一種防治稻瘟病的解淀粉芽孢桿菌rl263的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及微生物領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種防治稻癌病的解淀粉芽抱桿菌炬acillus amyloliquefaciens)及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 水稻是世界范圍內(nèi)最主要的糧食作物之一，在我國(guó)，水稻的種植面積約為全國(guó)耕 地的1/4,而年產(chǎn)量卻占全國(guó)糧食總產(chǎn)量的一半。在水稻生產(chǎn)過(guò)程中，病害問(wèn)題（尤其稻癌 病）是制約水稻高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的重要障礙因素之一（董金皋等，2008)。
[000引 稻癌病是由稻卵抱球腔菌Magnapdhe grisea化ebert)Ba;rr引起的真菌性病害 (孫泰宏，2009)。稻癌病是分布最廣泛、危害最嚴(yán)重的植物真菌病害之一。根據(jù)發(fā)病時(shí)期和 發(fā)病部位的不同可分為苗癌、葉癌、節(jié)癌、穗頸癌、枝梗癌、谷粒癌等，其中W葉癌、穗頸癌最 為常見，危害較大。在我國(guó)，南北稻區(qū)每年都有此病不同程度的發(fā)生和流行。其發(fā)病區(qū)分布 廣泛，尤W山區(qū)、丘陵地區(qū)發(fā)生較重；病情擴(kuò)散速度快，一旦條件適宜，容易流行成災(zāi)；造成 損失嚴(yán)重，病害流行年份，一般減產(chǎn)10 %-20 %，嚴(yán)重的可達(dá)40 %-50 %，特別嚴(yán)重的田塊甚 至顆粒無(wú)收。由此可見，稻癌病是嚴(yán)重影響水稻生產(chǎn)的重要病害，因而對(duì)稻癌病進(jìn)行防治具 有十分重要的意義。
[0004] 化學(xué)防治作為該病害最主要的防治措施之一，具有較長(zhǎng)的歷史沿革，化學(xué)防治的 優(yōu)點(diǎn)在于見效快，成本低、使用方便、多病兼治。缺點(diǎn)在于長(zhǎng)期W來(lái)對(duì)其大量、不合理的使 用，會(huì)導(dǎo)致防效降低，其高毒、高殘留的特性不僅對(duì)人、畜的健康造成危害，而且對(duì)±壤、水 體、大氣造成嚴(yán)重污染，破壞生態(tài)平衡。同時(shí)，由于病菌抗藥性不斷增強(qiáng)，農(nóng)藥的使用量和使 用頻度不斷加大，盡管化學(xué)防治起初很有效，但是隨著時(shí)間的發(fā)展，植物病菌會(huì)出現(xiàn)不同程 度的抗藥性。
[0005] 隨著植物病害防治技術(shù)的改進(jìn)，人類對(duì)環(huán)境的高度重視，探尋一種對(duì)人類和環(huán)境 友好并具良好防效的防治策略一利用有益微生物防治稻癌病已成為當(dāng)務(wù)之急（劉國(guó)權(quán)， 2004)。目前，防治稻癌病的有益微生物類群主要有放線菌、真菌、細(xì)菌及真菌病毒等。目前 用于生物防治的細(xì)菌主要有芽抱桿菌和假單抱桿菌，且芽抱桿菌是近年來(lái)科研工作者研究 的熱點(diǎn)（穆常青，2006)。
[0006] 芽抱桿菌中用于防治稻癌病的種類已經(jīng)報(bào)道的主要有枯草芽抱桿菌炬acillus subtilis)、短小芽抱桿菌炬acillus pumilis)和蠟狀芽抱桿菌炬acillus cereus)等。彭 化賢等，利用水稻根際分離獲得的蠟樣芽抱桿菌Ma-32和枯草芽抱桿菌Xi-55,進(jìn)行田間防 效試驗(yàn)，連續(xù)兩年防效均為50% W上（彭化賢，2002)。穆常青等研究發(fā)現(xiàn)，芽抱桿菌濃度在 lxl08c化/mL時(shí)，對(duì)穗頸癌的防效達(dá)57. 2%，增產(chǎn)率達(dá)9. 6% (穆常青，2006)。高學(xué)文等研 究發(fā)現(xiàn)，枯草芽抱桿菌B2菌株產(chǎn)生的胞外物質(zhì)，對(duì)小麥紋枯病菌和稻癌病菌菌絲生長(zhǎng)均具 有抑制作用（高學(xué)文等，2003)。朱桂梅，陳宏州等，利用短小芽抱桿菌TW-2菌株對(duì)水稻穗 頸癌進(jìn)行防治，結(jié)果表明；TW-2不僅對(duì)稻癌病菌具有強(qiáng)烈的抑制作用，對(duì)穗頸癌的防效也 達(dá)到80% W上（朱桂梅等，2007)。
