(i)對腫瘤相關(guān)抗原具有特異性；(ii)對實體瘤相關(guān)抗原具有特異性；(iii)對泛腫瘤抗原具有特異性；或(iv)對b7h3、bcma、cd19、cd38、cd79b、egp2/epcam、gprc5d、her2、klk2、mica/b和mr1中的一者具有特異性。在一些實施方案中，對癌細(xì)胞上表達(dá)的her2抗原具有特異性的car包含抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：(i)重鏈可變(vh)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:103(nygms)的重鏈互補決定區(qū)1(h-cdr1)、含有seq?id?no:104(tinnngggtyypdsvkg)的重鏈互補決定區(qū)2(h-cdr2)和含有seq?id?no:105(pgllwda)的重鏈互補決定區(qū)3(h-cdr3)；以及任選的(ii)輕鏈可變(vl)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:106(kssqslldsdgrtyln)的輕鏈互補決定區(qū)1(l-cdr1)、含有seq?id?no:107(lvsklds)的輕鏈互補決定區(qū)2(l-cdr2)和含有seq?id?no:108(wqgthfpqt)的輕鏈互補決定區(qū)3(l-cdr3)。在制備方法的一些實施方案中，該抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域：(a)包含與seq?id?no:109具有至少80％序列同一性的vh結(jié)構(gòu)域；(b)包含與seq?idno:110具有至少80％序列同一性的vl結(jié)構(gòu)域；(c)包含單鏈可變片段(scfv)，其包含vh-接頭-vl或vl-接頭-vh，其中該接頭在長度和序列上不同，并且任選地其中該接頭與seq?idno:111-114具有至少80％的序列同一性；(d)包含由與seq?id?no:115或seq?id?no:116具有至少約99％、約98％、約96％、約95％、約90％、約85％或約80％同一性的氨基酸序列表示的scfv，其中seq?id?no:115和116中的每一者包含在長度和序列上不同的接頭；并且/或者(e)是人源化的。

26、在制備方法的一些實施方案中，該方法還包括通過以下中的一者或多者對包含實體瘤靶向骨架的ipsc進(jìn)行基因工程改造：(a)引入hla-i缺乏和/或hla-ii缺乏；(b)缺失或破壞b2m、ciita、tap1、tap2、tapasin、nlrc5、rfxank、rfx5、rfxap、tcr、nkg2a、nkg2d、cd25、cd44、cd54、cd56、cd58、cd69、cis、cbl-b、socs2、pd1、ctla4、lag3、tim3和tigit中的一者或多者；以及(c)引入hla-g、hla-e、4-1bbl、cd3、cd4、cd8、cd16、cd47、cd113、cd131、cd137、cd80、pdl1、a2ar、抗原特異性tcr、嵌合融合受體(cfr)、fc受體、抗體或其功能性變體或片段、檢查點抑制劑、銜接子和用于與激動劑偶聯(lián)的表面觸發(fā)受體中的至少一者。在一些實施方案中，該基因組工程改造包括靶向編輯。在一些實施方案中，該靶向編輯通過crispr、zfn、talen、歸巢核酸酶、同源重組或這些方法的任何其他功能性變型進(jìn)行。

27、在另一個方面，本發(fā)明提供了一種治療需要過繼性細(xì)胞療法的受試者的方法，其中該方法包括向受試者輸注效應(yīng)細(xì)胞，其中該效應(yīng)細(xì)胞包含如本文所提供的衍生細(xì)胞或其群體。在治療方法的一些實施方案中，該效應(yīng)細(xì)胞包含對在癌細(xì)胞上表達(dá)的her2抗原具有特異性的car，其中該car包含：(i)重鏈可變(vh)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:103(nygms)的重鏈互補決定區(qū)1(h-cdr1)、含有seq?id?no:104(tinnngggtyypdsvkg)的重鏈互補決定區(qū)2(h-cdr2)和含有seq?id?no:105(pgllwda)的重鏈互補決定區(qū)3(h-cdr3)；以及任選的(ii)輕鏈可變(vl)結(jié)構(gòu)域，其包含含有seq?id?no:106(kssqslldsdgrtyln)的輕鏈互補決定區(qū)1(l-cdr1)、含有seq?id?no:107(lvsklds)的輕鏈互補決定區(qū)2(l-cdr2)和含有seq?id?no:108(wqgthfpqt)的輕鏈互補決定區(qū)3(l-cdr3)；其中該car位于trac基因座處，并且該car表達(dá)由內(nèi)源tcr啟動子驅(qū)動；并且其中需要過繼性細(xì)胞療法的受試者患有乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、食管癌、唾液腺癌、膀胱癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌或頭頸癌。

