本發(fā)明涉及變體rnai分子。在一些方面，本發(fā)明涉及用于治療肌營養(yǎng)不良的變體rnai分子。

背景技術(shù)：

1、在對(duì)基因功能的基礎(chǔ)研究中，已經(jīng)證實(shí)rna干擾(rnai)是基因沉默的有用工具，并且rnai顯示出作為治療劑阻抑與許多疾病的發(fā)展相關(guān)的基因的巨大前景。在自然界中，由rnai進(jìn)行的基因調(diào)控通過稱為微rna(mirna)的小rna進(jìn)行(ambros,(2004)nature[自然]431:350-355；krol等人,(2010)nat.rev.genet.[自然綜述：遺傳學(xué)]11:597-610)。微rna已經(jīng)成為多種細(xì)胞過程的有力調(diào)控劑，并且當(dāng)由病毒載體遞送時(shí)，人工mirna被連續(xù)表達(dá)，從而導(dǎo)致靶基因的穩(wěn)健且持續(xù)的阻抑。對(duì)mirna加工中涉及的機(jī)制的闡明已經(jīng)允許科學(xué)家利用內(nèi)源性細(xì)胞rnai機(jī)制并使用人工mirna來指導(dǎo)靶基因產(chǎn)物的降解(參見，例如us?pg?pub.[授權(quán)前公開]2014/0163214和davidson等人,(2012)cell[細(xì)胞]150:873-875)。

2、肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良1型(dm1)是由dmpk基因座中ctg重復(fù)序列(>50)的擴(kuò)增引起的單基因、常染色體顯性的進(jìn)行性疾病。具有重復(fù)序列的dmpk轉(zhuǎn)錄成mrna，該mrna形成發(fā)夾并結(jié)合rna結(jié)合蛋白，從而使這些結(jié)合蛋白無法發(fā)揮其正常功能。這導(dǎo)致核灶的出現(xiàn)、mrna的錯(cuò)誤剪接并且最終導(dǎo)致肌強(qiáng)直。dm1主要影響骨骼肌、心肌和平滑肌，從而引起顯著的身體、認(rèn)知和行為損害和殘疾。目前尚無批準(zhǔn)用于dm1的療法。因此，對(duì)于治療dm1的療法存在高度未滿足的醫(yī)學(xué)需求。

3、本文引用的所有參考文獻(xiàn)，包括專利申請(qǐng)和出版物，均通過援引以其全文并入。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、在一些方面，本發(fā)明提供了包含第一鏈和第二鏈的rnai，其中a)該第一鏈和該第二鏈形成雙鏈體；b)該第一鏈包含指導(dǎo)區(qū)，其中該指導(dǎo)區(qū)包含具有序列5’-agucgaagacaguucuagggu-3’(seq?id?no:1)或具有與seq?id?no:1的序列具有約90％同一性的序列的核酸；并且c)第二鏈包含非指導(dǎo)區(qū)。在一些實(shí)施例中，該非指導(dǎo)區(qū)包含具有序列5’acccuagaugucuucgauu-3’(seq?id?no:2)或具有與seq?id?no:2的序列具有約90％同一性的序列的核酸。在一些實(shí)施例中，該第一鏈包含具有seq?id?no:1的序列的核酸，并且該非指導(dǎo)區(qū)包含具有seq?id?no:2的序列的核酸。在一些實(shí)施例中，該第一鏈和該第二鏈借助于能夠形成環(huán)結(jié)構(gòu)的rna接頭連接。在一些實(shí)施例中，該rna接頭包含約4至約50個(gè)核苷酸。在一些實(shí)施例中，該環(huán)結(jié)構(gòu)包含約4至約20個(gè)核苷酸。在一些實(shí)施例中，該環(huán)結(jié)構(gòu)包含具有seq?id?no:3的序列或具有與seq?id?no:3的序列具有約90％同一性的序列的核酸序列。在一些實(shí)施例中，該rnai從5’至3’包含該第二鏈、該rna接頭和該第一鏈。在一些實(shí)施例中，該rnai從5’至3’包含該第一鏈、該rna接頭和該第二鏈。在一些實(shí)施例中，該rnai包含具有seqid?no:7的序列或具有與seq?id?no:7的序列具有約90％同一性的序列的核酸。在一些實(shí)施例中，該rnai是小抑制性rna(sirna)、微rna(mirna)或小發(fā)夾rna(shrna)。

