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通過級聯酶促法提高PAL-催化蛋白連接效率

文檔序號:40548856發(fā)布日期:2025-01-03 11:08閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種酶促肽連接的方法,其特征在于,所述方法包括提供

2.如權利要求1所述的方法,其特征在于,p2′選自下組:leu、met、phe、tyr、trp、val、ile和thr。

3.如權利要求1或2所述的方法,其特征在于,p2″選自下組:leu、phe、tyr、trp、val、ile、和thr。

4.如權利要求1至3中任一項所述的方法,其特征在于,所述pal選自下組:包含如seqid?no:1所示的氨基酸序列的丁酸酶1(butelase1)、包含如seq?id?no:2或3所示的氨基酸序列的丁酸酶-2(butelase-2)、包含如seq?id?no:4所示的氨基酸序列的vypal2、包含如seq?id?no:5所示的氨基酸序列的vypal3、包含如seq?id?no:6所示的氨基酸序列的oaaep1b-c247a、,其包含如seq?id?no:7所示的氨基酸序列的heaep3、包含如seq?id?no:8所示的氨基酸序列的atlegγ、包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列的vupal1、包含如seqid?no:10所示的氨基酸序列的hapal1、包含如seq?id?no:11所示的氨基酸序列的oaaep1b、及其功能片段或變體。

5.如權利要求1至4中任一項所述的方法,其特征在于,所述qc選自下組:包含如seq?idno:12所示的氨基酸序列的人谷氨酰胺環(huán)化酶、包含如seq?id?no:13所示的氨基酸序列的小鼠谷氨酰胺環(huán)化酶、包含如seq?id?no:14所示的氨基酸序列的果蠅谷氨酰胺環(huán)化酶、包含如seq?id?no:15所示的氨基酸序列的擬南芥谷氨酰胺環(huán)化酶、包含如seq?id?no:16所示的氨基酸序列的芋螺(conus)谷氨酰胺環(huán)化酶、包含如seq?id?no:17所示的氨基酸序列的侏儒響尾蛇(sistrurus)氨酰胺環(huán)化酶、包含如seq?id?no:18所示的氨基酸序列的細菌谷氨酰胺環(huán)化酶、及其功能片段或變體。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法,其特征在于,所述第二肽/蛋白質還包括p1″-p2″酰基受體和所述第二肽/蛋白質之間的至少一個氨基酸的間隔物。

7.如權利要求1至6中任一項所述的方法,其特征在于,qc:pal:第一肽或蛋白質的比率分別在0.1:1:1000至1:1:50的范圍內,較佳地,分別在0.1:1:1000至0.1:1:50的范圍內。

8.如權利要求1至7中任一項所述的方法,其特征在于,所述第一和第二肽/蛋白質相同,并在連接時形成二聚體。

9.如權利要求1至7中任一項所述的方法,其特征在于,所述第一和第二肽或蛋白質的其中一個是表位結合肽或蛋白質,另一個肽或蛋白質包含有效載荷。

10.如權利要求9所述的方法,其特征在于,所述有效載荷還包括有效載荷-釋放連桿。

11.如權利要求9或10所述的方法,其特征在于,所述表位結合肽/蛋白質選自下組:抗體或其功能片段、親和體如zegfr或zegfr-fc的和darpin。

12.如權利要求11所述的方法,其特征在于,所述抗體或其功能片段選自下組:小型抗體、雙抗體、scfv、納米抗體和f(ab′)2。

13.如權利要求9至12中任一項所述的方法,其特征在于,所述的有效載荷為成像劑或治療劑。

14.如權利要求13所述的方法,其特征在于,所述的成像劑為放射性標記螯合劑或光學標記。

15.如權利要求14所述的方法,其特征在于,所述的放射性標記螯合劑選自下組:1,4,7-三氮雜環(huán)壬烷三乙酸(nota),1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸(dota)和1,4,7-三氮雜環(huán)-1-戊二酸-4,7-二乙酸(nodaga);和/或所述光學標記為hrp或gfp或類似物。

16.如權利要求13所述的方法,其特征在于,所述治療劑為單甲基奧瑞他汀e(mmae)或放射性標記的dota。


技術總結
本發(fā)明總體上涉及酶促肽或蛋白質連接。具體地,本發(fā)明提供了一種改進的酶促肽或蛋白質連接方法,其包括將肽基天冬酰胺基基連接酶(PAL)催化的連接與谷氨酰胺環(huán)化酶(QC)催化的焦谷氨酰形成偶聯,以提高連接產物的產率。

技術研發(fā)人員:劉傳法,夏軼尹,李富鵬
受保護的技術使用者:南洋理工大學
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/1/2
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