提供的多肽 的氣基酸序列不為具有如SEQIDN0 :22所不的氣基酸序列。
[0021] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的多肽具有如SEQIDN0 :1所示的氨基酸序列經(jīng)缺失一個(gè)或 多個(gè)氨基酸獲得的氨基酸序列時(shí)，缺失氨基酸的個(gè)數(shù)為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)。
[0022] 本發(fā)明還提供了 一種多肽在制備防治由牙齦卟啉單胞菌引起的疾病的藥物中的 應(yīng)用，該多肽具有如（I)、（II)所示的氨基酸序列中任意一個(gè)：
[0023] (I)具有如SEQIDN0 :1所示的氨基酸序列；
[0024] (II)具有如SEQIDN0 :1所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)氨基 酸獲得的氨基酸序列。
[0025] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的應(yīng)用所針對(duì)的由牙齦卟啉單胞菌引起的疾病為牙周病。
[0026] 更為優(yōu)選地，本發(fā)明提供的應(yīng)用所針對(duì)的牙周病為牙齦病或牙周炎。
[0027] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包括一種多肽，該多肽具有如（I)、（II)所示 的氨基酸序列中任意一個(gè)：
[0028] (I)具有如SEQIDN0 :1所示的氨基酸序列；
[0029] (II)具有如SEQIDN0 :1所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)氨基 酸獲得的氨基酸序列。
[0030] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物還包括其他藥用活性成分。
[0031] 本發(fā)明還提供了一種藥物制劑，其包括一種藥物和藥學(xué)上可接受的輔料，該藥物 包括一種多肽，該肽具有如（I)、（II)所示的氨基酸序列中任意一個(gè)：
[0032] (I)具有如SEQIDN0 :1所示的氨基酸序列；
[0033] (II)具有如SEQIDN0 :1所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)氨基 酸獲得的氨基酸序列。
[0034] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的藥物制劑的劑型為注射劑、微囊或填植劑。
[0035] 本發(fā)明提供了一種多肽、其應(yīng)用及包含該多肽的藥物。該多肽具有如
[0036]SEQIDNO:1所示的氨基酸序列，或者SEQIDNO:1所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺 失或添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸獲得的氨基酸序列。該多肽具有牙齦卟啉單胞菌HA-2蛋白與 氯化血紅素結(jié)合位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的氨基酸，能夠抑制HA-2蛋白與氯化血紅素的結(jié)合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表明，本發(fā)明提供的多肽能夠抑制重組HA-2蛋白與氯化血紅素瓊脂糖珠的結(jié)合，能夠有效 抑制牙齦卟啉單胞菌的生長，可以應(yīng)用于制備防治由牙齦卟啉單胞菌引起的疾病的藥物。
【附圖說明】
[0037] 圖1示實(shí)施例1構(gòu)建的重組HA-2質(zhì)粒PCR鑒定結(jié)果，其中M代表DNA分子量 Marker;泳道1代表重組HA-2質(zhì)粒PCR所得片段；
[0038] 圖2示實(shí)施例1獲得的重組HA-2和重組突變HA-2的SDS-PAGE的電泳檢測(cè)結(jié)果， M代表蛋白分子量Marker;泳道1代表重組HA-2蛋白，蛋白大小約為25KDa，與rHA-2理論 值大小基本一致；泳道2代表重組突變HA-2蛋白，與重組突變HA-2理論值大小基本一致；
[0039] 圖3示實(shí)施例1提供的制備方法制得的rHA-2與氯化血紅素瓊脂糖珠結(jié)合的活性 鑒定結(jié)果，其中M代表蛋白分子量Marker;泳道1代表rHA-2,泳道中出現(xiàn)的目的條帶大小 為25KDa，與rHA-2理論值大小基本一致；
[0040] 圖4示實(shí)施例1提供的制備方法制得的重組突變HA-2的鑒定結(jié)果，其中M代表蛋 白分子量Marker;泳道1代表重組突變HA-2 ;泳道中出現(xiàn)的目的條帶大小為25KDa，與重組 突變HA-2大小一致；
[0041] 圖5示實(shí)施例1提供的制備方法制得的rHA-2、重組突變HA-2蛋白結(jié)合氯化血紅 素的鑒定結(jié)果，其中M代表蛋白分子量Marker;泳道1代表lOnmol/L的rHA-2;泳道2代 表lOnmol/L的重組突變HA-2 ;泳道3代表7. 5nmol/L的rHA-2 ;泳道4代表7. 5nmol/ L的重組突變HA-2 ;泳道5代表5nmol/L的rHA-2 ;泳道6代表5nmol/L的重組突變 HA-2 ;泳道7代表2. 5nmol/L的rHA-2 ;泳道8代表2. 5nmol/L的重組突變HA-2 ;泳道 9代表25nmol/L的typsine抑制劑；泳道10代表12. 5nmol/L的typsine抑制劑；泳道 11代表6. 25nmol/L的typsine抑制劑；泳道中出現(xiàn)的目的條帶大小為25KDa，與rHA-2， 或重組突變HA-2大小一致；