2、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該rnai進(jìn)一步包含支架。在一些實(shí)施例中，該支架包含seq?id?no:11的核酸的全部或一部分。在一些實(shí)施例中，該mirna嵌入該支架內(nèi)。在一些實(shí)施例中，該支架具有5’臂和3’臂，其中該5’臂位于編碼該rnai的核酸的5’，其中該3’臂位于編碼該rnai的核酸的3’。在一些實(shí)施例中，該支架是mir-155支架。在一些實(shí)施例中，該mir-155支架包含位于該rnai的5'的具有seq?id?no:9的序列或與seq?id?no:9的序列具有約90％同一性的序列的核酸。在一些實(shí)施例中，該mir-155支架包含位于該rnai的3'的具有seq?id?no:10的序列或與seq?id?no:10的序列具有約90％同一性的序列的核酸。

3、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該rnai靶向編碼與肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良1型(dm1)相關(guān)的多肽的rna。在一些實(shí)施例中，該多肽是營養(yǎng)不良性肌強(qiáng)直蛋白激酶(dmpk)。在一些實(shí)施例中，該dmpk包含與dm1相關(guān)的突變。在一些實(shí)施例中，編碼dmpk的基因包含5個(gè)或更多個(gè)ctg三核苷酸重復(fù)序列。

4、在一些方面，本發(fā)明提供了一種表達(dá)盒，該表達(dá)盒包含編碼本文所述的任何rnai的核酸。在一些實(shí)施例中，編碼該rnai的核酸與啟動(dòng)子可操作地連接。在一些實(shí)施例中，該啟動(dòng)子是肌肉特異性啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，該啟動(dòng)子是結(jié)蛋白啟動(dòng)子或其變體。在一些實(shí)施例中，該結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件、和人結(jié)蛋白基因的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，該結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含兩個(gè)增強(qiáng)子元件、和該人結(jié)蛋白基因的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，該結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含一個(gè)或多個(gè)byrne增強(qiáng)子元件和/或一個(gè)或多個(gè)paulin增強(qiáng)子元件。在一些實(shí)施例中，該結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含：包含seq?id?no:21的核苷酸序列或與seq?idno:21的序列具有約90％同一性的核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件，和/或包含seq?idno:22的核苷酸序列或與seq?id?no:22的序列具有約90％同一性的核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件。在一些實(shí)施例中，該結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含seq?id?no:12的核苷酸序列或與seqid?no:12的核苷酸序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒進(jìn)一步包含內(nèi)含子。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子是兔β-珠蛋白內(nèi)含子。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子包含seq?id?no:13的核苷酸序列或與seq?id?no:13的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，編碼該rnai的核酸嵌入該內(nèi)含子中。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子包含5'臂和3'臂，其中該5'臂位于編碼該rnai的核酸的5'并且該3'臂位于編碼該rnai的核酸的3'。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子的5'臂包含seq?id?no:14的核苷酸序列或與seq?id?no:14的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子的3'臂包含seq?id?no:15的核苷酸序列或與seq?idno:15的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒進(jìn)一步包含聚腺苷酸化信號(hào)。在一些實(shí)施例中，該聚腺苷酸化信號(hào)是牛生長激素聚腺苷酸化信號(hào)、sv40聚腺苷酸化信號(hào)或hsv?tk?pa。在一些實(shí)施例中，該聚腺苷酸化信號(hào)是最小牛生長激素聚腺苷酸化信號(hào)。在一些實(shí)施例中，該牛生長激素聚腺苷酸化信號(hào)包含seq?id?no:16的核苷酸序列或與seq?id?no:16的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒包含seqid?no:17的核苷酸序列或與seq?id?no:17的序列具有約90％同一性的序列。

