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一種基于CRISPR-Cas9基因編輯的大腸桿菌及其制備方法和應(yīng)用

文檔序號(hào):40431300發(fā)布日期:2024-12-24 15:05閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌,其特征在于,所述大腸桿菌被部分敲除了alr基因與dadx基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌菌株,其特征在于,所述部分敲除后alr基因的核酸序列包括如seq?id?no.1所示的序列;

3.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌的制備方法,其特征在于,所述制備方法的步驟包括:將將alr-ptargetf質(zhì)粒、dadx-ptargetf質(zhì)粒、alr-donor?dna、dadx-donor?dna和pcas9質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中,經(jīng)過(guò)鑒定后消除質(zhì)粒制得。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括以下步驟:

5.一種用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌,其特征在于,所述雙酶共表達(dá)大腸桿菌為在權(quán)利要求1或2所述的基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌中進(jìn)行天冬氨酸消旋酶與d-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶的共表達(dá)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雙酶共表達(dá)大腸桿菌,其特征在于,所述天冬氨酸消旋酶的核酸序列如seq?id?no.9的序列;

7.一種根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌的制備方法,其特征在于,所述制備方法的步驟包括將天冬氨酸消旋酶和d-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶的核酸序列與質(zhì)粒連接后轉(zhuǎn)入權(quán)利要求1或2所述的基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌中。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括以下步驟:

9.一種根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌在d-丙氨酸生產(chǎn)中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述應(yīng)用的生產(chǎn)方法包括:在權(quán)利要求5或6所述的用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌中加入l-天冬氨酸、輔酶和丙酮酸后,調(diào)節(jié)ph,振蕩反應(yīng);


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種基于CRISPR?Cas9基因編輯的大腸桿菌及其制備方法和應(yīng)用,所述大腸桿菌采用CRISPR?Cas9技術(shù)部分敲除大腸桿菌中Alr基因與Dadx基因,使得大腸桿菌自身的D?丙氨酸消旋酶失活,并將該菌株應(yīng)用于D?丙氨酸的酶促轉(zhuǎn)化過(guò)程中,有效降低了副產(chǎn)物L(fēng)?丙氨酸的生成,提高了D?丙氨酸的收率。

技術(shù)研發(fā)人員:王自強(qiáng),宋顯炳,李小連,王云山,楊宇,汪曼曼,何然峰
受保護(hù)的技術(shù)使用者:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/12/23
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