[0031] 在另一實(shí)施方式中，該規(guī)程包括三個(gè)介質(zhì)組合，如下：
[0032] (i)StemPro MSC SFM(invitrogen)；
[0033] (ii)DMEM/F12、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、BMP-7、T3、地塞米松、羅格列酮和IBMX;以及
[0034] (i i i) DMEM/F12、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、T3、地塞米松和羅格列酮。
[0035] 在所有的介質(zhì)中，抗生素和/或抗真菌劑能夠被用于防止感染。例如，能夠使用 1%青霉素/鏈霉素。
[0036] 在第三方面，本發(fā)明提供一種分化的BAT細(xì)胞，其是通過(guò)根據(jù)本發(fā)明第二方面的 方法所衍生的。在實(shí)施方式中，BAT細(xì)胞可以是根據(jù)本發(fā)明第一方面的BAT細(xì)胞。
[0037] 在第四實(shí)施方式中，提供根據(jù)第一實(shí)施方式的分化的BAT細(xì)胞，用于治療患者，其 中所述患者患有特征在于過(guò)度脂肪組織積累的疾病，其中將所述細(xì)胞植入所述患者。
[0038]在第五實(shí)施方式中，提供一種用于治療患者的方法，所述患者患有特征在于過(guò)度 脂肪組織積累的疾病，方法包括將根據(jù)第一實(shí)施方式的一個(gè)或更多細(xì)胞植入需要所述治療 的患者中。
【附圖說(shuō)明】
[0039] 圖1分化17天的脂肪來(lái)源干細(xì)胞（Lonza)中UCP-1和PRDM16表達(dá)的實(shí)施例。A) 亮視野，b)用抗PDMR16抗體（綠）R&D 1 :20染色；c)抗UCP1抗體（紅），SantaCruz ;1 : 100 ;d)合并 TORM16 (綠）、UCP-1 (紅）和 Hoescht (藍(lán)）。X 20 的放大率。
[0040] 圖2 :分化17天的脂肪來(lái)源干細(xì)胞（Lonza)中UCP-1和PRDM16表達(dá)的第二實(shí)施 例。A)亮視野，b)用抗PDMR16抗體（綠）R&D 1 :20染色；c)抗UCP1抗體（紅），SantaCruz ; 1 :100 ;d)合并roRM16(綠）、UCP-1(紅）和 Hoescht (藍(lán)）。X20 的放大率。
[0041] 圖3 :分化17天的脂肪來(lái)源干細(xì)胞（Lonza)中UCP-1和細(xì)胞色素C氧化酶表達(dá)的 實(shí)施例。A)亮視野，b)用抗UCP-1抗體（綠）；SantaCruz ;1 :100染色；c)抗Cyt C抗體 (紅），Invitrogen ;1 :100)。X 10 的放大率。
[0042] 圖4 :分化17天的脂肪來(lái)源干細(xì)胞（Invitrogen)中基因表達(dá)的qPCR分析。ADSC 和分化的BAT細(xì)胞中的表達(dá)水平是相對(duì)于白色脂肪組織中的表達(dá)，將白色脂肪組織中針對(duì) 每個(gè)基因的表達(dá)被設(shè)定為1。
[0043] 圖5 :通過(guò)實(shí)施例2、3和4的規(guī)程所獲得的細(xì)胞的UCP1蛋白表達(dá)的Western印跡 分析。
[0044] 圖6 :圖表表示按照實(shí)施例2、3和4所述所衍生的BAT細(xì)胞中的qPCR基因表達(dá)分 析。
[0045] 圖7 :按照實(shí)施例2、3和4所述所衍生的BAT細(xì)胞中的qPCR UCP1基因表達(dá)分析， 經(jīng)過(guò)腎上腺素信號(hào)級(jí)聯(lián)的第二信使cAMP處理。腎上腺素激活（兒茶酚胺）增加BAT活性。 腎上腺素激動(dòng)劑或第二信使（cAMP)強(qiáng)效激活UCP1表達(dá)。
[0046]圖 8 :用 XF Cell Mito Stress 測(cè)試試劑盒（Seahorse Bioscience)測(cè)量耗氧分 析，這表明與采用已發(fā)表的WAT規(guī)程所分化的細(xì)胞相比，采用BAT規(guī)程所分化的細(xì)胞表現(xiàn)出 更高的呼吸能力。
【具體實(shí)施方式】