5、在一些方面，本發(fā)明提供了一種表達(dá)盒，其中該表達(dá)盒包含經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子，其中該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件、和人結(jié)蛋白基因的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含兩個(gè)增強(qiáng)子元件、和該人結(jié)蛋白基因的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含一個(gè)或多個(gè)byrne增強(qiáng)子元件和/或一個(gè)或多個(gè)paulin增強(qiáng)子元件。在一些實(shí)施例中，該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含：包含seqid?no:21的核苷酸序列或與seq?id?no:21的序列具有約90％同一性的核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件，和/或包含seq?id?no:22的核苷酸序列或與seq?id?no:22的序列具有約90％同一性的核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件。在一些實(shí)施例中，該結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含seq?id?no:12的核苷酸序列或與seq?id?no:12的核苷酸序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒進(jìn)一步包含內(nèi)含子。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子是兔β-珠蛋白內(nèi)含子。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子包含seq?id?no:13的核苷酸序列或與seq?id?no:13的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，編碼轉(zhuǎn)基因的核酸嵌入該內(nèi)含子中。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子包含5'臂和3'臂，其中該5'臂位于該編碼轉(zhuǎn)基因的核酸的5'并且該3'臂位于該編碼轉(zhuǎn)基因的核酸的3'。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子的5'臂包含seq?id?no:14的核苷酸序列或與seq?id?no:14的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該內(nèi)含子的3'臂包含seq?id?no:15的核苷酸序列或與seq?id?no:15的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒進(jìn)一步包含聚腺苷酸化信號(hào)。在一些實(shí)施例中，該聚腺苷酸化信號(hào)是牛生長激素聚腺苷酸化信號(hào)、sv40聚腺苷酸化信號(hào)或hsv?tk?pa。在一些實(shí)施例中，該聚腺苷酸化信號(hào)是最小牛生長激素聚腺苷酸化信號(hào)。在一些實(shí)施例中，該牛生長激素聚腺苷酸化信號(hào)包含seq?id?no:16的核苷酸序列或與seq?id?no:16的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因編碼多肽或核酸。在一些實(shí)施例中，該轉(zhuǎn)基因編碼rnai。

6、在一些方面，本發(fā)明提供了包含本文所述的任何表達(dá)盒的載體。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒的側(cè)翼是一個(gè)或多個(gè)填充(stuffer)核酸序列。在一些實(shí)施例中，該一個(gè)或多個(gè)填充核酸序列源自人serpina1基因。在一些實(shí)施例中，位于該表達(dá)盒5'的填充核酸序列源自該人serpina1基因。在一些實(shí)施例中，位于該表達(dá)盒5’的填充序列包含seq?id?no:18的核苷酸序列或與seq?id?no:18的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，位于該表達(dá)盒3'的填充核酸序列源自該人serpina1基因。在一些實(shí)施例中，位于該表達(dá)盒3’的填充序列包含seq?id?no:19的核苷酸序列或與seq?id?no:19的序列具有約90％同一性的序列。

7、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該載體是重組腺相關(guān)病毒(raav)載體。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒的側(cè)翼是一個(gè)或多個(gè)aav反向末端重復(fù)(itr)序列。在一些實(shí)施例中，該表達(dá)盒的側(cè)翼是兩個(gè)aav?itr。在一些實(shí)施例中，這些aav?itr是aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aavrh8、aavrh8r、aav9、aav10、aavrh10、aav11、aav12、aav2r471a、aavdj、山羊aav、牛aav或小鼠aav血清型itr。在一些實(shí)施例中，這些aav?itr是aav2?itr。在一些實(shí)施例中，該raav載體包含seq?id?no:20的核苷酸序列或與seq?id?no:20的序列具有約90％同一性的序列。在一些實(shí)施例中，該載體是自身互補(bǔ)的raav載體。

8、在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了包含本文所述的任何表達(dá)盒、本文所述的任何載體或本文所述的任何raav載體的細(xì)胞。

