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一種產(chǎn)β-果糖呋喃苷酶的重組畢赤酵母菌株及其制備方法和應(yīng)用

文檔序號:40585128發(fā)布日期:2025-01-07 20:25閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種重組畢赤酵母菌,其特征在于,以畢赤酵母為宿主細(xì)胞,在所述宿主細(xì)胞的基因組上整合有β-果糖呋喃苷酶的編碼基因fopa和蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶編碼基因pdi。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母菌,其特征在于,所述融合蛋白由pgap啟動子啟動表達(dá),所述融合蛋白的n端連接所述α-factor信號肽。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母菌,其特征在于,所述β-果糖呋喃苷酶源于黑曲霉(aspergillus?niger),β-果糖呋喃苷酶的氨基酸序列如seq?id?no:1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母菌,其特征在于,所述宿主細(xì)胞為畢赤酵母x33;以pgapzαa質(zhì)粒為表達(dá)載體;所述蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶以ppic9k質(zhì)粒為表達(dá)載體。

5.一種重組畢赤酵母菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述方法為β-果糖呋喃苷酶的編碼基因fopa和蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶編碼基因pdi整合至畢赤酵母菌的基因組上,所述β-果糖呋喃苷酶整合在畢赤酵母基因組的gap位點;蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶整合至畢赤酵母菌的基因組aox。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,包括如下步驟:

7.一種β-果糖呋喃苷酶的制備方法,其特征在于,所述方法為利用權(quán)利要求1~4任一項所述的重組畢赤酵母菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法,其特征在于,所述發(fā)酵的溫度為28~30℃,發(fā)酵的時間為60~80h。

9.一種蔗果三糖的制備方法,所述方法為以蔗糖為底物,利用第一個技術(shù)方案所述的重組畢赤酵母菌發(fā)酵后的上清液作為催化劑組成催化系統(tǒng),催化生成蔗果三糖。

10.權(quán)利要求1~4任一項所述的重組畢赤酵母菌,或者權(quán)利要求5或6所述的方法,或者權(quán)利要求7或8所述的方法,或者權(quán)利要求9所述的方法在生產(chǎn)β-果糖呋喃苷酶、蔗果三糖或含蔗果三糖的產(chǎn)品中的應(yīng)用。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種產(chǎn)β?果糖呋喃苷酶的重組畢赤酵母菌株及其制備方法和應(yīng)用。選擇畢赤酵母X33菌株并利用GAP啟動子驅(qū)動和α?factor信號肽分泌表達(dá)fopA基因,同時利用AOX啟動子驅(qū)動表達(dá)分子伴侶PDI,產(chǎn)生的β?果糖呋喃苷酶位于發(fā)酵上清液中,經(jīng)過簡單的純化步驟即可得到β?果糖呋喃苷酶目標(biāo)蛋白,將其作用于蔗糖生產(chǎn)蔗果三糖,具有較好的應(yīng)用價值。本發(fā)明陽性克隆搖瓶發(fā)酵72h,測定發(fā)酵上清液催化蔗糖生成蔗果三糖的酶活為694.83U/mL,產(chǎn)物中蔗果三糖的占比最高,為45.5%,低聚果糖占總糖比例為63.84%。

技術(shù)研發(fā)人員:江波,張濤,何偉偉,肖子群
受保護(hù)的技術(shù)使用者:江南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/6
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