[0047] 除非另有指明，本發(fā)明采用分子生物學(xué)、微生物學(xué)和重組DNA的常規(guī)技術(shù)，這屬于 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力之內(nèi)。這種技術(shù)在文獻(xiàn)中有解釋。參見，例如J. Sambrook，E. F. Fritsch,和 T. Maniatis, 1989,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第二 版，Books 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press ;Ausubel，F(xiàn).M?等人（1995 和定期的增干ll ;Current Protocols in Molecular Biology, ch. 9, 13 和 16, John Wiley&Sons，New York, N.Y.) ;B. Roe, J. Crabtree 和 A. Kahn, 1996, DNA Isolation and Sequencing:Essential Techniques,John ffiley&Sons ；M.J. Gait (編),1984, Oligo nucleotide Synthesis:A Practical Approach, Irl Press ； 以及 D. M. J. Lilley 和 J. E. Dahlberg, 1992, Methods of Enzymology:DNA Structure Part A:Synthesis and Physical Analysis of DNA Methods in Enzymology, Academic Press。
[0048] 術(shù)語(yǔ)
[0049] 分化的。根據(jù)本發(fā)明分化的組織或細(xì)胞是一種源自單能、多能（multipotent)、多 潛能（pluripotent)或全能細(xì)胞成為明確組織類型細(xì)胞的細(xì)胞，在本發(fā)明的情況下是褐色 脂肪組織或BAT。
[0050] BAT。褐色脂肪組織是具有褐色脂肪優(yōu)選人褐色脂肪特征的組織，如此處所述 褐色脂肪相關(guān)基因表達(dá)譜所代表的，或者例如Svensson等人Int J Mol Med. 2011 Feb; 27 (2) : 227-32中代表的，并且其具有褐色脂肪的能量利用譜。BAT通常以高于白色脂肪組 織和ADSC BAT前體細(xì)胞的水平表達(dá)UCP1基因。BAT可能是經(jīng)典的或白棕色（米色）譜系。 經(jīng)典譜系源自表達(dá)Myf5的細(xì)胞，其是肌樣譜系，而白棕色或米色譜系源自WAT中的細(xì)胞。在 實(shí)施方式中，本發(fā)明的BAT細(xì)胞是白棕色/米色譜系。
[0051] WAT。白色脂肪組織是具有成體白色脂肪特征的組織。優(yōu)選是人類WAT。
[0052] 細(xì)胞。如此處所指，細(xì)胞被定義為能夠獨(dú)立發(fā)揮作用的有機(jī)體最小結(jié)構(gòu)單元；或者 是單細(xì)胞有機(jī)體，其由一個(gè)或更多的核、細(xì)胞質(zhì)和各種細(xì)胞器組成，核、細(xì)胞質(zhì)和各種細(xì)胞 器都被半透的細(xì)胞膜或細(xì)胞壁所包圍。
[0053] 根據(jù)本發(fā)明的BAT細(xì)胞所來(lái)源的起始細(xì)胞源自成體人干細(xì)胞或祖細(xì)胞，優(yōu)選源自 脂肪組織的干細(xì)胞或祖細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，細(xì)胞未進(jìn)行遺傳操作。在一個(gè) 實(shí)施方式中，它們是間充質(zhì)干細(xì)胞。干細(xì)胞如下詳細(xì)定義，并且其是能夠產(chǎn)生一種以上的分 化細(xì)胞類型的全能、多潛能或多能細(xì)胞。干細(xì)胞可體外分化而產(chǎn)生分化的細(xì)胞，其本身可以 是多能的或者是分化終末的細(xì)胞。體外分化的細(xì)胞是通過(guò)將干細(xì)胞暴露于一種或更多促進(jìn) 細(xì)胞分化的試劑而人工產(chǎn)生的細(xì)胞。