9、在一些方面，本發(fā)明提供了包含本文所述的任何載體的病毒顆粒。在一些方面，本發(fā)明提供了包含本文所述的任何raav載體的重組aav顆粒。在一些實(shí)施例中，該aav病毒顆粒包含aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aavrh8、aavrh8r、aav9、aav10、aavrh10、aav11、aav12、aavrh74、aavrh74?n502i、aavrh74?w505r、aav2r471a、aav2/2-7m8、aav?dj、aav2?n587a、aav2?e548a、aav2n708a、aav?v708k、aav2-hbko、aavdj8、aavphp.b、aavphp.eb、aavbr1、aavhsc15、aavhsc17、山羊aav、aav1/aav2嵌合型、牛aav、或小鼠aav衣殼raav2/hbov1血清型衣殼。在一些實(shí)施例中，itr和該raav病毒顆粒的衣殼源自相同的aav血清型。在一些實(shí)施例中，itr和該raav病毒顆粒的衣殼源自不同的aav血清型。在一些實(shí)施例中，該aav病毒顆粒包含aavrh74?n502i血清型衣殼。在一些實(shí)施例中，該itr是aav2?itr并且該raav顆粒的衣殼是aavrh74?n502i血清型衣殼。在一些實(shí)施例中，該aav病毒顆粒包含aavrh74?w505r血清型衣殼。在一些實(shí)施例中，該itr是aav2?itr并且該raav顆粒的衣殼是aavrh74w505r血清型衣殼。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種包含raav載體和衣殼的raav顆粒，其中該raav載體從5'至3’包含以下核酸：aav2?itr，編碼來自人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，byrne結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，paulin結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，結(jié)蛋白啟動(dòng)子，兔β-珠蛋白內(nèi)含子的5'臂，5'mir155支架序列，dmpk204?mirna指導(dǎo)序列，mir155末端環(huán)序列，dmpk204mirna乘客序列，3'mir155支架序列，兔β-珠蛋白內(nèi)含子的3'臂，最小牛生長激素聚腺苷酸化序列，編碼來自該人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，和aav2?itr；并且其中衣殼是aavrh74?n502i衣殼。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種包含raav載體的raav顆粒，其中該raav載體從5’至3’包含以下核酸：包含seq?id?no:43的多核苷酸序列的aav2itr，編碼包含seq?id?no:18的多核苷酸序列的來自人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，包含seq?id?no:21的多核苷酸序列的byrne結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，包含seq?id?no:22的多核苷酸序列的paulin結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，包含seq?id?no:23的多核苷酸序列的結(jié)蛋白啟動(dòng)子，包含seq?id?no:14的多核苷酸序列的兔β-珠蛋白內(nèi)含子的5’臂，包含seq?id?no:40的多核苷酸序列的5’mir155支架序列，包含seq?id?no:4的多核苷酸序列的dmpk204?mirna指導(dǎo)序列，包含seq?id?no:6的多核苷酸序列的mir155末端環(huán)序列，包含seq?id?no:5的多核苷酸序列的dmpk204?mirna乘客序列，包含seq?id?no:41的多核苷酸序列的3’mir155支架序列，包含seq?id?no:15的多核苷酸序列的兔β-珠蛋白內(nèi)含子的3’臂，包含seq?id?no:16的多核苷酸序列的最小牛生長激素聚腺苷酸化序列，編碼包含seq?id?no:19的多核苷酸序列的來自該人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，和包含seq?id?no:49的多核苷酸序列的aav2?itr；并且其中衣殼是aavrh74?n502i衣殼。在一些實(shí)施例中，該aavrh74?n502i衣殼包含含有seq?id?no:50的氨基酸序列的衣殼蛋白。

10、在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種包含raav載體和衣殼的raav顆粒，其中該raav載體從5'至3’包含以下核酸：aav2?itr，編碼來自人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，byrne結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，paulin結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，結(jié)蛋白啟動(dòng)子，兔β-珠蛋白內(nèi)含子的5'臂，5'mir155支架序列，dmpk204?mirna指導(dǎo)序列，mir155末端環(huán)序列，dmpk204?mirna乘客序列，3'mir155支架序列，兔β-珠蛋白內(nèi)含子的3'臂，最小牛生長激素聚腺苷酸化序列，編碼來自該人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，和aav2?itr；并且其中衣殼是aavrh74?w505r衣殼。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種包含raav載體的raav顆粒，其中該raav載體從5’至3’包含以下核酸：包含seq?id?no:43的多核苷酸序列的aav2?itr，編碼包含seq?id?no:18的多核苷酸序列的來自人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，包含seq?id?no:21的多核苷酸序列的byrne結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，包含seq?id?no:22的多核苷酸序列的paulin結(jié)蛋白增強(qiáng)子元件，包含seq?id?no:23的多核苷酸序列的結(jié)蛋白啟動(dòng)子，包含seq?id?no:14的多核苷酸序列的兔β-珠蛋白內(nèi)含子的5’臂，包含seq?id?no:40的多核苷酸序列的5’mir155支架序列，包含seq?id?no:4的多核苷酸序列的dmpk204?mirna指導(dǎo)序列，包含seq?id?no:6的多核苷酸序列的mir155末端環(huán)序列，包含seq?id?no:5的多核苷酸序列的dmpk204?mirna乘客序列，包含seq?id?no:41的多核苷酸序列的3’mir155支架序列，包含seq?id?no:15的多核苷酸序列的兔β-珠蛋白內(nèi)含子的3’臂，包含seq?id?no:16的多核苷酸序列的最小牛生長激素聚腺苷酸化序列，編碼包含seq?id?no:19的多核苷酸序列的來自該人serpina1基因的填充核酸序列的核酸，和包含seq?id?no:49的多核苷酸序列的aav2itr；并且其中衣殼是aavrh74?w505r衣殼。在一些實(shí)施例中，該aavrh74?w505r衣殼包含含有seq?id?no:52的氨基酸序列的衣殼蛋白。

11、在一些方面，本發(fā)明提供了包含本文所述的任何病毒顆粒或raav顆粒的組合物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了包含本文所述的任何病毒顆粒或raav顆粒的藥物組合物。在一些實(shí)施例中，該組合物進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載劑。

