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一種用于檢測昆蟲細胞中多種RNA病毒的多重熒光定量PCR檢測組合物、方法及試劑盒與流程

文檔序號:40574720發(fā)布日期:2025-01-03 11:39閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于檢測昆蟲細胞中多種rna病毒的多重熒光定量pcr檢測組合物,其特征在于:所述檢測組合物包括檢測如下rna病毒的引物和探針:

2.一種用于檢測昆蟲細胞中多種rna病毒的多重熒光定量pcr檢測試劑盒,其特征在于:所述檢測試劑盒包含權(quán)利要求1所述檢測組合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述檢測試劑盒,其特征在于:所述檢測試劑盒包含陽性對照品、陰性對照品以及熒光定量pcr反應試劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測試劑盒,其特征在于:所述熒光定量pcr反應試劑為熒光定量pcr反應預混液,包括2×one?step?rt-pcrbufferⅲ、ex?taq?hs、rt?enzyme?mixⅱ、roxreference?dye內(nèi)參染料、無核酶水、以及權(quán)利要求1所述檢測組合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測試劑盒,其特征在于:所述陽性對照品包含陽性rna標準品,濃度均為2×108copies/μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述檢測試劑盒,其特征在于:所述檢測試劑盒中的熒光定量pcr反應體系為20μl,包含15μl的所述熒光定量pcr反應預混液和5μl的模板;所述模板為待測樣品的rna、陽性對照標準品和陰性對照標準品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述檢測試劑盒,其特征在于:所述反應體系的反應條件為:42℃反轉(zhuǎn)5min;95℃預變性3min;95℃變性5s,60℃退火34s,40個循環(huán)。

8.一種用于檢測昆蟲細胞中多種rna病毒的多重熒光定量pcr檢測方法,其特征在于:所述檢測方法非診斷或治療目的,包括如下步驟:

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述檢測方法,其特征在于:所述熒光定量pcr反應體系為20μl,包含15μl的熒光定量pcr反應預混液和5μl的模板;所述模板為待測樣品的rna、陽性對照標準品和陰性對照標準品;所述熒光定量pcr反應預混液包括2×one?step?rt-pcr?bufferⅲ、extaq?hs、rt?enzyme?mixⅱ、rox?reference?dye內(nèi)參染料、無核酶水、以及權(quán)利要求1所述檢測組合物。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述檢測方法,其特征在于:所述熒光定量pcr反應體系的反應條件為:42℃反轉(zhuǎn)5min;95℃預變性3min;95℃變性5s,60℃退火34s,40個循環(huán)。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種用于檢測昆蟲細胞中多種RNA病毒的多重熒光定量PCR檢測組合物、方法及試劑盒,該檢測方法非診斷或治療目的,包括如下步驟:(1)提取待測樣品的RNA模板;(2)采用權(quán)利要求1所述檢測組合物建立熒光定量PCR反應體系;(3)進行熒光定量PCR檢測;(4)待測樣品的結(jié)果分析。本發(fā)明通過對病毒保守區(qū)域設計多對探針引物,最終篩選特異性好、靈敏度高的引物探針,可準確定量2×107copies/μL至20copies/μL的病毒含量。本發(fā)明通過反復篩選優(yōu)化反應體系,包括引物和探針的濃度,最終該檢測方法可在較少核酸樣本下,能夠穩(wěn)定檢出多種RNA病毒,操作簡單,且具有較高的靈敏度。

技術(shù)研發(fā)人員:吳濤,曾煒佳,高志建,陳惠,胡孟軍,朱向瑩
受保護的技術(shù)使用者:浙江恒馭生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/2
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