一種防治植物重茬病害的復(fù)合菌劑及其制備方法、應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種復(fù)合菌劑，尤其涉及一種防治植物重茬病害的復(fù)合菌劑及其制備 方法、應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 重茬病害是指因同一作物在同一地塊長期耕種所帶來的病害，隨著全球沙漠化、 荒漠化形勢的日益嚴(yán)峻，可耕土地越來越少，而我國人多地少的矛盾更加突出，提高復(fù)種指 數(shù)（重茬耕作）是解決問題的唯一辦法。但是隨之而來的土傳病害等重茬病造成作物大面 積減產(chǎn)、絕產(chǎn)，是一種毀滅性病害。重茬病害包括因病原菌發(fā)生嚴(yán)重而導(dǎo)致的病理性重茬病 害，以及因連作而導(dǎo)致土壤營養(yǎng)物質(zhì)不平衡等原因引起的生理性重茬病害。
[0003] 病理性重茬病害嚴(yán)重發(fā)生的原因很多，如植物種類、土壤類型、栽培措施、連作年 限等，但最重要的是重茬改變了土壤微生物的種群結(jié)構(gòu)和數(shù)量，破壞了土壤微生物生態(tài)平 衡，有利于致病微生物的生長和侵染，進(jìn)而加劇了重茬病害的發(fā)生和危害，導(dǎo)致病理性重茬 病害的生物因子主要有真菌（表一）、細(xì)菌、線蟲、放線菌以及病毒等。
[0004] 生理性重茬病害主要是因土壤營養(yǎng)元素的缺乏或失衡、理化性質(zhì)的改變以及植物 根部分泌的自毒物質(zhì)的積累等所致。最常見的是由于連作對土壤氮、磷、鉀等營養(yǎng)元素的不 均衡消耗，導(dǎo)致植物發(fā)病。長期連作同一植物也會改變土壤的理化性質(zhì)，進(jìn)而影響植物的生 長。
[0005] 目前土傳病害的防治主要采取農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治和生物防治三種防治措施。
[0006] 農(nóng)業(yè)防治主要包括抗病品種的使用、輪作倒茬和增施有機(jī)肥等，其優(yōu)點(diǎn)是環(huán)保安 全，對生理性和病理性重茬病害均有一定的防治效果，缺點(diǎn)是防效較低。
[0007] 化學(xué)防治常用的化學(xué)殺菌劑有惡霉靈、福美雙和普力克，三者摻混后土施，能殺滅 一切土傳病菌，但同時也把有益菌殺滅了，不是最好的辦法。化學(xué)防治的優(yōu)點(diǎn)是防效顯著、 防效快，缺點(diǎn)是環(huán)境相容性差，同時化學(xué)農(nóng)藥的長期使用，還易使病原物產(chǎn)生抗藥性，導(dǎo)致 防效下降甚至失敗。
[0008] 生物防治通過微生物之間的拮抗、競爭、誘導(dǎo)抗性以及寄生等相互作用來控制重 茬病害的方法。一方面拮抗菌的使用通過分泌抗菌物質(zhì)或種群競爭改變土壤微生物的種群 結(jié)構(gòu)和數(shù)量，降低病理性重茬病害的發(fā)生，還能通過改變土壤結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)而減輕生理 性重茬病害的危害。目前報道的生防制劑主要有：小盾殼霉屬、粘帚霉屬、木霉屬和無致病 力尖孢鐮刀菌屬等真菌；放線菌屬、土壤桿菌屬、芽孢桿菌屬、歐文氏菌屬、產(chǎn)堿菌屬、無定 形孢囊菌屬、節(jié)桿菌屬、假單胞菌屬、小單孢菌屬、鏈霉菌屬和根瘤菌屬等細(xì)菌。
[0009] 重茬病成為農(nóng)業(yè)專家和廣大農(nóng)民研宄和關(guān)注的重點(diǎn)課題，但長時間一直沒有重大 的突破性進(jìn)展，傳統(tǒng)的防治方法不能從根本上解決問題，而生物防治在控制植物重茬病害， 提高植物產(chǎn)量具有重大的潛力。目前市場上還沒用合適的微生物菌劑，本專利研宄的目的 就是提供一種防治土傳病害的復(fù)合菌劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本申請針對現(xiàn)有技術(shù)中的因病原菌發(fā)生嚴(yán)重而導(dǎo)致的病理性重茬病害，以及因連 作而導(dǎo)致土壤營養(yǎng)物質(zhì)不平衡等原因引起的生理性重茬病害的問題，從而提出一種防治植 物重茬病害的復(fù)合菌劑及其制備方法、應(yīng)用。
