本發(fā)明涉及抗b7-h4抗體及其組合物，以及表達或分離抗體的方法，以及用所述抗體治療癌癥的方法。

背景技術：

1、腫瘤因其具有難治愈性、高死亡率、低愈后臨床表現，而成為威脅人類健康的最嚴重的疾病之一，為此研究人員先后嘗試了多種腫瘤治療手段和技術，包括手術治療、放射治療、化學藥物治療、基因治療等等，但是截至目前仍未找到行之有效的治療手段。隨著生物技術和免疫學研究的深入，腫瘤免疫治療和抗腫瘤抗體受到業(yè)內的重視，自上世紀80年代以來，全球范圍內已有上百種抗體被批準用于腫瘤治療，目前每年提交申請進行臨床試驗的抗體更是多達數千種。

2、b7-h4在多種癌癥中都有高表達，包括卵巢癌、乳腺癌、肺癌、子宮內膜癌、胃癌、腎細胞癌、黑素瘤、結直腸癌、胰腺癌和前列腺癌。因此，b7-h4蛋白被認定為腫瘤治療的新靶點。

3、因此，需要設計針對b7-h4的抗體來治療腫瘤。

技術實現思路

1、有鑒于此，本發(fā)明提供的抗b7-h4的scfv-fc抗體、編碼抗體的多核苷酸、包含抗體或核苷酸的細胞及其使用方法。

2、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種結合b7-h4的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含：

3、1)互補決定區(qū)(cdr)1、2和3的重鏈可變區(qū)(vh)，其中vh?cdr1區(qū)包含與選定的vhcdr1氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，vh?cdr2區(qū)包含與選定的vh?cdr2氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，并且vh?cdr3區(qū)包含與選定的vh?cdr3氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；以及

4、2)cdr?1、2和3的輕鏈可變區(qū)(vl)，其中vl?cdr1區(qū)包含與選定的vl?cdr1氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，vl?cdr2區(qū)包含與選定的vl?cdr2氨基酸序列具有至少80％

5、同一性的氨基酸序列，并且vl?cdr3區(qū)包含與選定的vl?cdr3氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；

6、其中所述選定的vh?cdr?1、2和3氨基酸序列分別由seq?id?no:3、4、5所示，以及所述選定的vl?cdr?1、2和3氨基酸序列分別由seq?id?no:6、7、8所示；

7、根據本技術的某些實施方式，所述vh包含分別具有seq?id?no:3、4和5所示的氨基酸序列的cdr?1、2、3，并且所述vl包含分別具有seq?id?no:6、7和8所示的氨基酸序列的cdr1、2、3。

8、根據本技術的某些實施方式，所述抗體或抗原結合片段包含的氨基酸序列與seqid?no﹕2氨基酸序列具有至少80％同一性。

9、根據本技術的某些實施方式，所述抗體或抗原結合片段特異性結合人b7-h4。

10、根據本技術的某些實施方式，所述抗體或抗原結合片段抑制b7-h4；所述抗體或抗原結合片段與seq?id?no：11的表位結合。

11、根據本技術的某些實施方式，所述抗體或抗原結合片段是人源化抗體或其抗原結合片段。

12、根據本技術的某些實施方式，所述抗體或抗原結合片段是單鏈可變片段(scfv)。

13、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種核酸，其包含編碼多肽的多核苷酸，所述多肽包含：

14、1)重鏈可變區(qū)(vh)的免疫球蛋白重鏈或其片段，所述重鏈可變區(qū)(vh)包含分別含有由seq?id

15、no:3、4和5所示的氨基酸序列的互補決定區(qū)(cdr)1、2和3，并且其中所述vh在與包含由seq?id?no:13所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(vl)配對時結合b7-h4；或

16、2)輕鏈可變區(qū)(vl)的免疫球蛋白輕鏈或其片段，所述vl包含分別含有由seq?idno:6、7和8

17、所示的氨基酸序列的cdr?1、2和3，并且其中所述vl在與包含由seq?id?no:12所示的氨基酸序列的vh配對時結合b7-h4。

18、根據本技術的某些實施方式，所述核酸包含編碼多肽的多核苷酸，所述多肽包含含有vh的免疫球蛋白重鏈或其片段，所述vh包含分別含有由seq?id?no:3、4和5所示的氨基酸序列的cdr?1、2和3。

19、根據本技術的某些實施方式，所述核酸包含編碼多肽的多核苷酸，所述多肽包含含有vl的免疫球蛋白輕鏈或其片段，所述vl包含分別含有由seq?id?no:6、7和8所示的氨基酸序列的cdr?1、2和3。

20、根據本技術的某些實施方式，所述vh在與vl配對時特異性結合人b7-h4，或所述vl在與vh配對時特異性結合人b7-h4。

21、根據本技術的某些實施方式，所述免疫球蛋白重鏈或其片段是人源化免疫球蛋白重鏈或其片段，并且所述免疫球蛋白輕鏈或其片段是人源化免疫球蛋白輕鏈或其片段。

22、根據本技術的某些實施方式，所述核酸編碼單鏈可變片段(scfv)。

23、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種載體，所述載體包含所述核酸中的一種或多種。

24、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種載體，所述載體包含所述核酸中的兩種，其中所述載體編碼vl區(qū)和vh區(qū)，所述vl區(qū)和vh區(qū)一起結合b7-h4。

