EgLDH 基因擴(kuò)增產(chǎn)物（箭頭所示）。
[0044] 圖2顯示了重組質(zhì)粒pET-28a-EgLDH轉(zhuǎn)化大腸桿菌后菌落PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)結(jié) 果。圖A中各泳道如下：M :分子量標(biāo)準(zhǔn)，1，3 :空載質(zhì)粒菌體，2,4 :攜帶EgLDH基因（箭頭所 示）菌體；圖B中各泳道如下:pET28a-EgLDH質(zhì)粒擴(kuò)增產(chǎn)物（箭頭所示），M :分子量標(biāo) 準(zhǔn)。
[0045] 圖3顯示了重組蛋白EgLDH表達(dá)與純化分析結(jié)果。圖A中各泳道如下：M :標(biāo)準(zhǔn)分 子量蛋白，1 :空載菌體蛋白，2 :未誘導(dǎo)菌體蛋白，3 :誘導(dǎo)后菌體裂解上清（箭頭所示為目標(biāo) 蛋白），4 :誘導(dǎo)后菌體裂解沉淀；圖B中各泳道如下：M:標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白，1:純化后的重組 EgLDH(箭頭所示），2 :純化前含EgLDH蛋白的可溶性菌體蛋白
[0046] 圖4顯示了EgLDH, HCF，EgAgBl抗原的ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0047] 圖5顯示了本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中蛋白濃度測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0048] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研宄，首次意外地發(fā)現(xiàn)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)乳酸脫氫酶 (EgLDH)可以作為免疫原性極強(qiáng)的用于診斷細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)抗原，該抗原對(duì)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的 診斷敏感性和特異性均非常高。基于本發(fā)明，可將EgLDH作為細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的診斷抗原，從 而進(jìn)一步將其用于制備診斷和檢測(cè)細(xì)粒棘球蝴絳蟲(chóng)（或細(xì)粒棘球蝴）的試劑或試劑盒。在 此基礎(chǔ)上，完成了本發(fā)明。
[0049] LDH抗原
[0050] 乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH)是廣泛存在于動(dòng)、植物及微生物細(xì)胞 內(nèi)的一種重要功能酶，是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶之一，在NADH和NAD+的輔助下，LDH可催化丙 酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，釋放能量供機(jī)體所需。
[0051] 在本發(fā)明中，首次應(yīng)用細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)LDH為抗原進(jìn)行細(xì)粒棘球蝴病診斷標(biāo)志物， 并通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，該細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)LDH有助于顯著提高細(xì)粒棘球蝴病診斷的靈敏度和特異 性。
[0052] 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)LDH的氨基酸序列和核苷酸序列的信息如下：
[0053] EgLDH的氨基酸序列：
[0054] MSVEGLLLPLEMEQCFGRERKVSVVGAGAVGTAAVFAIMTKGIANTVALYDIDEDRCNGEVMDLDQGSL FLESCRVIGGKDITKTADSDIVVVTAGARQAVGESRLNLVQRNVDIFKKLIPTLVEQSPKCILVIVTNPVDIMTYVS WKLSGFPQHRVLGSGTMLDTARFRHILGEKLNVHPSAIHGYWGEHGDSSVPVWSRVTVGGANLCDIYPKIGQAGDP DDFASIHKAVVDSAYEIIRMKGCTAWAIGLCCASLCNAILRNKKIVIPVSTSLKGKLGIKEEVFTSVPCIVDSSGVS AVINLEYSPSEKQSLLASVETLQKIIAGIKff(SEQID NO. :1)
[0055] EgLDH核苷酸序列：
[0056] Atgtctgtggaggggttgttgttgcctttggagatggaacagtgttttgggcgtgagcggaaggtttct gttgttggtgcgggagcagtaggcacggcagcggtgtttgctattatgactaaaggtattgcaaacactgtcgctct ctacgatattgacgaagatagatgcaacggtgaagtgatggacttggaccaaggctcactgtttctggagtcttgta gagtaattggtggcaaagatataacgaagactgcggactcggatatcgttgtagtaacagctggggcccggcaagct gttggcgaatccagattgaaccttgttcaacgcaatgttgatatatttaaaaaactaattcctactctcgttgaaca aagcccaaagtgcattctcgttatcgttacaaatccagttgatatcatgacctatgtctcctggaagttaagcggct ttccacagcatcgtgtcttaggatctggaaccatgcttgacactgctagatttcggcacattcttggcgagaagttg aatgtgcatcctagtgccatacacggttacgtagtcggcgaacatggagactcgagtgtgccagtatggagtagggt gaccgttggtggagcaaatctctgtgacatttatcccaagatcggccaagccggcgatcccgacgattttgcttcca ttcacaaggctgttgtcgatagcgcctacgaaatcattcgcatgaagggctgcactgcttgggccataggtctctgt tgcgcctccctgtgtaatgcgattctgcgaaacaagaaaattgtgattccagtttccacctcacttaagggcaaact tggtatcaaagaggaggtgttcacgagcgtgccctgtatagtcgacagcagcggcgtgtctgcagtgatcaacctcg agtattcgcctagtgagaaacaaagcctgttggccagtgttgagactcttcagaagattatcgcaggcatcaagtgg tga(SEQ ID NO. :2)