[0007] 目前，國(guó)內(nèi)利用解淀粉芽抱桿菌防治稻癌病的研究較少。陳成等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉 芽抱桿菌HN-06的代謝產(chǎn)物經(jīng)分離純化后，對(duì)稻癌病菌具有顯著的抑菌作用（陳成，2010)。 陸凡等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽抱桿菌T553具有蛋白酶、纖維素酶活性及產(chǎn)嗜鐵素能力，且對(duì) 水稻稻癌病菌的抑制作用比較明顯（陸凡，2011)。在已報(bào)道的解淀粉芽抱桿菌防治稻癌病 的研究中，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室抑菌效果的研究較多，但對(duì)于田間防治效果、實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用的研究較 少。所W，出于本領(lǐng)域中還仍舊存在對(duì)水稻稻癌病具有廣譜且高效的防效、能夠有效增產(chǎn)的 新的解淀粉芽抱桿菌菌株的需要。需要改進(jìn)篩選方式，改變離體條件下菌株抑菌能力檢測(cè) 的傳統(tǒng)篩選方法，建立在水稻葉片上直接進(jìn)行抑菌防病檢測(cè)的高通量的篩選方法，獲得大 量有益菌，并對(duì)菌株的田間防效進(jìn)行充分驗(yàn)證，對(duì)其實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用潛力進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估與大 力開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的在于提供一種具對(duì)稻癌病有穩(wěn)定且高效的防效、能夠有效增產(chǎn)的解 淀粉芽抱桿菌菌株。
[0009] 為達(dá)此目的，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案：
[0010] 在第一方面，本發(fā)明提供了一種解淀粉芽抱桿菌化263炬acillus amyloliquefaciens)，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、（CGMCC)，保 藏日期為2014年5月21日，保藏編號(hào)為CGMCC No. 9191。
[0011] 在第二方面，本發(fā)明提供了一種菌劑，其包含如第一方面所述的解淀粉芽抱桿菌 化263。
[0012] 在第=方面，本發(fā)明提供了一種防治稻癌病的方法，其包括將如第一方面所述的 解淀粉芽抱桿菌化263或如第二方面所述的菌劑施用于水稻作物。
[0013] 在本發(fā)明的防治稻癌病的方法中，所述菌劑為所述解淀粉芽抱桿菌化263的培養(yǎng) 液。
[0014] 在本發(fā)明的防治稻癌病的方法中，所述稻癌病為苗稻癌、葉癌、葉枕癌、節(jié)稻癌、穗 頸癌、穗癌、枝梗癌和/或谷粒癌。其中，優(yōu)選地，所述稻癌病為葉癌和/或穗頸癌。
[0015] 在第四方面，本發(fā)明提供了如第一方面所述的解淀粉芽抱桿菌化263或如第二方 面所述的菌劑在防治稻癌病中的用途。
[0016] 在本發(fā)明的防治稻癌病的用途中，所述稻癌病為苗稻癌、葉癌、葉枕癌、節(jié)稻癌、穗 頸癌、穗癌、枝梗癌和/或谷粒癌。其中，優(yōu)選地，所述稻癌病為葉癌和/或穗頸癌。
[0017] 本發(fā)明的有益技術(shù)效果為：
[001引本發(fā)明所獲得的解淀粉芽抱桿菌化263,分離自水稻植株葉片內(nèi)部，適應(yīng)水稻植株 葉部的微生態(tài)環(huán)境，能夠在葉片內(nèi)部很好的定殖生存，可W有效延長(zhǎng)其在田間的防治有效 期。
[0019] 本菌株是直接依據(jù)實(shí)驗(yàn)室離體葉片防效測(cè)定結(jié)果篩選獲得，并經(jīng)過(guò)連續(xù)2年不同 地點(diǎn)不同水稻品種的田間防效驗(yàn)證，其田間防效穩(wěn)定，具有較高的實(shí)際應(yīng)用潛力。
[0020] 本菌株分離自水稻植株內(nèi)部，而非其他生態(tài)系統(tǒng)，其與水稻田的環(huán)境相容性更好， 能夠更好的保持水稻田生態(tài)環(huán)境。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1是解淀粉芽抱桿菌菌株化26316S rDNA序列測(cè)定聚類分析圖譜。
[0022] 圖2是解淀粉芽抱桿菌菌株化263的gyrA序列測(cè)定聚類分析圖譜。
[0023] 圖3是解淀粉芽抱桿菌化263菌株對(duì)稻癌病菌菌落生長(zhǎng)的抑制效果。
[0024] 圖4是解淀粉芽抱桿菌化263菌株對(duì)稻癌病菌菌落生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)的空白對(duì)照，即 僅在培養(yǎng)基平板中接種稻癌病菌的菌落生長(zhǎng)效果。
[0025] 圖5是解淀粉芽抱桿菌化263菌株發(fā)酵液對(duì)稻癌菌抱子萌發(fā)的抑制試驗(yàn)結(jié)果。
[0026] 圖6是解淀粉芽抱桿菌化263菌株發(fā)酵液對(duì)稻癌菌抱子萌發(fā)的抑制效果。
[0027] 圖7是清水處理的稻癌菌抱子正常萌發(fā)并形成附著胞。
【具體實(shí)施方式】
[002引下面結(jié)合附圖并通過(guò)【具體實(shí)施方式】來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。