技術(shù)特征：

1.一種探針組合物，其特征在于，包括第一適配體探針和第二適配體探針；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針組合物，其特征在于：所述可特異性結(jié)合外泌體膜上的pd-l1蛋白的適配體為mj5c適配體；

3.?根據(jù)權(quán)利要求2所述的探針組合物，其特征在于：所述第一適配體探針的核苷酸序列如seq?id?no.4所示；

4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的探針組合物，其特征在于：所述第一適配體探針還包括熒光基團(tuán)和/或淬滅基團(tuán)；

5.一種用于檢測(cè)單個(gè)外泌體亞群的crispr/cas12a報(bào)告器，其特征在于：包括反應(yīng)體系，所述反應(yīng)體系包括如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的探針組合物，還包括靶標(biāo)外泌體、cas12a/crrna復(fù)合物和報(bào)告鏈；所述cas12a/crrna復(fù)合物由cas12a酶與crrna連接而成；

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的crispr/cas12a報(bào)告器，其特征在于：所述反應(yīng)體系為均相體系，包括如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的探針組合物，還包括靶標(biāo)外泌體、cas12a酶、crrna和報(bào)告鏈；

7.一種權(quán)利要求5~6任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)單個(gè)外泌體亞群的crispr/cas12a報(bào)告器的制備方法，包括：

8.如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的探針組合物、如權(quán)利要求5~6任一項(xiàng)所述的crispr/cas12a報(bào)告器和/或如權(quán)利要求7所述的方法制得的crispr/cas12a報(bào)告器在制備單個(gè)外泌體亞群檢測(cè)試劑和/或腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用。

9.一種用于檢測(cè)單個(gè)外泌體亞群的系統(tǒng)，其特征在于：包括如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的探針組合物、如權(quán)利要求5~6任一項(xiàng)所述的crispr/cas12a報(bào)告器和/或如權(quán)利要求7所述的方法制得的crispr/cas12a報(bào)告器，還包括以下檢測(cè)設(shè)備中的至少一種：熒光分光光度計(jì)、微流控液滴生成儀和熒光顯微鏡。

10.一種非疾病診斷或治療目的的單個(gè)外泌體亞群檢測(cè)方法，其特征在于：包括采用如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的探針組合物、如權(quán)利要求5~6任一項(xiàng)所述的crispr/cas12a報(bào)告器和/或如權(quán)利要求7所述的方法制得的crispr/cas12a報(bào)告器。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種用于檢測(cè)單個(gè)外泌體亞群的探針組合物、CRISPR/Cas12a報(bào)告器及其制備與應(yīng)用。所述探針組合物包括兩種適配體探針，識(shí)別外泌體膜上的靶蛋白（PD?L1和EpCAM）后會(huì)發(fā)生變構(gòu)，暴露出與crRNA特異性結(jié)合區(qū)域，與Cas12a/crRNA雜交，協(xié)同激活Cas12a反式切割報(bào)告鏈，產(chǎn)生熒光信號(hào)；熒光信號(hào)強(qiáng)度與外泌體數(shù)量成正比，可直接定量外泌體亞群；借助液滴微流控技術(shù)將反應(yīng)體系限制在液滴內(nèi)發(fā)生，可通過雙重限域效應(yīng)提高檢測(cè)靈敏度?；诖耍景l(fā)明開發(fā)了用于檢測(cè)單個(gè)外泌體亞群的CRISPR/Cas12a報(bào)告器、系統(tǒng)和方法等，可簡(jiǎn)化操作流程，實(shí)現(xiàn)一步法檢測(cè)。

技術(shù)研發(fā)人員：丁世家,楊炣潼,李思橋
受保護(hù)的技術(shù)使用者：重慶醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6