本發(fā)明總體上涉及具有至少一個c末端修飾的抗硬骨素抗體、以及包含此類抗體的組合物。通過引用結(jié)合以電子方式提交的材料通過引用以其整體結(jié)合在此的是計算機可讀的核苷酸/氨基酸序列表，該核苷酸/氨基酸序列表與本文同時提交并如下定義：創(chuàng)建于2019年3月21日的ascii(文本)文件名稱“52080_seqlisting.txt”，21,006字節(jié)。通過引用結(jié)合以下申請通過引用以其整體結(jié)合在此：于2012年8月2日提交的國際專利公開號pct/us2012/049331，其要求于2011年8月4日提交的美國臨時專利申請?zhí)?1/515,191的權(quán)益；于2006年4月25日提交的美國專利申請?zhí)?1/410,540，其要求于2006年4月17日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/792,645、于2006年3月13日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/782,244、于2006年2月24日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/776,847、和于2005年5月3日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/677,583的權(quán)益；以及于2006年4月25日提交的美國專利申請?zhí)?1/411,003(以美國專利號7,592,429發(fā)布)，其要求于2006年4月17日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/792,645、于2006年3月13日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/782,244、于2006年2月24日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/776,847、和于2005年5月3日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/677,583的權(quán)益。以下申請也通過引用結(jié)合在此：于2008年9月17日提交的美國專利申請?zhí)?2/212,327，其要求于2007年9月17日提交的美國臨時專利申請?zhí)?0/973,024的權(quán)益；以及于2010年6月29日提交的美國專利申請?zhí)?2/811,171，其是依照于2008年12月15日提交的國際專利申請?zhí)杙ct/us08/86864的35u.s.c.§371的美國國家階段申請，其要求于2007年12月14日提交的美國臨時專利申請?zhí)?1/013,917的權(quán)益。

背景技術(shù)：

1、骨礦物質(zhì)含量的損失可以由多種條件引起，并可能導(dǎo)致嚴重的醫(yī)學(xué)問題。例如，骨質(zhì)疏松癥是人類中的使人衰弱的疾病，并且特征在于骨骼骨質(zhì)量和礦物質(zhì)密度顯著下降、骨骼結(jié)構(gòu)惡化(包括骨微結(jié)構(gòu)的退化和骨脆性的相應(yīng)增加(即，骨強度降低))、以及患病個體易骨折。盡管骨質(zhì)疏松癥被認為是由于骨量減少導(dǎo)致骨折的風(fēng)險增加，但目前可用的骨骼障礙治療方法很少能增加成人的骨密度，并且目前大多數(shù)治療方法主要通過抑制進一步骨再吸收而不是刺激新骨形成發(fā)揮作用。目前實行開具雌激素處方以延緩骨質(zhì)流失。然而，關(guān)于患者是否獲得任何長期益處，并且雌激素是否對75歲以上的患者有任何影響存在爭議。此外，據(jù)信使用雌激素會增加患乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險。對絕經(jīng)后婦女還建議使用降鈣素，添加維生素k、或高劑量膳食鈣、添加或不添加維生素d的骨鈣素。然而，高劑量的鈣通常具有不希望的胃腸道副作用，并且必須連續(xù)監(jiān)測血清和尿鈣水平(例如，khosla和riggs,mayo?clin.proc.[梅奧診所的程序]70:978982,1995)。目前其他治療骨質(zhì)疏松癥的方法包括二膦酸鹽(例如，fosamaxtm、actoneltm、bonvivatm、zometatm、奧帕膦酸鹽(olpadronate)、奈立膦酸鹽(neridronate)、替魯膦酸鹽(skelid)、骨膦(bonefos))、甲狀旁腺激素、解鈣藥(calcilytic)、擬鈣劑(calcimimetic)(例如，西那卡塞)、他汀類、合成代謝類固醇、鑭和鍶鹽、以及氟化鈉。然而，這些治療劑通常與不希望的副作用有關(guān)(參見khosla和riggs，同上)。

