9B-l、 78H111H6和44-3A-2生產(chǎn)的抗體和/或可得自它們的抗體，（ii)屬于（i)所述抗體的嵌合 或人源化形式的抗體，和（iii)具有（i)所述抗體之特異性的抗體，尤其是包含（i)所述抗 體的抗原結合部分或抗原結合位點（尤其是可變區(qū)）的抗體。在這一方面中，尤其優(yōu)選的 本發(fā)明抗體選自：（i)由雜交瘤35-488-1、48-38-1、51-認-1和56-44-2生產(chǎn)的抗體和/或 可得自它們的抗體，（ii)屬于（i)所述抗體的嵌合或人源化形式的抗體，和（iii)具有（i) 所述抗體的特異性的抗體，尤其是包含（i)所述抗體的抗原結合部分或抗原結合位點（尤 其是可變區(qū)）的抗體。
[0031] 在一個尤其優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗體具有抑制或減少表達GT468和/ 或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞（優(yōu)選癌細胞如乳腺癌細胞）的集落形成的 活性?？梢栽诳寺⌒纬蓪嶒灒╟lonogenic assay)中體外測量該活性。可以使用細胞系 BT-549、Caov-3、EF0-21、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468 和 MDA-MB-231 作為表達 GT-468 的 癌細胞?？寺⌒纬蓪嶒炇且环N研究特定試劑對細胞存活和增殖的效力的微生物學技術。其 常常在癌癥研究實驗室中用于測定藥物或輻射對正在增殖的腫瘤細胞的影響。該實驗包括 三個主要的步驟：（i)對細胞（尤其是癌細胞）樣品進行處理，（ii)將細胞置于組織培養(yǎng) 容器中，和（iii)允許細胞生長。將產(chǎn)生的集落固定、染色并計數(shù)。如果個體腫瘤細胞在器 官中定殖，則集落形成對轉移的形成而言是重要的?？贵w的抑制活性表明它們阻抑轉移形 成的潛力。在克隆形成實驗中具有抑制或減少集落形成之活性的抗體尤其適用于治療或預 防癌細胞（尤其是本文提到的癌癥類型）的轉移和轉移性傳播。在這一方面中優(yōu)選的本 發(fā)明抗體選自下組：（i)由雜交瘤 51G6 2H3 2B4、78H11 1H6、16-5B-1、22-1A-1、29-8B-1 和 51-1A-1產(chǎn)生的抗體和/或可得自它們的抗體，（ii)屬于（i)所述抗體的嵌合或人源化形 式的抗體，和（iii)具有（i)所述抗體之特異性的抗體，尤其是包含（i)中抗體的抗原結合 部分或抗原結合位點（尤其是可變區(qū)）的抗體。在這一方面中，尤其優(yōu)選的本發(fā)明的抗體 選自下組：（i)由雜交瘤51G6 2H3 2B4、29-8B-1和51-1A-1生產(chǎn)的抗體和/或可得自它們 的抗體，（ii)屬于（i)所述抗體的嵌合或人源化形式的抗體，和（iii)具有（i)所述抗體 之特異性的抗體，尤其是包含（i)中抗體的抗原結合部分或抗原結合位點（尤其是可變區(qū)） 的抗體。
[0032] 在一個尤其優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗體具有抑制或減少表達GT468和/或 特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的增殖的活性，并且具有抑制或減少表達GT468 和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的集落形成的活性。在這一方面中優(yōu)選的 本發(fā)明抗體選自下組：（i)由雜交瘤51-1A-1產(chǎn)生的抗體和/或可得自它們的抗體，（ii)屬 于（i)所述抗體的嵌合或人源化形式的抗體，和（iii)具有（i)所述抗體之特異性的抗體， 尤其是包含（i)所述抗體的抗原結合部分或抗原結合位點（尤其是可變區(qū)）的抗體。
[0033] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及下述抗體，所述抗體（i)結合表達GT468和/或特 征在于其細胞表面與GT468締合之細胞，和（ii)不結合不表達GT468和/或特征不在于其 細胞表面與GT468締合之細胞。本發(fā)明的抗體優(yōu)選地（i)介導表達GT468和/或特征在于 其細胞表面與GT468締合之細胞的殺死和/或抑制其增殖，和（ii)不介導不表達GT468和 /或特征不在于其細胞表面與GT468締合之細胞的殺死和/或不抑制其增殖。
[0034] 本發(fā)明的抗體可以是單克隆、嵌合的、人的或人源化的抗體或抗體片段，其可選自 IgGl、IgG2(優(yōu)選 IgG2a 和 IgG2b)、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、分泌型 IgA、IgD 和 IgE 抗 體。
[0035] 本發(fā)明的抗體包括全人抗體。此類抗體可以在下述非人轉基因動物（例如轉基因 小鼠）中生產(chǎn)，所述非人轉基因動物能夠通過發(fā)生V-D-J重組和同種型轉換而生產(chǎn)GT468 的人單克隆抗體的多種同種型。此類轉基因動物也可以是生產(chǎn)多克隆抗體的轉基因兔，如 US 2003/0017534 所公開。