[0042] 圖6示實(shí)施例2不同的多肽對(duì)rHA-2與氯化血紅素結(jié)合的抑制試驗(yàn)結(jié)果，其中M 代表蛋白分子量Marker;泳道1代表實(shí)驗(yàn)組；泳道2代表對(duì)照組1 ;泳道3代表對(duì)照組2 ;泳 道4代表空白對(duì)照組；泳道中出現(xiàn)的目的條帶大小為25KDa，與rHA-2大小一致；
[0043] 圖7示實(shí)施例3中不同組別多肽對(duì)rHA-2與氯化血紅素結(jié)合的抑制試驗(yàn)結(jié)果，其 中M代表蛋白分子量Marker;泳道1至泳道5代表實(shí)驗(yàn)組，泳道1至泳道5所對(duì)應(yīng)的多肽 的濃度依次為 8mmol/L、4mmol/L、2mmol/L>lmmol/L和 0? 5mmol/L;泳道 6 至泳 道8代表對(duì)照組1，泳道6至泳道8所對(duì)應(yīng)的多肽的濃度依次為8mmol/L、2mmol/L和 0. 5mmol/L;泳道9至泳道11代表對(duì)照組2,泳道9至泳道11所對(duì)應(yīng)的多肽的濃度依次 為 8mmol/L、2mmol/L和 0? 5mmol/L；
[0044] 圖8示實(shí)施例4添加不同的多肽對(duì)牙齦卟啉單胞菌生長的作用，其中，曲線1代表 對(duì)照組1 ;曲線2代表對(duì)照組2 ;曲線3代表為空白對(duì)照組；曲線4代表實(shí)驗(yàn)組；圖中*表示 同一時(shí)間觀測(cè)點(diǎn)與其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P〈〇. 05)。
【具體實(shí)施方式】
[0045] 本發(fā)明公開了一種多肽、其應(yīng)用及包含該多肽的藥物。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參考 本文內(nèi)容，獲得該多肽，實(shí)現(xiàn)其應(yīng)用，特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域 技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。本發(fā)明的制備方法及應(yīng)用已 經(jīng)通過較佳的實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì) 本文制備方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0046] 本發(fā)明提供的一種多肽、其應(yīng)用及包含該多肽的藥物中所用到的試劑和原料均可 由市場(chǎng)購得。
[0047] 為了使本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合實(shí)施 例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：
[0048]實(shí)施例1多肽序列的確定
[0049] 重組HA-2蛋白的獲得：
[0050]試劑：CDC(疾病預(yù)防控制中心，centersfordiseasecontrolandprevention) 液體培養(yǎng)基的配置：取胰蛋白胨15g、大豆蛋白胨5g、氯化鈉5g、酵母提取物5g、L-半胱氨 酸400mg，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，121°C高壓滅菌15分鐘，冷至45°C-50°C時(shí)加入無 菌氯化血紅素0. 005g和無菌維生素&0. 01g混勻，2°C-8°C冰箱或冷庫貯存。
[0051] (1)細(xì)菌培養(yǎng)及基因組的提?。?br>[0052] 接種來源于北京口腔醫(yī)學(xué)研究所保存的牙齦卟啉單胞菌P.gATCC33277菌株 于CDC液體培養(yǎng)基中，37°C厭氧培養(yǎng)48h，離心收菌，用細(xì)菌基因組提取試劑盒Wizard? GenomicDNAPurificationKit提取基因組DNA，即得牙齦卟啉單胞菌的基因組DNA， 于-20°C保存。
[0053] (2)重組表達(dá)載體的構(gòu)建：
[0054] 根據(jù)GenBank中P.g蛋白酶RGP-1基因序列U15282設(shè)計(jì)合成特異引物：P1 :具有 如SEQIDN0:2所示的核苷酸序列；P2:具有如SEQIDN0:3所示的核苷酸序列。以P1、 P2為引物、步驟（1)獲得的牙齦卟啉單胞菌基因組DNA為模板、2XpfuPCRMasterMix和 水制備PCR反應(yīng)體系。PCR反應(yīng)體系為：（總反應(yīng)體積為50yL)、DNA模板0. 6yL(濃度 為 5pmol/iiL)、引物P15iiL、引物P25iiL、2XpfuPCRMasterMix25iiL、ddH2015iiL。 PCR擴(kuò)增條件為：92°C預(yù)變性2min;94°C變性40s、55°C退火40s、72°C延伸50s、30個(gè)循環(huán)；