1.一種長(zhǎng)效胰島素類似物,其特征在于,所述長(zhǎng)效胰島類似物包括胰島素a鏈和胰島素b鏈突變體;
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)效胰島素類似物,其特征在于,所述胰島素a鏈的氨基酸序列如seq?id?no.7所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的長(zhǎng)效胰島素類似物,其特征在于,所述胰島素a鏈和胰島素b鏈突變體之間的連接關(guān)系為:胰島素a鏈位于第6位的半胱氨酸與胰島素a鏈位于第11位的半胱氨酸以二硫鍵的形式相連;胰島素a鏈位于第7位的半胱氨酸與胰島素b鏈突變體位于第7位的半胱氨酸以二硫鍵的形式相連;胰島素a鏈位于第20位的半胱氨酸與胰島素b鏈突變體位于第19位的半胱氨酸以二硫鍵的形式相連。
4.一種權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的長(zhǎng)效胰島素類似物的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的長(zhǎng)效胰島素類似物的制備方法,其特征在于,當(dāng)突變位點(diǎn)為所述胰島素b鏈上的第二十二位精氨基由丙氨酸替代,所述胰島素b鏈上的第二十九位的賴氨酸由纈氨酸替代時(shí),突變引物序列如seq?id?no.12所示;
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的長(zhǎng)效胰島素類似物的制備方法,其特征在于,第一輪pcr反應(yīng)體系為:正向引物f?25pmol?2μl,突變引物1,50pmol?1μl,模板dna?10ng?0.5μl,dntp?200μmol,10×pcr?buffer?5μl,ddh2o?40.5μl。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的長(zhǎng)效胰島素類似物的制備方法,其特征在于,第一輪pcr反應(yīng)的反應(yīng)條件為:94℃變性60s,56℃退火60s,72℃延伸60s,擴(kuò)增30個(gè)循環(huán),最后1個(gè)循環(huán)為72℃10min。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的長(zhǎng)效胰島素類似物的制備方法,其特征在于,第二輪pcr反應(yīng)條件為94℃變性60s,退火60s,72℃延伸60s,擴(kuò)增30個(gè)循環(huán),最后1個(gè)循環(huán)為72℃10min。
9.一種權(quán)利要求1所述的胰島素b鏈突變體或權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的長(zhǎng)效胰島素類似物在制備胰島素藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述胰島素藥物以所述的長(zhǎng)效胰島素類似物為唯一有效成分。