28、在治療方法的一些實施方案中，該效應(yīng)細(xì)胞還包含實體瘤靶向骨架，并且其中該效應(yīng)細(xì)胞：(i)在cd38基因座處包含以下中的兩者或更多者：(a)編碼cxcr2的多核苷酸；(b)編碼tgfβr2-il18rβ重定向受體或tgfβr2-tril12rβ重定向受體的多核苷酸；以及(c)編碼同種異體免疫防御受體(adr)的多核苷酸；(ii)在cd38基因座處包含編碼外源cd16或其變體的多核苷酸；(iii)在trac基因座處包含編碼il7和il7rα的融合蛋白的多核苷酸；以及(iv)cd38敲除和tcr敲除。在一些實施方案中，該adr對4-1bb具有特異性。在治療方法的一些實施方案中，該方法還包括向該受試者施用一種或多種治療劑，其中該一種或多種治療劑包括：(i)細(xì)胞因子、抗體、銜接子、檢查點抑制劑、化學(xué)治療劑或放射性部分或免疫調(diào)節(jié)藥物(imid)；(ii)抗cd38抗體，包括達(dá)雷木單抗、伊沙妥昔單抗或mor202；(iii)銜接子，包括bite(雙特異性t細(xì)胞銜接子)或trike(三特異性殺傷細(xì)胞銜接子)；(iv)檢查點抑制劑，包括阿特珠單抗、阿維魯單抗、度伐單抗、伊匹單抗、iph4102、iph43、iph33、利瑞木單抗、莫納利珠單抗、納武單抗或帕博利珠單抗；和/或(v)化學(xué)治療劑，包括環(huán)磷酰胺和氟達(dá)拉濱(cy/flu)。在治療方法的一些實施方案中，效應(yīng)細(xì)胞包含cd38敲除和tcr敲除以及任選的對4-1bb具有特異性的adr，其中該方法包括向該受試者施用抗cd38抗體，并且其中該方法不需要、或需要最少的淋巴耗竭，該淋巴耗竭包括向該受試者施用cy/flu。在治療方法的一些實施方案中，效應(yīng)細(xì)胞是同種異體的，并且其中向受試者輸注效應(yīng)細(xì)胞在門診環(huán)境中進(jìn)行。

29、在另一個方面，本發(fā)明提供了一種在治療患有實體瘤的受試者中改善過繼性細(xì)胞療法的方法，其中該方法包括施用本文所提供的衍生細(xì)胞群，并且任選地其中衍生細(xì)胞與沒有實體瘤靶向骨架的對應(yīng)細(xì)胞相比在實體瘤中具有改善的運輸、腫瘤微環(huán)境(tme)抗性和/或同種異體反應(yīng)性抗性。

30、在另一個方面，本發(fā)明提供了一種改善抗her2單克隆抗體(mab)治療的方法，該方法包括：向需要該治療的受試者引入包含效應(yīng)細(xì)胞的組合物，該效應(yīng)細(xì)胞包含編碼casmab250-car的多核苷酸、編碼cxcr2的多核苷酸、編碼tgfβ-srr的多核苷酸和編碼外源cd16或其變體的多核苷酸；以及向該受試者引入抗her2?mab。在各種實施方案中，抗her2mab是曲妥珠單抗(herceptintm)。

31、在一個方面，本發(fā)明提供一種選擇包含所關(guān)注轉(zhuǎn)基因的nk細(xì)胞的方法。在一些實施方案中，該方法包括：(i)獲得包含構(gòu)建體的工程改造的nk細(xì)胞，該構(gòu)建體共表達(dá)所關(guān)注轉(zhuǎn)基因以及細(xì)胞表面表達(dá)的外源細(xì)胞因子或其受體的部分或全部肽，該細(xì)胞因子或其受體包含il15或其相應(yīng)受體中的至少一者；或(1)至(7)中的至少一者：(1)在其間具有自裂解肽的il15和il15rα的共表達(dá)；(2)il15和il15rα的融合蛋白；(3)il15rα的胞內(nèi)域截短的il15/il15rα融合蛋白；(4)il15和il15rα的膜結(jié)合sushi結(jié)構(gòu)域的融合蛋白；(5)il15和il15rβ的融合蛋白；(6)il15和共同受體γc的融合蛋白，其中該共同受體γc是原生的或經(jīng)修飾的；以及(7)il15rβ的同源二聚體；(ii)在不向工程改造的nk細(xì)胞提供外源il15細(xì)胞因子的情況下培養(yǎng)細(xì)胞；以及(iii)收集在沒有外源il15細(xì)胞因子的情況下擴(kuò)增的nk細(xì)胞，從而選擇包含所關(guān)注轉(zhuǎn)基因的工程改造的nk細(xì)胞。

32、通過結(jié)合附圖進(jìn)行的以下描述，如本文所提供的組合物和方法的各個目的和優(yōu)勢將變得顯而易見，在這些附圖中借助于說明和示例闡述本發(fā)明的某些實施方案。