[0036] 本發(fā)明的抗體與GT468抗原的結合可以例如通過活化補體系統(tǒng)來介導表達GT468 和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞（例如腫瘤細胞）的殺死，和/或可抑制 表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞（例如腫瘤細胞）的增殖?；?者或除介導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的殺死和/或抑制 表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的增殖之外，本發(fā)明的抗體與 GT468抗原的結合可抑制表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞（例 如腫瘤細胞）的運動、遷移、集落形成和/或侵襲，并且因此可抑制腫瘤細胞的轉移性傳播。 表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的殺死可以通過一種或多種以 下機制發(fā)生：表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的補體依賴性細 胞毒性（⑶C);表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的凋亡；表達 GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的效應細胞吞噬作用；或表達GT468 和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的效應細胞抗體依賴性細胞毒性（ADCC)。
[0037] 根據(jù)本發(fā)明的所有方面，GT468優(yōu)選為人GT468,優(yōu)選地具有SEQIDN0:2的氨基 酸序列，更優(yōu)選地具有SEQIDN0:2氨基酸序列之細胞外結構/或的氨基酸序列，特別是具 有涵蓋SEQIDN0:2之23至212位氨基酸的氨基酸序列。
[0038] 在一些特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗體與活細胞表面上存在的GT468的天 然表位（例如SEQ ID N0 :3-10和35-82所示的）結合。在一些更優(yōu)選的實施方案中，本發(fā) 明的抗體對癌細胞（優(yōu)選乳腺癌細胞）具有特異性。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體對表達GT-468 的癌細胞如細胞系 BT-549、Caov-3、EF0-21、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468 和 MDA-MB-231 是 特異性的，并且不結合不表達GT468的癌細胞如NUG-C4胃癌細胞。
[0039] 在本發(fā)明的一些實施方案中，GT468表達在細胞表面上和/或與細胞表面相關。
[0040] 可通過包括以下步驟的方法來獲得本發(fā)明的抗體：用含有選自SEQ ID N0 :2-10 和35-82之氨基酸序列的蛋白質或肽或者其免疫原性片段或衍生物、或表達所述蛋白質或 肽或者其免疫原性片段或衍生物的核酸或宿主細胞來免疫動物。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體對 以上提及的蛋白質、肽或其免疫原性片段或衍生物具有特異性。對于用于免疫的蛋白質或 肽來說，衍生物涉及這些蛋白質或肽的變體，所述變體具有與衍生出其的蛋白質或肽同樣 的免疫原性。特別地，當用于免疫產(chǎn)生抗體（特別是單克隆抗體）時，蛋白質或肽的衍生物 提供了與使用蛋白質或肽進行免疫時所獲得抗體具有同樣特異性的抗體。例如，這樣的衍 生物可包括一個或多個氨基酸的缺失、替換或添加。特別地，它可包括一個或多個氨基酸的 添加，例如在N-端或C-端或兩者處添加半胱氨酸。
[0041] 在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗體由具有如下登記號的克隆 產(chǎn)生：DSM ACC2822(4E9-1H9)、DSM ACC2826(9B6-2A9)、DSM ACC2824(59D6-2F2)、 DSM ACC2825 (61C11-2B5) , DSM ACC2823 (78H11-1H6), DSM ACC2895 (22-1A-1), DSM ACC2893 (22-2A-1)、DSM ACC2896 (22-9B-1)、DSM ACC2897 (23-33A-1)、DSM ACC2891 (23-19A-1),DSM ACC2894 (FI1#33F7D12),DSM ACC2892(4A12 2D4 1A10), DSM ACC2898(4E9 1D12 2D4)、DSM ACC2961 (42H11 1C11 2B2)、DSM ACC2962 (51G6 2H3 2B4)、DSM ACC2943(16-5B-1)、DSM ACC2956 (20-11A-I)、DSM ACC2947(29-1A_2)、 DSM ACC2964(29-8B-1)、DSM ACC2959(35-48B-1)、DSM ACC2963(35-50A-2a)、 DSM ACC2957(38-10B-1)、DSM ACC2958(38-1A-1)、DSM ACC2948(44-3A-2)、 DSM ACC2949 (45-2A-1)、DSM ACC2950 (45-8A-2)、DSM ACC2951 (48-3B-1)、 DSM ACC2952(48-4A-1)、 DSM ACC2946(49-3A-1)、 DSM ACC2945(49-8A-1)、 DSM ACC2944(51-1A-I)、DSM ACC2953 (53-13A-2)、DSM ACC2955 (53-29A-1)、DSM ACC2960(54-4B-2)、DSM ACC2954(56-4A-2)或DSM ACC3001(62-9B-1)。
