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一種檢測BCR::ABL1酪氨酸激酶區(qū)復(fù)合突變的體系、試劑盒及方法與流程

文檔序號:40587229發(fā)布日期:2025-01-07 20:27閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種擴增bcr::abl1融合基因轉(zhuǎn)錄本的體系,其特征在于,該體系包括一步法擴增試劑,所述一步法擴增試劑包括:pcr緩沖液、一步法引物混合物、反轉(zhuǎn)錄酶、dna聚合酶、基因組dna去除酶、rna酶抑制劑和無核酸酶水;

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述體系,其特征在于,所述pcr緩沖液包括:tris-hcl、kcl、mgcl2、dtt、dntp、oligo?d(t)23vn、隨機引物、增強劑;所述增強劑選自甜菜堿、np-40、tween20、triton-x100中的一種或多種的組合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述體系,其特征在于,所述反轉(zhuǎn)錄酶選自amv?reversetranscriptase、m-mulv?reverse?transcriptase、superscript?ii?reversetranscriptase、superscript?iii?reverse?transcriptase、superscript?iv?reversetranscriptase、maxima?h?minus?reverse?transcriptase中的一種或幾種的組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述體系,其特征在于,所述dna聚合酶為taq酶或la?taq酶;所述基因組dna去除酶選自dnase?i、exonuclease?iii、exonuclease?t7、exonuclease?viii、dsdnase中的一種或幾種的組合;所述rna酶抑制劑選自sds、尿素、硅藻土、異硫氰酸胍和rnasin中的一種或幾種的組合。

5.一種檢測bcr::abl1融合基因酪氨酸激酶區(qū)復(fù)合突變的體系,其特征在于,所述體系包括權(quán)利要求1-4任一項所述擴增體系,還包括激酶區(qū)擴增試劑和文庫擴增試劑;所述激酶區(qū)擴增試劑包括:2xpcrmix、擴增子引物混合物和無核酸酶水;所述文庫擴增試劑試劑包括:2xpcrmix和文庫擴增引物混合物;

6.一種檢測bcr::abl1融合基因酪氨酸激酶區(qū)復(fù)合突變的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括權(quán)利要求5中所述體系。

7.一種檢測bcr::abl1酪氨酸激酶區(qū)復(fù)合突變的方法,其特征在于,包括以下步驟:

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法,其特征在于,所述步驟s1中與一步法擴增試劑反應(yīng)時所用rna進(jìn)入量為500-3000ng。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法,其特征在于,所述步驟s1中還包括與一步法擴增試劑反應(yīng)后的pcr反應(yīng),所述pcr反應(yīng)程序為50℃,30min;95℃5min;95℃20sec,60℃20sec,68℃2min,循環(huán)30個;68℃5min。

10.權(quán)利要求1-4任一項所述體系或權(quán)利要求5所述體系或權(quán)利要求6所述試劑盒或權(quán)利要求7-9任一項所述方法在檢測白血病患者對酪氨酸激酶抑制劑的耐藥性中的應(yīng)用。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于基因檢測領(lǐng)域,具體涉及一種檢測BCR::ABL1酪氨酸激酶區(qū)復(fù)合突變的體系、試劑盒及方法,該檢測體系包括一步法擴增試劑、激酶區(qū)擴增試劑和文庫擴增試劑。本發(fā)明通過RNA核酸與一步法擴增試劑反應(yīng)后同時得到M型和m型融合基因的雙鏈cDNA,然后與激酶區(qū)擴增試劑反應(yīng)得到覆蓋ABL1基因的V225?R516位點區(qū)域的擴增子,最后與文庫擴增試劑反應(yīng)得到最終文庫。本發(fā)明實施例表明通過利用自建高通量測序法檢測ABL1激酶區(qū)突變,靈敏度可達(dá)1%,可以檢出≥2個突變的復(fù)合突變,根據(jù)突變檢測結(jié)果,可指導(dǎo)患者及時調(diào)整治療方案。

技術(shù)研發(fā)人員:張鵬,謝珍,邢寬,曾志鵬,余同,何貴倫,錢坤,張玉龍,代如玉
受保護的技術(shù)使用者:南京實踐醫(yī)學(xué)檢驗有限公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/6
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