能夠產(chǎn)生芽孢，抗逆性好，可以在一些極端的 環(huán)境中長期存活，利于保藏，非常適合微生物制劑的生產(chǎn)、加工和應(yīng)用。
[0041] 本發(fā)明的復(fù)合菌劑中的解磷菌，可以采用巨大芽孢桿菌；本發(fā)明的復(fù)合菌劑中的 解鉀菌，可以采用膠質(zhì)芽孢桿菌，作為微生物肥料中的重要功能菌，可提高土壤速效鉀、磷 含量，提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)等多種效果。
[0042] 保藏說明
[0043] 1、菌種名稱：哈茨木霉
[0044] 拉丁名：Trichoderma harzianum__znlkhcl
[0045] 保藏機構(gòu)中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0046] 保藏機構(gòu)簡稱：CGMCC
[0047] 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
[0048] 保藏日期：2013. 07. 03
[0049] 保藏中心登記入冊編號：CGMCC NO. 7861
[0050] 2、菌種名稱：枯草芽孢桿菌
[0051] 拉丁名：Baciilus subtilis__znjdfl
[0052] 保藏機構(gòu)：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0053] 保藏機構(gòu)簡稱：CGMCC
[0054] 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
[0055] 保藏日期：2013. 07. 03
[0056] 保藏中心登記入冊編號：CGMCC NO. 7850
[0057] 3、菌種名稱：粉紅粘帚霉
[0058] 拉丁名：Gliocladium roseum-znlknzl
[0059] 保藏機構(gòu)：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0060] 保藏機構(gòu)簡稱：CGMCC
[0061] 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
[0062] 保藏日期：2014.4.2
[0063] 保藏中心登記入冊編號：CGMCC NO. 9008
【具體實施方式】
[0064] 下文中將對本發(fā)明的實施例進(jìn)行詳細(xì)說明。需要說明的是，在不沖突的情況下，本 申請中的實施例及實施例中的特征可以相互任意組合。
[0065] 實施例1
[0066] I. 1菌株發(fā)酵工藝流程
[0067] 哈茨木霉、枯草芽孢桿菌以及粉紅粘帚霉的復(fù)合制劑防治重茬病害的生產(chǎn)工藝流 程為經(jīng)液體深層發(fā)酵法制成粉劑，工藝主要環(huán)節(jié)為原菌種活化一菌種擴大培養(yǎng)一種子罐培 養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一添加填充料一攪拌一鏈條機粉碎一粉劑過篩一產(chǎn)品檢測一包裝。
[0068] I. I. 1哈茨木霉
[0069] 哈茨木霉的菌株專利保藏號是CGMCC NO. 7861。生產(chǎn)工藝如下：
[0070] I. I. I. 1 菌種活化
[0071] 哈茨木霉培養(yǎng)基制備：土豆20%，葡萄糖2%，瓊脂2%。用NaOH或HCl調(diào)pH值 至7. 0-7. 5,然后分裝三角瓶或試管，置于滅菌鍋內(nèi)，在0. IlMPa壓力下滅菌30min。
[0072] 菌種活化與擴大培養(yǎng)：用接種針在無菌條件下從原菌種斜面上挑取少許菌苔，在 倒有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行劃線，然后置28-30°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h，肉眼觀察，菌苔豐滿，涂 片、染色檢查無雜菌，孢子整齊時，作為發(fā)酵生產(chǎn)的菌種。
[0073] I. I. L 2搖瓶培養(yǎng)
[0074] 哈茨木霉搖瓶培養(yǎng)基配方：細(xì)麥麩5%。將配好的液體培養(yǎng)基分裝2000mL三角 瓶，每瓶裝液量500ml，在高壓濕熱滅菌鍋內(nèi)121°C、0. IlMPa下滅菌40min。從培養(yǎng)好哈茨 木霉的平板上刮取少許菌苔放入搖瓶中，于28°C，轉(zhuǎn)速120rpm的全溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 12-16h，鏡檢觀察哈茨木霉菌絲較多呈團(tuán)簇狀，即可上種子罐培養(yǎng)。
[0075] I. I. L 3種子罐培養(yǎng)
[0076] 哈茨木霉種子罐培養(yǎng)基配方：玉米粉5 %，硫酸銨0. 05 %，泡敵0. 02 %，注射青霉 素鉀3支，注射硫酸鏈霉素2支，pH值4. 0-4. 5。
[0077] (1)空發(fā)酵罐滅菌：發(fā)酵罐在應(yīng)用前清洗干凈，排除污物，并在0· IlMPa壓力下，滅 菌 30min。
[0078] (2)種子罐裝料：參考培養(yǎng)基配方比例裝料，投料量不得超過罐容積70%。
[0079] (3)種子罐滅菌：裝好料后，在0· IlMPa壓力下滅菌30min，冷卻至30°C后即可接 種。
[0080] ⑷接種：將搖瓶內(nèi)培養(yǎng)好的哈茨木霉（Trichoderma harziarum)菌液，接種于冷 卻至30°C的種子罐內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。
[0081] (5)種子罐培養(yǎng)條件控制：哈茨木霉接種后在溫度為28°C，轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng) 16-20h，鏡檢觀察菌絲較多呈團(tuán)簇狀，即可轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐培養(yǎng)。
[0082] I. I. L 4發(fā)酵罐發(fā)酵
[0083] (1)發(fā)酵罐培養(yǎng)基
[0084] 哈茨木霉發(fā)酵罐培養(yǎng)基同種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0085] (2)發(fā)酵培養(yǎng)條件
[0086] 攪拌速度160rpm，罐壓0. 05MPa ;通氣量：發(fā)酵前期1:0. 5 (V/V ·π?η)，后期逐漸調(diào) 至I: I (V/V · min)，一般發(fā)酵培養(yǎng)周期為84-90h，即可放罐。
[0087] I. L 2粉紅粘帚霉
[0088] 粉紅粘帚霉菌株保藏號為CGMCC NO. 9008,發(fā)酵工藝同哈茨木霉。
[0089] I. L 3枯草芽孢桿菌
[0090] 枯草芽孢桿菌菌株保藏號為CGMCC NO. 7850。生產(chǎn)工藝如下：
[0091] I. L 3.1原菌種活化
[0092] 枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基制備：牛肉膏0.3%，蛋白胨0.5%，NaClO. 5%，瓊脂2%。用 NaOH或HCl調(diào)pH值至7. 0-7. 5,然后分裝三角瓶或試管，置于滅菌鍋內(nèi)，在0. IlMPa壓力下 滅菌30min。
[0093] 菌種活化與擴大培養(yǎng)：用接種針在無菌條件下從原菌種斜面上挑取少許菌苔，在 倒有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行劃線，然后置28-30°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，肉眼觀察，涂片、染色檢 查無雜菌，芽孢整齊時，作為發(fā)酵生產(chǎn)的菌種。
[0094] I. L 3. 2搖瓶培養(yǎng)
[0095] 枯草芽孢桿菌搖瓶培養(yǎng)基配方：牛肉膏0. 3%，蛋白胨0. 7%，氯化鈉0. 5%，pH值 7. 0。將配好的液體培養(yǎng)基分裝2000ml三角瓶，每瓶裝液量500ml，在高壓濕熱滅菌鍋內(nèi) 121°C、0. IlMPa滅菌30min。從培養(yǎng)好枯草芽孢桿菌的平板上刮取少許菌苔放入搖瓶中，于 32°C，轉(zhuǎn)速180rpm的全溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8-10h，鏡檢觀察枯草芽孢桿菌生長狀態(tài)達(dá)到 對數(shù)期，即可上種子罐培養(yǎng)。
[0096] L L 3. 3種子罐培養(yǎng)
[0097] 枯草芽孢桿菌種子罐培養(yǎng)基配方：豆柏粉2%、魚粉0.5%、玉米粉1.8%、淀粉 〇· 4 %，硫酸鎂 0· 06 %，磷酸氫二鉀 0· 5 %，泡敵 0· 025 %，pH 值 7. 0-7. 5。
[0098] (1)空發(fā)酵罐滅菌：發(fā)酵罐在應(yīng)用前清洗干凈，排除污物，并在0· IlMPa壓力下，滅 菌 30min。
[0099] (2)種子罐裝料：參考培養(yǎng)基配方比例裝料，投料量不得超過罐容積70%。
[0100] (3)種子罐滅菌：裝好料后，在0· IlMPa壓力下滅菌30min，冷卻至30°C后即可接 種。
[0101] ⑷接種：將搖瓶內(nèi)培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌（Baciilus subtilis)菌液，接種于冷 卻至30°C的種子罐內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。
[0102] (5)種子罐培養(yǎng)條件控制：枯草芽孢桿菌接種后在溫度為32°C，轉(zhuǎn)速220rpm攪拌 條件下，培養(yǎng)8-10h，鏡檢觀察枯草芽孢桿菌生長狀態(tài)達(dá)到對數(shù)期，即可轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐培養(yǎng)。
[0103] (6)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0104] 發(fā)酵培養(yǎng)基：
[0105] 豆柏粉2 %、魚粉0. 5 %、玉米粉1. 8 %、淀粉0. 4 %，硫酸鎂0. 06 %，磷酸氫二鉀 〇· 5%，泡敵 0· 025%，pH 值 7. 0-7. 5。
[0106] 發(fā)酵罐的發(fā)酵條件：
[0107] 轉(zhuǎn)速為210-230rpm、壓力為0. 04-0. 06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)28-32小時，得到所 述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液。
[0108] 1.1. 4 解磷菌
[0109] 解磷菌巨大芽孢桿菌的發(fā)酵工藝同枯草芽孢桿菌。
[0110] 1.1. 5 解鉀菌
[0111] I. I. 5. 1原菌種活化
[0112] 解鉀菌培養(yǎng)基制備：淀粉0.5%，蔗糖0.5%，酵母粉0.05%，碳酸鈣0.01%，硫酸 鈣0. 05 %，七水合硫酸鎂0. 05 %，瓊脂2 %。用NaOH或HCl調(diào)pH值至7. 0-7. 5,然后分裝 三角瓶或試管，置于滅菌鍋內(nèi)，在〇. IlMPa壓力下滅菌30min。
[0113] 菌種活化與擴大培養(yǎng)：用接種針在無菌條件下從原菌種斜面上挑取少許菌