[0011] 本申請?zhí)峁┝艘环N木霉菌株，該木霉菌株為哈茨木霉（Trichoderma harzianum__ znlkhcl)的菌株，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號 是 CGMCC NO. 7861。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種枯草芽孢桿菌菌株，該枯草芽孢桿菌菌株為枯草芽孢桿菌 (Baciilus subtilis-_znjdfl)的菌株，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中心，其保藏編號是CGMCC NO. 7850。
[0013] 本發(fā)明還提供了一種粘帚霉菌株，該粘帚霉菌株為粉紅粘帚霉（Gliocladium roseum-znlknzl)的菌株，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保 藏編號是 CGMCC NO. 9008。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種防治植物重茬病害的復(fù)合菌劑，該復(fù)合菌劑包含哈茨木霉、 枯草芽孢桿菌和粉紅粘帚霉，還包含解磷菌和解鉀菌，
[0015] 所述哈茨木霉的菌株保藏編號是CGMCC NO. 7861，所述枯草芽孢桿菌菌株的保藏 號為CGMCC NO. 7850,所述粉紅粘帚霉的菌株保藏編號是CGMCC NO. 9008。
[0016] 其中，所述哈茨木霉、粉紅粘帚霉和枯草芽孢桿菌的菌數(shù)比例為（0.5-1. 5): (0. 5-1. 5) ： (2-4) 〇
[0017] 其中，所述解磷菌為巨大芽孢桿菌，所述解鉀菌為膠質(zhì)芽孢桿菌。
[0018] 其中，所述復(fù)合菌劑的含菌總量彡5億/克。
[0019] 其中，所述復(fù)合菌劑還包括吸附劑，所述哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、粉紅粘帚霉、含 解磷菌和解鉀菌吸附于吸附劑，所述吸附劑為草碳、玉米芯、鈣粉、麥麩。
[0020] 本發(fā)明還提供了一種如上述的復(fù)合菌劑的制備方法，該方法包括：
[0021] 分別將哈茨木霉、枯草芽孢桿菌和粉紅粘帚霉進(jìn)行液體深層發(fā)酵和加入吸附劑， 然后三者均勻混合，得到所述復(fù)合菌劑。
[0022] 其中，所述液體深層發(fā)酵的操作包括如下步驟：
[0023] (1)菌種活化
[0024] 分別將所述哈茨木霉、枯草芽孢桿菌和粉紅粘帚霉接種到固體培養(yǎng)基，在pH值 7.0-7.5、28-30°〇溫箱內(nèi)培養(yǎng) 24-7211;
[0025] (2)搖瓶培養(yǎng)
[0026] 活化后的哈茨木霉和粉紅粘帚霉接種到液體培養(yǎng)基，于28°C，轉(zhuǎn)速120rpm的全溫 振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12_16h ;活化后的枯草芽孢桿菌于32°C，轉(zhuǎn)速ISOrpm的全溫振蕩培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)8-10h ;
[0027] (3)種子罐培養(yǎng)
[0028] 將搖瓶內(nèi)培養(yǎng)好的哈茨木霉（Trichoderma harziarum)、枯草芽孢桿菌和粉紅粘 帚霉的菌液，接種于冷卻至30°C的種子罐內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，接種后在溫度為28°C，轉(zhuǎn)速120rpm， 培養(yǎng)16-20h，鏡檢觀察菌絲較多呈團(tuán)簇狀，即可轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐培養(yǎng)；