[0042] 在一個實施方案中，本發(fā)明的抗體與治療劑（如毒素、放射性同位素、藥物或細胞 毒劑）偶聯(lián)。
[0043]另一方面，本發(fā)明涉及能產(chǎn)生本發(fā)明抗體的雜交瘤。優(yōu)選的雜交瘤具有如下 登記號：DSM ACC2822(4E9-1H9)、DSM ACC2826(9B6-2A9)、DSM ACC2824(59D6-2F2)、 DSM ACC2825 (61C11-2B5),DSM ACC2823 (78H11-1H6),DSM ACC2895 (22-1A-1), DSM ACC2893 (22-2A-1)、DSM ACC2896 (22-9B-1)、DSM ACC2897 (23-33A-1)、DSM ACC2891 (23-19A-1), DSM ACC2894 (FI1#33F7D12), DSM ACC2892(4A12 2D4 1A10), DSM ACC2898(4E9 1D12 2D4)、DSM ACC2961 (42H11 1C11 2B2)、DSM ACC2962 (51G6 2H3 2B4)、DSM ACC2943(16-5B-1)、DSM ACC2956 (20-11A-I)、DSM ACC2947(29-1A_2)、 DSM ACC2964 (29-8B-1)、DSMACC2959 (35-48B-1)、DSMACC2963 (35-50A-2a)、 DSM ACC2957(38-10B-1)、DSM ACC2958(38-1A-1)、DSM ACC2948(44-3A-2)、 DSM ACC2949 (45-2A-1)、DSM ACC2950 (45-8A-2)、DSM ACC2951 (48-3B-1)、 DSM ACC2952 (48-4A-1)、DSM ACC2946 (49-3A-1)、DSM ACC2945 (49-8A-1)、 DSM ACC2944(51-1A-I)、DSM ACC2953 (53-13A-2)、DSM ACC2955 (53-29A-1)、DSM ACC2960(54-4B-2)、DSM ACC2954(56-4A-2)或DSM ACC3001(62-9B-1)。
[0044] 本文通過引用抗體名稱和/或引用產(chǎn)生該抗體的克?。ㄈ?E9-1H9)來指明本發(fā) 明的抗體。
[0045] 優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體能夠區(qū)分由不同細胞類型（包括癌細胞和非惡性細胞）表 達的GT468變體。
[0046] 本發(fā)明的抗體優(yōu)選地介導殺死表達GT468和/或特征在于其細胞表面通過與 GT468結合而與GT468締合的細胞。優(yōu)選地，GT468在所述細胞表面上表達。在一個實施 方案中，本發(fā)明的抗體誘導補體依賴性細胞毒作用（CDC)，例如表達GT468和/或特征在于 其細胞表面與GT468締合之細胞至少約20~40 %的⑶C介導之裂解，優(yōu)選地約40~50% 的CDC介導之裂解，更優(yōu)選地大于50%的CDC介導之裂解。作為誘導CDC的替代或補充， 本發(fā)明的抗體可在效應細胞（例如單核細胞、單個核細胞、NK細胞和PMN)存在下誘導表達 GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的抗體依賴性細胞毒作用（ADCC)。 本發(fā)明的抗體可具有誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞發(fā)生 凋亡的能力，誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞同質性粘附 的能力，和/或在巨噬細胞存在下誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締 合之細胞的吞噬。本發(fā)明的抗體可具有一種或多種上述功能特性。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體 誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的⑶C介導之裂解和ADCC 介導之裂解，更優(yōu)選地誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的 ADCC介導之裂解而不誘導所述細胞的CDC介導之裂解。針對本發(fā)明抗體之靶細胞的實例包 括但不限于表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合的癌細胞。