技術(shù)特征：

1.一種大腸桿菌重組菌株，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌株是以eschrichia?colidh5α為原始菌株，在其基因組上過(guò)表達(dá)rnaii得到的。

2.如權(quán)利要求1所述的大腸桿菌重組菌株，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌株的基因組上包含rnaii、nrdab?或rnaii-nrdab基因中的一種或多種。

3.如權(quán)利要求1所述的大腸桿菌重組菌株，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌株的基因組上包含rnaii基因。

4.如權(quán)利要求1所述的大腸桿菌重組菌株，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌株的基因組上包含nrdab基因。

5.如權(quán)利要求1所述的大腸桿菌重組菌株，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌株的基因組上包含rnaii和nrdab基因。

6.如權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的大腸桿菌重組菌株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述方法包括：

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述構(gòu)建質(zhì)粒phk-rnaii、phk-nrdab和phk-rnaii-nrdab包括：

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：90~100℃預(yù)變性9~11?min，90~100℃變性14~16?s，55~57℃退火25~35?s，70~74℃延伸0.5~1.5?min/kb，25~35個(gè)循環(huán)后70~74℃延伸9~11?min，3~5℃保存。

9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述將所述質(zhì)粒phk-rnaii、phk-nrdab或phk-rnaii-nrdab分別轉(zhuǎn)化進(jìn)入帶有pah69質(zhì)粒的eschrichia?coli?dh5α感受態(tài)菌株中，得到所述大腸桿菌重組菌株包括：

10.權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的大腸桿菌重組菌株在質(zhì)粒制備中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高產(chǎn)質(zhì)粒的大腸桿菌重組菌株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。所述大腸桿菌重組菌株是以Eschrichia?coli?DH5α為原始菌株，在其基因組上過(guò)表達(dá)RNAII得到的。本發(fā)明通過(guò)對(duì)大腸桿菌DH5α進(jìn)行工程改造，在其基因組上過(guò)表達(dá)RNAII，增強(qiáng)質(zhì)粒復(fù)制起始，通過(guò)優(yōu)化啟動(dòng)子強(qiáng)度，平衡質(zhì)粒生產(chǎn)和菌株生長(zhǎng)，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量，通過(guò)在基因組上過(guò)表達(dá)nrdAB基因，增強(qiáng)dNTP合成，進(jìn)一步提高了質(zhì)粒產(chǎn)量，在2L發(fā)酵罐上質(zhì)粒產(chǎn)量達(dá)到了2.20?g/L。

技術(shù)研發(fā)人員：徐文強(qiáng),龐慶霄,張昊,張海榮,李金雪,劉智超
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東麗山生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2