1.一種重組畢赤酵母菌,其特征在于,以畢赤酵母為宿主細(xì)胞,在所述宿主細(xì)胞的基因組上整合有β-果糖呋喃苷酶的編碼基因fopa和蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶編碼基因pdi。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母菌,其特征在于,所述融合蛋白由pgap啟動子啟動表達(dá),所述融合蛋白的n端連接所述α-factor信號肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母菌,其特征在于,所述β-果糖呋喃苷酶源于黑曲霉(aspergillus?niger),β-果糖呋喃苷酶的氨基酸序列如seq?id?no:1所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母菌,其特征在于,所述宿主細(xì)胞為畢赤酵母x33;以pgapzαa質(zhì)粒為表達(dá)載體;所述蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶以ppic9k質(zhì)粒為表達(dá)載體。
5.一種重組畢赤酵母菌的構(gòu)建方法,其特征在于,所述方法為β-果糖呋喃苷酶的編碼基因fopa和蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶編碼基因pdi整合至畢赤酵母菌的基因組上,所述β-果糖呋喃苷酶整合在畢赤酵母基因組的gap位點;蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶整合至畢赤酵母菌的基因組aox。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,包括如下步驟:
7.一種β-果糖呋喃苷酶的制備方法,其特征在于,所述方法為利用權(quán)利要求1~4任一項所述的重組畢赤酵母菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)酶。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法,其特征在于,所述發(fā)酵的溫度為28~30℃,發(fā)酵的時間為60~80h。
9.一種蔗果三糖的制備方法,所述方法為以蔗糖為底物,利用第一個技術(shù)方案所述的重組畢赤酵母菌發(fā)酵后的上清液作為催化劑組成催化系統(tǒng),催化生成蔗果三糖。
10.權(quán)利要求1~4任一項所述的重組畢赤酵母菌,或者權(quán)利要求5或6所述的方法,或者權(quán)利要求7或8所述的方法,或者權(quán)利要求9所述的方法在生產(chǎn)β-果糖呋喃苷酶、蔗果三糖或含蔗果三糖的產(chǎn)品中的應(yīng)用。