1.一種用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建方法,其特征在于:原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞體外分層共培養(yǎng)模型構(gòu)建完成后,對(duì)其進(jìn)行鑒定,具體為:通過(guò)推動(dòng)針筒(2)產(chǎn)生的氣流將第二培養(yǎng)通道(17)中的殘余培養(yǎng)基液體排盡;向針筒(2)內(nèi)裝入滅菌pbs液體,打開(kāi)機(jī)械式流量控制器(1),以5?μl/min的速度向第二培養(yǎng)通道(17)中灌入滅菌pbs液體,完成對(duì)第二培養(yǎng)通道(17)的沖洗;沖洗完成后,向針筒(2)內(nèi)裝入?dil-ac-ldl染液,打開(kāi)機(jī)械式流量控制器(1),以5?μl/min的速度向第二培養(yǎng)通道(17)中灌入dil-ac-ldl染液,直至dil-ac-ldl染液充滿整個(gè)第二培養(yǎng)通道(17),然后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育2?h;孵育完成后,通過(guò)推動(dòng)針筒(2)產(chǎn)生的氣流將第二培養(yǎng)通道(17)中的殘余dil-ac-ldl染液排盡;向針筒(2)內(nèi)裝入滅菌pbs液體,打開(kāi)機(jī)械式流量控制器(1),以5?μl/min的速度向第二培養(yǎng)通道(17)中灌入滅菌pbs液體,完成對(duì)第二培養(yǎng)通道(17)的沖洗;通過(guò)激光共聚焦顯微鏡,在激發(fā)波495?nm和發(fā)射波565?nm的條件下進(jìn)行觀察,若紅色熒光標(biāo)記整齊規(guī)律排布,則模型構(gòu)建成功;若紅色熒光零星散布,則模型構(gòu)建失敗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建方法,其特征在于:機(jī)械式流量控制器(1)的輸出端與針筒(2)的活塞連接,控制針筒(2)內(nèi)液體流速;針筒(2)的容量為1?ml或5?ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建方法,其特征在于:第一對(duì)流式雙通道微芯片(12)中,第一培養(yǎng)通道(13)的高度為30?μm、長(zhǎng)度為6000?μm、寬度為30?μm,第一培養(yǎng)通道(13)用于培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞;第二對(duì)流式雙通道微芯片(16)中,第二培養(yǎng)通道(17)的高度為60?μm、長(zhǎng)度為6000?μm、寬度為30?μm,第二培養(yǎng)通道(17)用于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞;第三對(duì)流式雙通道微芯片(20)中,第三培養(yǎng)通道(21)的高度為60?μm、長(zhǎng)度為6000?μm、寬度為30?μm,第三培養(yǎng)通道(21)用于含20%胎牛血清的培養(yǎng)基或模型應(yīng)用所需的其它液體的灌入;第三對(duì)流式雙通道微芯片(20)中,擴(kuò)散池(7)采用長(zhǎng)度為4000?μm、寬度為30?μm、高度為60?μm的立方體池體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建方法,其特征在于:擴(kuò)散池(7)的材質(zhì)為?pdms;半透膜(24)的材質(zhì)為?pet,其孔徑為0.4?μm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建方法,其特征在于:原代動(dòng)脈小鼠平滑肌細(xì)胞及原代動(dòng)脈小鼠內(nèi)皮細(xì)胞均來(lái)自小鼠的二、三級(jí)動(dòng)脈。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建方法,其特征在于:配制平滑肌細(xì)胞--bd-matrixgel基質(zhì)膠溶液的方法為:取平滑肌細(xì)胞單細(xì)胞懸液,將其制成密度大于1×107個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液,向其中加入20?μl/ml的bd-matrixgel基質(zhì)膠,輕輕搖晃混勻即可。
8.如權(quán)利要求1所述用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型應(yīng)用,其特征在于:用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型構(gòu)建完成后,收集擴(kuò)散池(7)內(nèi)的液體,使用elisa試劑盒分別檢測(cè)il-6、tnf-α炎癥因子的水平。
9.如權(quán)利要求1所述用于測(cè)試環(huán)境污染物對(duì)原代動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞毒性的模型應(yīng)用,其特征在于,包括如下步驟: