中國專利ZL 200610038113.6中公開，公開號CN1814747A，公開日2006年8月9日。
[0025]配制種子培養(yǎng)液10mL,組成為蛋白胨5g/L,玉米衆(zhòng)20g/L,葡萄糖20g/L,磷酸二氫鉀1.5g/L，磷酸氫二鈉1.5g/L，酵母膏5g/L，用去離子水配制。
[0026]配制有氧發(fā)酵系統(tǒng)發(fā)酵培養(yǎng)基100mL,組成為蛋白胨5g/L，玉米漿10g/L，葡萄糖120g/L,磷酸二氫鉀2.5g/L,磷酸氫二鈉2.5g/L,酵母膏5g/L,亞硫酸鈉0.5g/L,乙酸銨5g/L,用去離子水配制。
[0027]種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基均在滅菌鍋中，溫度121°C，滅菌20min。
[0028]發(fā)酵罐中通入無菌空氣5mL/min，維持發(fā)酵罐溫度37~39°C。
[0029]種子一級為TSB培養(yǎng)液，培養(yǎng)14h后接種子培養(yǎng)基，接種量4%，培養(yǎng)時間達到7h后，將培養(yǎng)液接入有氧發(fā)酵系統(tǒng)的發(fā)酵罐中。6h后，尾氣中二氧化碳體積含量達到55%。
[0030]發(fā)酵過程中使用氫氧化鈉溶液維持發(fā)酵系統(tǒng)的pH值為5.8-6.0,溫度為37~39°C,發(fā)酵時間為48h，最終乳酸產(chǎn)量為65g/L。
[0031]實施例2
配制種子培養(yǎng)10mL,組成為蛋白胨5g/L，玉米漿20g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L,磷酸氫二鈉1.5g/L,酵母膏5g/L,用去離子水配制。
[0032]配制厭氧系統(tǒng)發(fā)酵培養(yǎng)基100mL,組成為蛋白胨5g/L,玉米衆(zhòng)10g/L,葡萄糖100g/L,磷酸二氫鉀2.5g/L,磷酸氫二鈉2.5g/L,酵母膏5g/L,乙酸鈉I ~5g/L,用去離子水配制。
[0033]種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基均在滅菌鍋中，溫度121°C，滅菌20min。
[0034]發(fā)酵罐中通入二氧化碳3mL/min，維持發(fā)酵罐溫度37~39°C。
[0035]種子一級為TSB培養(yǎng)液，培養(yǎng)14h后接種子培養(yǎng)基，接種量4%，培養(yǎng)時間達到7h后，將培養(yǎng)液接入?yún)捬醢l(fā)酵系統(tǒng)的發(fā)酵罐中，接種量10%。
[0036]發(fā)酵過程中使用氫氧化鈉溶液維持發(fā)酵系統(tǒng)的pH值為6.0-6.1,溫度為37~39°C,發(fā)酵時間為48h，最終丁二酸產(chǎn)量為77g/L。
[0037]實施例3耦合發(fā)酵
按上述實施例1準備好有氧發(fā)酵系統(tǒng)；
按上述實施例2準備好厭氧發(fā)酵系統(tǒng)；
發(fā)酵6h后，將有氧系統(tǒng)的尾氣通入?yún)捬跸到y(tǒng)中。
[0038]發(fā)酵過程中使用氫氧化鈉溶液維持兩個發(fā)酵系統(tǒng)的pH值為6.0~6.2，溫度為37~39°C，發(fā)酵時間為48h，最終乳酸產(chǎn)量為65g/L，丁二酸產(chǎn)量為79g/L。
【主權(quán)項】
1.一種使用同一種菌株CGMCC 1593發(fā)酵稱合制備乳酸和丁二酸的方法,其特征在于所用出發(fā)菌株為琥拍酸放線桿菌(Actinobacillus succinogenes) CGMCC 1593,在有氧發(fā)酵系統(tǒng)中在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加亞硫酸鈉0.2-0.5g/L，乙酸銨l~5g/L，同時通入無菌空氣，通入量為發(fā)酵總體積的0.19^0.5%/min，發(fā)酵制備乳酸；在厭氧發(fā)酵系統(tǒng)中在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加乙酸鈉l~5g/L，通入二氧化碳含量大于50%的有氧發(fā)酵系統(tǒng)的排放尾氣，尾氣通入量為0.5~5L/min，發(fā)酵制備丁二酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用同一種菌株CGMCC1593發(fā)酵耦合制備乳酸和丁二酸的方法，其特征在于進行有氧發(fā)酵制備乳酸時: 有氧發(fā)酵系統(tǒng)培養(yǎng)基組成如下: 種子培養(yǎng)基:蛋白胨5g/L，玉米漿20g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L，磷酸氫二鈉1.5g/L,酵母膏5g/L,用去離子水配制； 發(fā)酵培養(yǎng)基:蛋白胨5g/L，玉米漿10g/L，葡萄糖120g/L，磷酸二氫鉀2.5g/L，磷酸氫二鈉2.5g/L,酵母膏5g/L,亞硫酸鈉0.2-0.5g/L,乙酸銨l~5g/L,用去離子水配制； 無菌空氣通入量為發(fā)酵總體積的0.1%~0.5%/min，過程中流加lmol/L氫氧化鈉溶液，調(diào)控PH值； 培養(yǎng)基在121°C下滅菌20min，種子一級為TSB培養(yǎng)液，培養(yǎng)14h后接種子培養(yǎng)基，接種量4%，種子培養(yǎng)達到7h后，將培養(yǎng)液接入有氧發(fā)酵系統(tǒng)的發(fā)酵罐中，接種量10%，流加氫氧化鈉溶液維持發(fā)酵系統(tǒng)的PH值為5.8-6.0，溫度為37~39°C，發(fā)酵時間為48h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用同一種菌株CGMCC1593發(fā)酵耦合制備乳酸和丁二酸的方法，其特征在于進行厭氧發(fā)酵制備丁二酸時: 厭氧發(fā)酵系統(tǒng)培養(yǎng)基組成如下: 種子培養(yǎng)基:蛋白胨5g/L，玉米漿20g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L，磷酸氫二鈉1.5g/L,酵母膏5g/L,用去離子水配制； 發(fā)酵培養(yǎng)基:蛋白胨5g/L，玉米漿10g/L，葡萄糖100g/L，磷酸二氫鉀2.5g/L，磷酸氫二鈉2.5g/L,酵母膏5g/L,乙酸鈉l~5g/L,用去離子水配制； 有氧發(fā)酵系統(tǒng)尾氣通入量為0.5~5L/min,過程中流加lmol/L氫氧化鈉溶液，調(diào)控pH值； 培養(yǎng)基在121°C下滅菌20min，種子一級為TSB培養(yǎng)液，培養(yǎng)14h后接種子培養(yǎng)基，接種量4%，種子培養(yǎng)達到7h后，將培養(yǎng)液接入?yún)捬醢l(fā)酵系統(tǒng)的發(fā)酵罐中，接種量10% ;等待有氧發(fā)酵系統(tǒng)尾氣排放的二氧化碳含量大于50%時，厭氧發(fā)酵系統(tǒng)中通入有氧發(fā)酵系統(tǒng)尾氣，通入量為0.5~5L/min，流加氫氧化鈉溶液維持pH值為5.5-6.5，溫度為37~39°C，發(fā)酵時間為 48h。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的使用同一種菌株CGMCC1593發(fā)酵耦合制備乳酸和丁二酸的方法，其特征在于進行厭氧發(fā)酵制備丁二酸時:發(fā)酵過程維持pH值為6.0-6.2。
【專利摘要】一種使用同一菌株CGMCC 1593發(fā)酵耦合制備乳酸和丁二酸的方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。出發(fā)菌株為CGMCC 1593，有氧發(fā)酵系統(tǒng)中在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加亞硫酸鈉0.2~0.5g/L，乙酸銨1~5g/L，通入無菌空氣發(fā)酵制備乳酸；厭氧發(fā)酵系統(tǒng)中在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加乙酸鈉1~5g/L，通入有氧發(fā)酵系統(tǒng)的排放尾氣發(fā)酵制備丁二酸。使用同一種菌株在不同的培養(yǎng)基和不同的氧氣含量的環(huán)境中實現(xiàn)不同的代謝產(chǎn)物的同時，將有氧發(fā)酵系統(tǒng)所產(chǎn)的二氧化碳作為厭氧發(fā)酵系統(tǒng)所需的惰性氣體，實現(xiàn)發(fā)酵成本的節(jié)省，降低碳排放。同時，大大降低了兩個系統(tǒng)的染菌風險，特別是厭氧發(fā)酵的系統(tǒng)。即便有氧發(fā)酵系統(tǒng)出現(xiàn)異常，菌體進入?yún)捬醢l(fā)酵系統(tǒng)，也不會對后續(xù)系統(tǒng)產(chǎn)生任何影響。
【IPC分類】C12P7-56, C12R1-01, C12P7-46
【公開號】CN104611385
【申請?zhí)枴緾N201510100512
【發(fā)明人】呂濤
【申請人】呂濤
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年3月9日