1.一種基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌,其特征在于,所述大腸桿菌被部分敲除了alr基因與dadx基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌菌株,其特征在于,所述部分敲除后alr基因的核酸序列包括如seq?id?no.1所示的序列;
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌的制備方法,其特征在于,所述制備方法的步驟包括:將將alr-ptargetf質(zhì)粒、dadx-ptargetf質(zhì)粒、alr-donor?dna、dadx-donor?dna和pcas9質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中,經(jīng)過(guò)鑒定后消除質(zhì)粒制得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括以下步驟:
5.一種用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌,其特征在于,所述雙酶共表達(dá)大腸桿菌為在權(quán)利要求1或2所述的基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌中進(jìn)行天冬氨酸消旋酶與d-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶的共表達(dá)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雙酶共表達(dá)大腸桿菌,其特征在于,所述天冬氨酸消旋酶的核酸序列如seq?id?no.9的序列;
7.一種根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌的制備方法,其特征在于,所述制備方法的步驟包括將天冬氨酸消旋酶和d-氨基酸轉(zhuǎn)氨酶的核酸序列與質(zhì)粒連接后轉(zhuǎn)入權(quán)利要求1或2所述的基于crispr-cas9基因編輯的大腸桿菌中。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括以下步驟:
9.一種根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌在d-丙氨酸生產(chǎn)中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述應(yīng)用的生產(chǎn)方法包括:在權(quán)利要求5或6所述的用于d丙氨酸生產(chǎn)的雙酶共表達(dá)大腸桿菌中加入l-天冬氨酸、輔酶和丙酮酸后,調(diào)節(jié)ph,振蕩反應(yīng);