25、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種載體對，其中每個載體包含所述核酸中的一種，其中所述載體對共同編碼vl區(qū)和vh區(qū)，所述vl區(qū)和vh區(qū)一起結合b7-h4。

26、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種細胞，所述細胞包含所述載體、或所述載體對。

27、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種細胞，所述細胞包含所述核酸中的一種或多種。

28、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種細胞，所述細胞包含所述核酸中的兩種。

29、根據本技術的某些實施方式，所述兩種核酸共同編碼vl區(qū)和vh區(qū)，所述vl區(qū)和vh區(qū)一起結合b7-h4。

30、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種產生抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括

31、(a)在足以使所述細胞產生抗體或抗原結合片段的條件下培養(yǎng)所述細胞；以及

32、(b)收集由所述細胞產生的抗體或抗原結合片段。

33、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種轉基因動物，其中，所述轉基因動物表達所述抗體。

34、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種結合b7-h4的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，所述重鏈可變區(qū)(vh)包含與選定的vh序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述輕鏈可變區(qū)(vl)包含與選定的vl序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，其中所述選定的vh序列是seq?id?no:12，以及所述選定的vl序列是seq?id?no:13。

35、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種抗體或其抗原結合片段包括所述抗體或其抗原結合片段的vh?cdr?1、2、3和vl?cdr?1、2、3。

36、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種與所述抗體或其抗原結合片段交叉競爭結合b7-h4的抗體或其抗原結合片段。

37、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含所述抗體或其抗原結合片段，以及可藥用載體。

38、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種抗體-藥物綴合物，其包含與治療劑共價結合的、所述抗體或其抗原結合片段。

39、根據本技術的某些實施方式，所述治療劑是細胞毒性劑或細胞生長抑制劑。

40、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含所述抗體-藥物綴合物、以及可藥用載體。

41、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種治療患有癌癥的受試者的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效劑量的組合物，所述組合物包含所述抗體或其抗原結合片段、或所述藥物組合物或抗體-藥物綴合物。

42、根據本技術的某些實施方式，所述癌癥中b7-h4高表達。

43、根據本技術的某些實施方式，所述癌癥是結直腸癌；所述結直腸癌是結直腸腺癌。

44、根據本技術的某些實施方式，本技術提供了一種治療b7-h4相關疾病的方法，所述方法給予受試者所述抗b7-h4抗體或其抗原結合片段或所述藥物組合物或抗體-藥物綴合物。

45、根據本技術的某些實施方式，所述b7-h4相關疾病中，b7-h4高表達。

46、根據本技術的某些實施方式，所述b7-h4相關疾病是結直腸癌；所述結直腸癌是結直腸腺癌。

47、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種降低腫瘤生長速率的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效劑量的組合物，所述組合物包含所述抗體或其抗原結合片段、或所述藥物組合物或抗體-藥物綴合物。

48、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種殺死腫瘤細胞的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效劑量的組合物，所述組合物包含所述抗體或其抗原結合片段、或所述藥物組合物或抗體-藥物綴合物。

49、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種檢測樣品中b7-h4的存在或含量的方法，所述方法包括將所述樣品與所述抗b7-h4抗體或其抗原結合片段接觸，并確定樣品中b7-h4的存在或含量。

50、根據本技術的某些實施方式，所述樣品是表達b7-h4的細胞；所述表達b7-h4的細胞是癌癥細胞；所述癌癥是結直腸癌；所述結直腸癌是結直腸腺癌。

51、根據本技術的一個方面，本技術提供了一種診斷在受試者中與b7-h4相關的疾病或狀況的方法，所述方法包括：a)獲取來自所述受試者的樣品；b)將所述樣品與所述抗b7-h4抗體或其抗原結合片段接觸；c)確定在所述樣品中b7-h4的存在或含量；d)將所述b7-h4的存在或含量與所述受試者的疾病或狀況相關聯。

52、本發(fā)明的有益效果：

53、與現有技術相比，本發(fā)明所述抗b7-h4抗體具有如下優(yōu)勢和特點：

54、1)本發(fā)明涉及一種抗體及其在抗腫瘤中的應用。

55、2)本發(fā)明提供了一種新型靶向b7-h4的單克隆抗體，該抗體能夠以較高的親和力結合目標抗原人b7-h4，并且特異性強。報道過的b7-h4抗體是通過激活t細胞從而殺傷腫瘤細胞，而該抗體與之前報道的b7-h4抗體相比，可以直接作用于結腸癌細胞ht29和ls174t，抑制結腸癌細胞ht29和ls174t的增殖。

56、3)本發(fā)明還發(fā)現了此抗體的作用機制，即通過抑制jak2/stat3蛋白的磷酸化抑制結腸癌細胞ht29和ls174t的增殖，并且把結腸癌細胞ht29和ls174t細胞的細胞周期阻斷在s期，這是其他b7-h4抗體沒有做過的。

57、4)本發(fā)明還發(fā)現了此抗體的抗原表位，為相關抗腫瘤藥物的開發(fā)提供了新的研究基礎。