本發(fā)明屬于生物以及發(fā)酵，涉及一種復合微生物菌劑及其在調控糖化堆發(fā)酵溫度中的應用。

背景技術：

1、醬香制酒生產歷經(jīng)秋冬春夏，長達一年。其中一、二次酒輪次生產在冬季進行，屬低溫天氣，糖化堆堆積升溫速度緩慢，生產區(qū)域被糖化堆大量占據(jù)，致使可利用攤晾場地嚴重不足，糟醅攤晾厚，糟醅表皮水分、酸度揮發(fā)不到位，員工操作難度大，嚴重影響堆積糖化效果。

2、低溫氣候糖化堆升溫緩慢已經(jīng)成為擺在醬香生產中一個普遍性的難點問題，成為制約醬香制酒正常生產的一個亟待解決的問題。利用微生物原理，通過為微生物創(chuàng)造適宜生長繁殖的環(huán)境和提升糖化堆初始時微生物的活力及數(shù)量等方式，縮短低溫氣候糖化堆發(fā)酵時間，可以推動醬香低溫輪次生產按正常生產進度組織生產，縮短輪次工作時間，降低生產成本，并保證攤晾場地充裕，提高攤晾效果，同時減少對糖化堆堆積過程中的人為干預，對于降低一、二次酒的產量，實現(xiàn)更合理輪次出酒，實現(xiàn)優(yōu)質優(yōu)產有重要意義。

技術實現(xiàn)思路

1、為解決上述問題，本發(fā)明使用凝結芽孢桿菌(bacillus?coagulans)、枯草芽胞桿菌(bacillus?subtilis)、庫德里阿茲威畢赤酵母(pichia?kudriavzevii)、熱帶假絲酵母(candida?tropicalis)、釀酒酵母(saccharomyces?cerevisiae)、高溫大曲放線菌(thermoactinomyces?daqus)和普通高溫放線菌(thermoactinomyces?vulgaris)制備復合微生物菌劑，并將復合微生物菌劑用于糖化堆堆積發(fā)酵，提高了堆積發(fā)酵溫度并縮短了堆積時間。

2、一方面，本發(fā)明提供一種復合微生物菌劑，包含：活菌數(shù)比為3～4：1～2：1的復合芽孢桿菌、復合酵母菌和復合放線菌；所述復合芽孢桿菌包含凝結芽孢桿菌(bacilluscoagulans)和枯草芽胞桿菌(bacillus?subtilis)；所述復合酵母菌包含庫德里阿茲威畢赤酵母(pichia?kudriavzevii)、熱帶假絲酵母(candida?tropicalis)和釀酒酵母(saccharomyces?cerevisiae)；所述復合放線菌包括高溫大曲放線菌(thermoactinomycesdaqus)和普通高溫放線菌(thermoactinomyces?vulgaris)。

3、在一些實施方案中，所述復合芽孢桿菌中，包含以活菌數(shù)比1：0.8～1.2復配的凝結芽孢桿菌(bacillus?coagulans)和枯草芽胞桿菌(bacillus?subtilis)；所述復合酵母菌中，包含以活菌數(shù)比1：0.8～1.2：0.8～1.2復配的庫德里阿茲威畢赤酵母(pichiakudriavzevii)、熱帶假絲酵母(candida?tropicalis)和釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)；所述復合放線菌中，包含以活菌數(shù)比1：0.8～1.2復配的高溫大曲放線菌(thermoactinomyces?daqus)和普通高溫放線菌(thermoactinomyces?vulgaris)。

4、一方面，本發(fā)明提供了所述的復合微生物菌劑的應用，為以下a1-a3中的任意一種：

5、a1.縮短糖化堆發(fā)酵時間；

6、a2.制備用于縮短糖化堆發(fā)酵時間的產品；

7、a3.提高糖化堆入窖溫度；

8、a4.制備用于提高糖化堆入窖溫度的產品；

9、a5.制備凍干菌劑。

10、一方面，本發(fā)明提供了所述的復合微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：

11、(1)制備復合芽孢桿菌菌液

12、將凝結芽孢桿菌、枯草芽胞桿菌分別活化；再接種至mrs培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得到凝結芽孢桿菌菌液和枯草芽胞桿菌菌液；