[0029] (4)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0030] 將種子罐內(nèi)培養(yǎng)好的哈茨木霉（Trichoderma harziarum)、枯草芽孢桿菌和粉紅 粘帚霉的菌液，接種于冷卻至30°C的發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，攪拌速度120rpm，罐壓0. 05MPa ; 通氣量：發(fā)酵前期1: 〇. 5 (V/V · min)，后期逐漸調(diào)至I: I (V/V · min)，一般發(fā)酵培養(yǎng)周期為 84-90h〇
[0031 ] 其中，所述哈茨木霉種子罐和發(fā)酵罐的培養(yǎng)基配方：玉米粉5 %，硫酸銨0. 05 %， 泡敵0. 02%，注射青霉素鉀3支，注射硫酸鏈霉素2支，pH值7. 0-7. 5 ;
[0032] 所述枯草芽孢桿菌的種子罐和發(fā)酵罐的培養(yǎng)基配方：豆柏粉2%、魚粉0. 5%、玉 米粉1. 8 %、淀粉0. 4 %，硫酸鎂0. 06 %，磷酸氫二鉀0. 5 %，泡敵0. 025 %，pH值7. 0-7. 5。
[0033] 本發(fā)明還提供了上述的復(fù)合菌劑在防治植物病害中的應(yīng)用。
[0034] 其中，所述植物病害為土傳植物病害。
[0035] 其中，所述土傳植物病害為根腐病、枯黃萎病、立枯病、灰霉病、疫病、白粉病、菌核 病、苗期猝倒病中的至少一種。
[0036] 與有關(guān)技術(shù)相比，本發(fā)明實施例的有益效果如下：
[0037] 1、本發(fā)明的復(fù)合菌劑選用防病木霉菌、枯草芽孢桿菌、粉紅粘帚霉、解磷菌、解鉀 菌等高效菌株，采用現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)加工制備而成的農(nóng)用微生物制劑。本產(chǎn)品主要通 過菌株在作物根表、根際和體內(nèi)定植、繁殖和轉(zhuǎn)移，充分發(fā)揮菌株的促長、固氮、解磷、解鉀、 抗病、抗逆、改良土壤等功能，達(dá)到促進(jìn)作物生長、提高肥料利用率，增強(qiáng)抗病等抗逆性和改 善作物品質(zhì)等功效。能夠防治根腐病、枯黃萎病、立枯病、灰霉病、疫病、白粉病、菌核病、苗 期猝倒病等病害。
[0038] 2、本發(fā)明的復(fù)合菌劑中的木霉菌，可產(chǎn)生多種對植物病原真菌、細(xì)菌及昆蟲具有 拮抗作用的生物活性物質(zhì)，比如細(xì)胞壁降解酶類和次級代謝產(chǎn)物，并能提高農(nóng)作物的抗逆 性，促進(jìn)植物生長和提高農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量。
[0039] 本發(fā)明的復(fù)合菌劑中的粉紅粘帚霉，是一種植物病原菌的重寄生菌，對植物病害 具有較好的生防潛力，主要通過重寄生作用、拮抗作用和產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶來抑制病原菌 的生長，進(jìn)而達(dá)到防治植物病害的目的。粉紅粘帚霉能運(yùn)用大范圍的復(fù)合物作為C源和N 源，能分泌各種酶類，如纖維素酶和半纖維素酶，降解頑固的植物多聚體，變成簡單的糖類 以提供能量供作物生長。粉紅粘帚霉可以寄生多種土傳病原菌，如核盤菌屬、腐霉菌、立枯 絲核菌和齊整小核菌等，研宄結(jié)果表明，寄生過程中有多種重要的細(xì)胞壁降解酶參與，粉紅 粘帚霉的分生孢子通過蜜蜂轉(zhuǎn)移到草莓的花上，能夠抑制花或果實的灰霉病。
[0040] 本發(fā)明的復(fù)合菌劑中的枯草芽孢桿菌，是一種的植物內(nèi)生細(xì)菌，可以抑制多種植 物病原菌，能夠促進(jìn)植物生長?？莶菅挎邨U菌