2、硬骨素(sost基因的產(chǎn)物)在硬化性骨化病(特征在于骨骼過度生長和強密度骨的骨骼疾病)中是不存在的(brunkow等人,am.j.hum.genet.[美國人類遺傳學(xué)雜志],68:577-589,2001；balemans等人,hum.mol.genet.[人類分子遺傳學(xué)],10:537-543,2001)。人類硬骨素的氨基酸序列由brunkow等人(如上)報道，并且在本文中披露為seq?id?no:1。硬骨素是介導(dǎo)骨密度增加的有價值的靶。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、在一方面，本文描述的是與seq?id?no:1的硬骨素特異性結(jié)合、并且包含seq?idno:2-7中所示的六個cdr的組的抗體，其中該抗體包含重鏈，該重鏈包含在重鏈的c末端的氨基酸序列pro-ala-arg-gly(seq?id?no:8)。在一些實施例中，抗體包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包含seq?id?no:9中所示的氨基酸序列，該重鏈可變區(qū)包含seq?idno:10中所示的氨基酸序列。在一些實施例中，抗體包含在重鏈的c末端的氨基酸序列pro-ala-arg-gly-lys(seq?id?no:11)。在一些實施例中，抗體包含第一重鏈和第二重鏈，該第一重鏈包含在第一重鏈的c末端的氨基酸序列pro-ala-arg-gly(seq?id?no:8)，該第二重鏈包含野生型重鏈氨基酸序列(即，缺乏c末端pro-ala-arg-gly)。在一些實施例中，抗體包含seq?id?no:12中所示的輕鏈氨基酸序列和seq?id?no:13中所示的重鏈氨基酸序列。在一些實施例中，抗體包含在重鏈的c末端的氨基酸序列pro-ala-arg-gly-lys(seq?id?no:11)。在一些實施例中，抗體包含seq?id?no:12中所示的輕鏈氨基酸序列和seq?id?no:14中所示的重鏈氨基酸序列。

2、在一些實施例中，抗體的重鏈之一的c末端被酰胺化(即，抗體是單酰胺化的)。在一些實施例中，抗體的兩條重鏈的c末端被酰胺化(即，抗體是雙重酰胺化的)。

3、本披露還提供了包含本文描述的抗體的群體、和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在一些實施例中，藥物組合物包含與seq?id?no:1的硬骨素特異性結(jié)合的抗體的混合物和藥學(xué)上可接受的載體，其中該抗體的混合物包含抗體的群體，該抗體的群體包含在重鏈的c末端具有氨基酸序列pro-ala-arg-gly(seq?id?no:8)的重鏈。在一些實施例中，組合物中約3％-5％的抗體是包含重鏈的抗體的群體，該重鏈在重鏈的c末端具有氨基酸序列pro-ala-arg-gly(seq?id?no:8)。在一些方面，抗體的群體的小于70％在一條或兩條重鏈上被酰胺化。在一些方面，抗體的群體的全部或部分包含單個重鏈，該單個重鏈包含c末端pro-ala-arg-gly(seq?id?no:8)序列，該單個重鏈任選地被酰胺化。在一些方面，抗體的群體的全部或部分在兩個重鏈中包含c末端pro-ala-arg-gly(seq?id?no:8)序列，并且兩個重鏈任選地被酰胺化。任選地，抗體的群體的小于約35％是單酰胺化的、和/或抗體的群體的小于約35％在兩條重鏈上被酰胺化、和/或抗體的群體的小于約35％包含未被酰胺化的重鏈。在這一點上，在多個方面，抗體的群體的約33％未被酰胺化、抗體的群體的約33％包含一條酰胺化的重鏈、并且抗體的群體的約33％包含兩條酰胺化的重鏈。

4、在一些實施例中，組合物進一步包含鈣鹽、乙酸鹽緩沖液、多元醇、和表面活性劑。在一些實施例中，乙酸鹽包含乙酸鈣，乙酸鹽緩沖液包含乙酸鈉，多元醇包含蔗糖，并且表面活性劑包含聚山梨醇酯20。在一些實施例中，組合物包含55mm乙酸鹽、13mm鈣、6.0％(w/v)蔗糖、和0.006％(w/v)聚山梨醇酯20，ph?5.2。

5、本披露還提供了增加有需要的受試者中骨礦物質(zhì)密度的方法，該方法包括以有效增加受試者中骨礦物質(zhì)密度的量向受試者給予本文描述的組合物。