在一個特別優(yōu) 選的實施方案中，由本發(fā)明抗體所介導的殺死細胞是GT468特異性的，即本發(fā)明的抗體優(yōu) 選以CDC和/或ADCC介導之裂解的方式介導殺死表達GT468和/或特征在于其細胞表面 與GT468締合的細胞，但不介導殺死不表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468不 發(fā)生締合的細胞。上述抗體可用于在治療或預防癌癥中介導殺死腫瘤細胞，所述癌癥例如 乳腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、肝細胞癌、結腸癌、胰腺癌、食道癌、頭頸癌、腎癌（尤其是腎細 胞癌）、前列腺癌、肝癌、黑素瘤、肉瘤、骨髓瘤、神經(jīng)母細胞瘤、胎盤絨毛膜癌、宮頸癌和甲狀 腺癌，及其轉移形式。在一個實施方案中，所述癌癥疾病是肺中的轉移癌。
[0047] 本發(fā)明的抗體可源自不同的物種，其包括但不限于小鼠、大鼠、兔、豚鼠和人。本發(fā) 明的抗體還包括嵌合分子，其中源自某一物種（優(yōu)選人）的抗體恒定區(qū)與源自另一物種的 抗原結合位點相組合。此外，本發(fā)明的抗體包括人源化分子，其中源自非人物種之抗體的抗 原結合位點與人源的恒定區(qū)和框架區(qū)相組合。
[0048] 本發(fā)明的抗體包括多克隆抗體和單克隆抗體，其中包括IgG2a(如IgG2a，k，入）、 IgG2b (如IgG2b，k，A)、IgG3(如IgG3, k，X)和IgM抗體。然而，本發(fā)明還涵蓋了另一 些抗體同種型（isotype)，包括IgGl、IgAl、IgA2、分泌型IgA、IgD和IgE抗體。所述抗體 可以是完整抗體或其抗原結合片段，包括例如Fab、F(ab'） 2、Fv、單鏈Fv片段或雙特異性抗 體。此外，所述抗原結合片段包括結合結構域免疫球蛋白融合蛋白，其包含（i)與免疫球蛋 白鉸鏈區(qū)多肽融合的結合結構域多肽（例如重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)），（ii)與所述鉸鏈 區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，以及（iii)與所述CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重 鏈CH3恒定區(qū)。這樣的結合結構域免疫球蛋白融合蛋白還進一步公開于US2003/0118592 和 US 2003/0133939 中。
[0049] 優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體與GT468解離的解離平衡常數(shù)（kD)約為1~100nM或更低。 優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體不與相關細胞表面抗原發(fā)生交叉反應，并因此不抑制其功能。
[0050] 在一些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗體可通過如下一個或多個屬性來表征：
[0051] a)對GT468具有特異性；
[0052] b)與GT468的結合親合力約為100nM或更低，優(yōu)選地約5~10nM或更低，更優(yōu)選 地約1~3nM或更低；
[0053] c)能夠對⑶55/59陰性細胞或⑶55/59陽性細胞介導高水平的⑶C;
[0054] d)能夠抑制表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的生長；
[0055] e)能夠誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞發(fā)生細胞 凋亡；
[0056] f)能夠誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞發(fā)生同質 性粘附；
[0057] g)能夠在效應細胞存在下誘導表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締 合之細胞發(fā)生ADCC;
[0058] h)能夠延長具有表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合之細胞的腫 瘤細胞的患者存活；
[0059] i)能夠清除表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合的細胞；j)能夠 清除低水平表達GT468和/或特征在于其細胞表面與GT468締合的細胞；和/或
[0060] k)能夠使GT468聚集在活細胞表面上。
[0061]本發(fā)明的抗GT468抗體可以衍生成、連接至或共表達有另一些結合特異性。在一 個具體的實施方案中，本發(fā)明提供了雙特異性或多特異性分子，其包含至少一種針對GT468 的第一結合特異性（例如，抗GT468抗體或其模擬物）以及針對效應細胞的第二結合特異 性（例如針對Fc受體（如Fc- Y受體，例如Fc- y RI，或任何其它Fc受體）或T細胞受體 (如CD3)的結合特異性）。
[0062] 因此，本發(fā)明包含與GT468以及Fc受體或T細