[0057] 陽(yáng)性抗原
[0058] 在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"抗原"或"陽(yáng)性抗原"可互換使用，都指能夠與細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)抗 體特異結(jié)合的蛋白或多肽?？乖侵改軌虼碳ぎa(chǎn)生（特異性）免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn) 物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)（特異性反應(yīng)）的物質(zhì)?？乖幕咎?性有兩種，一是誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力，也就是免疫原性，二是與免疫應(yīng)答的產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)， 也就是抗原性。
[0059] 如本文所用，"分離的"是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(lái)（如果是天然的物質(zhì)，原 始環(huán)境即是天然環(huán)境）。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和蛋白是沒(méi)有分離純化 的，但同樣的多聚核苷酸或蛋白如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開(kāi)，則為分離純化 的。"分離的陽(yáng)性抗原"是指所述抗原基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類(lèi)、糖類(lèi)或其 它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化陽(yáng)性抗原?；旧霞兊牡鞍卓?原在非還原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶?？乖募兌饶苡冒被嵝蛄蟹治?。
[0060] 本發(fā)明的抗原可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從 原核或真核宿主（例如，細(xì)菌、酵母、高等植物、昆蟲(chóng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞）中產(chǎn)生。根據(jù)重組生 產(chǎn)方案所用的宿主，本發(fā)明的抗原可以是糖基化的和非糖基化的。本發(fā)明的抗原還可包括 或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
[0061] 本發(fā)明還包括抗原的片段、衍生物和類(lèi)似物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)"片段"、"衍生物" 和"類(lèi)似物"是指基本上保持本發(fā)明的天然抗原相同的生物學(xué)功能或活性的抗原。本發(fā)明 的抗原片段、衍生物或類(lèi)似物可以是（i)有一個(gè)或多個(gè)保守或非保守性氨基酸殘基（優(yōu)選 保守性氨基酸殘基）被取代的抗原，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳 密碼編碼的，或（ii)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基中具有取代基團(tuán)的抗原，或（iii)抗原與另 一個(gè)化合物（比如延長(zhǎng)抗原半衰期的化合物，例如聚乙二醇）融合所形成的抗原，或（iv) 附加的氨基酸序列融合到此抗原序列而形成。這些片段、衍生物和類(lèi)似物屬于本領(lǐng)域熟練 技術(shù)人員公知的范圍。
[0062] 在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"抗原"還包括具有相同功能的變異形式。這些變異形式包括 (但并不限于）：一個(gè)或多個(gè)（通常為1-50個(gè)，較佳地1-30個(gè)，更佳地1-20個(gè)，最佳地1-10 個(gè)）氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)（通常為 20個(gè)以?xún)?nèi)，較佳地為10個(gè)以?xún)?nèi)，更佳地為5個(gè)以?xún)?nèi)）氨基酸。例如，在本領(lǐng)域中，用性能相 近或相似的氨基酸進(jìn)行取代時(shí)，通常不會(huì)改變蛋白質(zhì)的功能。又比如，在C末端和/或N末 端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸通常也不會(huì)改變蛋白質(zhì)的功能。
[0063] 修飾（通常不改變一級(jí)結(jié)構(gòu)）形式包括：體內(nèi)或體外的抗原的化學(xué)衍生形式如乙 ?；?、羧基化、糖基化。修飾形式還包括具有磷酸化氨基酸殘基（如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨 酸，磷酸蘇氨酸）的序列。
[0064] 抗原編碼序列
[0065] 編碼本發(fā)明抗原的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基 因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼 鏈。術(shù)語(yǔ)"編碼本發(fā)明抗原的多核苷酸"可以是包括編碼此抗原的多核苷酸，也可以是還包 括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。
[0066] 本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的 等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插 入變異體。本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交且兩個(gè)序列之間具有至少50%，較佳地至少 70%，更佳地至少80%相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在