1.一種rbj-vvl質(zhì)粒,其特征在于,所述rbj-vvl質(zhì)粒是將pacyc177-rbj1805-2反向遺傳平臺(tái)的質(zhì)粒為模板,設(shè)計(jì)針對(duì)rbj1805-2病毒的gp2a蛋白第91位、第97位和第98位氨基酸突變?yōu)関、v和l的引物對(duì),采用pcr擴(kuò)增方法擴(kuò)增得到突變型片段后與線性化載體連接起來(lái)即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的rbj-vvl質(zhì)粒,其特征在于,所述引物對(duì)包括rbj-xbai-f3和rbj-vvl-r組合以及rbj-vvl-f和rbj-not1-2fu-1組合,分別pcr擴(kuò)增得到rbj-vvl突變體前段和后段,所述rbj-vvl質(zhì)粒是將突變體前段和后段與線性化載體通過(guò)同源重組連接得到,所述引物對(duì)序列如下表所示:
3.一種nadc34-like?prrsv-2突變型毒株,其特征在于,所述突變型毒株為將nadc34-like?prrsv-2分離株bj1805-2的gp2a蛋白的第91位、第97位和第98位氨基酸由t、m、f分別突變?yōu)関、v和l。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的突變型毒株,其特在于,所述突變型毒株是將權(quán)利要求1或2所述的突變型質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后獲得。
5.一種rbj-vvl質(zhì)粒的構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:
6.一種nadc34-like?prrsv-2突變型毒株或其傳代毒株的獲得方法,其特征在于,包括以下步驟:
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述細(xì)胞包括pam細(xì)胞或marc-145細(xì)胞。
8.權(quán)利要求1或2所述的rbj-vvl質(zhì)粒、權(quán)利要求3或4所述的毒株或其傳代毒株在制備治療豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗中的應(yīng)用。
9.一種nadc34-like?prrsv-2特異性疫苗,其特征在于,所述nadc34-like?prrsv-2特異性疫苗包括權(quán)利要求權(quán)利要求3或4所述的毒株或其傳代毒株或其滅活毒株。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種nadc34-like?prrsv-2特異性疫苗,其特征在于,所述疫苗為注射劑、滴劑、噴霧劑或其他劑型制劑。