12、在一些方面，本發(fā)明提供了一種經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子(例如，用于在肌細(xì)胞中表達(dá)轉(zhuǎn)基因)，其中該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件、和人結(jié)蛋白基因的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含兩個(gè)增強(qiáng)子元件、和該人結(jié)蛋白基因的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含一個(gè)或多個(gè)byrne增強(qiáng)子元件和/或一個(gè)或多個(gè)paulin增強(qiáng)子元件。在一些實(shí)施例中，該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含：包含seq?id?no:21的核苷酸序列或與seq?id?no:21的序列具有約90％同一性的序列的一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件，和/或包含seq?id?no:22的核苷酸序列或與seq?id?no:22的序列具有約90％同一性的序列的一個(gè)或多個(gè)增強(qiáng)子元件。在一些實(shí)施例中，該經(jīng)修飾的結(jié)蛋白啟動(dòng)子包含seq?id?no:12的核苷酸序列或與seq?id?no:12的序列具有約90％同一性的序列。

13、在一些方面，本發(fā)明提供了試劑盒，這些試劑盒包含如本文所述的rnai、如本文所述的病毒顆粒、如本文所述的aav顆粒或如本文所述的組合物中的一種或多種。在一些實(shí)施例中，該試劑盒進(jìn)一步包含使用說明書。

14、在一些方面，本發(fā)明提供了用于治療有需要的哺乳動(dòng)物的肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良1型(dm1)的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的本文所述的任何rnai。在一些方面，本發(fā)明提供了用于抑制有需要的患有dm-1的哺乳動(dòng)物中的營養(yǎng)不良性肌強(qiáng)直蛋白激酶(dmpk)表達(dá)的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的本文所述的任何rnai。在一些方面，本發(fā)明提供了用于抑制有需要的患有dm-1的哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中dmpk?rna的積聚的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的本文所述的任何rnai。

15、在一些方面，本發(fā)明提供了用于治療有需要的哺乳動(dòng)物的肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良1型(dm1)的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的如本文所述的任何病毒顆粒(例如，raav顆粒)。在一些方面，本發(fā)明提供了用于抑制有需要的患有dm-1的哺乳動(dòng)物中的營養(yǎng)不良性肌強(qiáng)直蛋白激酶(dmpk)表達(dá)的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的如本文所述的任何病毒顆粒(例如，raav顆粒)。在一些方面，本發(fā)明提供了用于抑制有需要的患有dm-1的哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中dmpk?rna的積聚的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的如本文所述的任何病毒顆粒(例如，raav顆粒)。

16、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，病毒顆粒(例如，raav顆粒)的有效量是約1×108至約2×1013個(gè)基因組拷貝/ml的劑量。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該劑量為約5×1012個(gè)基因組拷貝/ml。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該劑量為約1×1013個(gè)基因組拷貝/ml。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該劑量為約2×1013個(gè)基因組拷貝/ml。

17、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，病毒顆粒(例如，raav顆粒)的有效量是約1×108至約2×1014個(gè)基因組拷貝/kg體重的劑量。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該劑量為約5×1013個(gè)基因組拷貝/kg體重。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該劑量為約1×1014個(gè)基因組拷貝/kg體重。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該劑量為約2×1014個(gè)基因組拷貝/kg體重。

18、在一些方面，本發(fā)明提供了用于治療有需要的哺乳動(dòng)物的肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良1型(dm1)的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的如本文所述的任何組合物。在一些方面，本發(fā)明提供了用于抑制有需要的患有dm-1的哺乳動(dòng)物中的營養(yǎng)不良性肌強(qiáng)直蛋白激酶(dmpk)表達(dá)的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的如本文所述的任何組合物。在一些方面，本發(fā)明提供了用于抑制有需要的患有dm-1的哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中dmpk?rna的積聚的方法，這些方法包括向該哺乳動(dòng)物施用有效量的如本文所述的任何組合物。

19、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，該rnai與免疫抑制劑組合施用，其中該免疫抑制劑在該rnai施用之前、同時(shí)和/或之后施用。在一些實(shí)施例中，該病毒顆?；蛟搑aav顆粒與免疫抑制劑組合施用，其中該免疫抑制劑在該病毒顆?；蛟搑aav顆粒施用之前、同時(shí)和/或之后施用。在一些實(shí)施例中，該組合物與免疫抑制劑組合施用，其中該免疫抑制劑在該組合物施用之前、同時(shí)和/或之后施用。