13、將凝結芽孢桿菌菌液和枯草芽胞桿菌菌液混合，制備得到復合芽孢桿菌菌液；

14、(2)制備復合酵母菌菌液

15、將庫德里阿茲威畢赤酵母、熱帶假絲酵母和釀酒酵母分別活化；再接種至ypd培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得到將庫德里阿茲威畢赤酵母菌液、熱帶假絲酵母菌液和釀酒酵母菌液；

16、將庫德里阿茲威畢赤酵母菌液、熱帶假絲酵母菌液和釀酒酵母菌液混合，制備得到復合酵母菌菌液；

17、(3)制備復合放線菌菌液

18、將高溫大曲放線菌和普通高溫放線菌分別活化，再接種至高氏一號液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得到高溫大曲放線菌菌液和普通高溫放線菌菌液；

19、將高溫大曲放線菌菌液和普通高溫放線菌混合，制備得到復合放線菌菌液。

20、(4)制備復合菌劑的菌液

21、將制備得到的復合芽孢桿菌菌液、復合酵母菌菌液和復合放線菌菌液按照活菌數(shù)比3～4：1～2：1混合。

22、在一些實施方案中，步驟(1)中活化為35℃-39℃活化10～14h；在一些實施方案中，步驟(2)中活化為28℃-32℃活化10～14h；在一些實施方案中，步驟(3)中活化為24℃-30℃活化2～5天。

23、在一些實施方案中，步驟(1)中凝結芽孢桿菌菌液和枯草芽胞桿菌菌液按照活菌數(shù)1：0.8～1混合；步驟(2)中庫德里阿茲威畢赤酵母菌液、熱帶假絲酵母菌液和釀酒酵母菌液按照活菌數(shù)比1：0.8～1.2：0.8～1.2混合；步驟(3)中高溫大曲放線菌菌液和普通高溫放線菌按照活菌數(shù)比1：0.8～1.2混合。

24、一方面，本發(fā)明提供了一種凍干菌劑，包含所述的復合微生物菌劑和脫脂奶粉；在一些實施方案中，所述凍干菌劑中的活菌總數(shù)為2～3×1010個/g。

25、一方面，本發(fā)明提供了所述的凍干菌劑的制備方法，包括以下步驟：將所述的復合微生物菌劑離心洗滌，用脫脂奶粉水溶液重懸，凍干制備得到所述凍干菌劑。

26、一方面，本發(fā)明提供了所述的凍干菌劑的應用，為以下b1-b2中的任意一種：

27、b1.縮短糖化堆發(fā)酵時間；

28、b2.提高糖化堆入窖溫度。

29、一方面，本發(fā)明提供了一種縮短糖化堆發(fā)酵時間，或提高糖化堆入窖溫度提方法，包括以下步驟：將所述的復合微生物菌劑，或所述的凍干菌劑接種于糟醅中。

30、在一些實施方案中，所述的接種量為5～15kg/堆；在一些實施方案中，所述的接種量為10～15kg/堆。

31、本發(fā)明的有益效果包括：

32、本發(fā)明使用凝結芽孢桿菌、枯草芽胞桿菌、庫德里阿茲威畢赤酵母、熱帶假絲酵母、釀酒酵母、高溫大曲放線菌和普通高溫放線菌制備復合微生物菌劑，并將復合微生物菌劑用于糖化堆堆積發(fā)酵，提高了堆積發(fā)酵溫度并縮短了堆積時間。

33、具體的：

34、本發(fā)明制備得到的復合微生物菌劑在接種10kg時，糖化堆中溫啟動時間縮短30％以上；糖化堆平均堆積時間縮短24小時以上；下窖時糖化堆平均中溫數(shù)據(jù)在38℃以上。

35、生物材料

36、本發(fā)明的具體實施方式中使用的菌株如下：

37、凝結芽孢桿菌(bacillus?coagulans)cicc?24625購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；

38、枯草芽胞桿菌(bacillussubtilis)cicc?24542購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；

39、庫德里阿茲威畢赤酵母(pichia?kudriavzevii)cicc?33179購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；

40、熱帶假絲酵母(candida?tropicalis)cicc31488購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；

41、釀酒酵母(saccharomyces?cerevisiae)cicc?1307購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；

42、高溫大曲放線菌(thermoactinomyces?daqus)cicc?10681購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；

43、普通高溫放線菌(thermoactinomyces?vulgaris)cicc?24227購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。