[0054] 成體。在本發(fā)明的上下文中，胚胎、新生兒和新生期后（post-neonatal)的組織之 間顯示出差異。新生期后的組織被稱為成體。例如，新生期后是指出生1個(gè)月后的（人類） 嬰兒。
[0055] 轉(zhuǎn)基因。如此處所指，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞是已經(jīng)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化有外源基因的細(xì)胞。
[0056] 全能。全能細(xì)胞是具有分化為有機(jī)體和胚外組織中發(fā)現(xiàn)的任何類型體細(xì)胞或生殖 細(xì)胞潛力的細(xì)胞。因此，通過(guò)一些手段可以從全能細(xì)胞衍生任何所需的細(xì)胞。
[0057] 多潛能。多潛能細(xì)胞是能夠分化成發(fā)育中的胚胎和成體有機(jī)體中所有細(xì)胞類型， 但不能分化為胚外組織的細(xì)胞。
[0058] 體的（somatic)。如此處所用，術(shù)語(yǔ)"體細(xì)胞"具有和本領(lǐng)域所理解的相同含義，即 形成有機(jī)體身體的任何細(xì)胞，而非種系細(xì)胞。哺乳動(dòng)物中，種系細(xì)胞（也稱為配子）是精子 和卵子，兩者在受精過(guò)程中融合以產(chǎn)生稱為合子的細(xì)胞，合子發(fā)育成整個(gè)哺乳動(dòng)物胚胎。
[0059] 培養(yǎng)介質(zhì)。在特定試劑的存在下，通過(guò)在培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)脂肪來(lái)源干細(xì)胞能夠衍 生根據(jù)本發(fā)明的BAT細(xì)胞。所述介質(zhì)可以是用于細(xì)胞的擴(kuò)增和/或傳代的培養(yǎng)介質(zhì)。在 某些情況下，培養(yǎng)介質(zhì)的組成是未知的，因?yàn)槠浒ǔＪ俏粗M成的血清。然而，在優(yōu)選 的實(shí)施方式中，培養(yǎng)介質(zhì)的各組分就其量或濃度方面而言是已知的。在一個(gè)實(shí)施方式中，培 養(yǎng)介質(zhì)可以是適于培養(yǎng)干細(xì)胞的無(wú)血清介質(zhì)，例如SlemPro此MSCSFMdnvitrogen)或 DMEM/F12。
[0060] 脂肪來(lái)源干細(xì)胞（ADSC)。如此處所稱，脂肪來(lái)源干細(xì)胞或ADSC是源自脂肪組織 的干細(xì)胞。這樣的細(xì)胞包括脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（adMSC)，以及通常來(lái)說(shuō)脂肪來(lái)源的 其它多能細(xì)胞。ADSC是從Lonza(目錄號(hào)PT-5006)和Invitrogen(StemPro ADSC試劑盒） 可商購(gòu)獲得。adMSC可從PromoCell(目錄號(hào)C-12978)獲得。例如如此處所述，ADSC可分 離自WAT。
[0061] 成體干細(xì)胞。如此處所定義的，源自成體的任何干細(xì)胞。優(yōu)選地，成體干細(xì)胞是 ADSC〇
[0062] 試劑。術(shù)語(yǔ)"試劑"指的是被添加（例如外源添加或補(bǔ)充）到包含細(xì)胞如adMSC的 介質(zhì)中的實(shí)體。試劑通常不存在于細(xì)胞或包含細(xì)胞的介質(zhì)中。試劑可以是單一試劑或試劑 的組合-如兩種或更多不同試劑的組合。
[0063] 本公開提供一種用于從成體細(xì)胞衍生BAT細(xì)胞的方法，以及能夠通過(guò)這種方法獲 得的BAT細(xì)胞。本發(fā)明的BAT細(xì)胞具有特定的特征，所述特征在此處所述的本申請(qǐng)中是有 利的。這些方法包括促進(jìn)干細(xì)胞或祖細(xì)胞分化為BAT細(xì)胞譜系。更具體的，本公開基于，至 少部分基于這樣一種發(fā)現(xiàn)，即采用限定的條件來(lái)自WAT的干細(xì)胞或祖細(xì)胞能夠分化以產(chǎn)生 BAT〇
[0064] 細(xì)朐
[0065] 干細(xì)胞
[0066] 在 Stem Cells:Scientific Progress and Future Research D