mplantol 2011，4(4):371_382;Seibel， Clin Biochem Rev 2005， 26:97-122 ；ffatts, Clin Chem 1999,45(8)B:1359-1368 ；Christenson, Clin Biochem 1997,30 (8):573-593)。
[0069] 與破骨細胞和/或成骨細胞的活性相關(guān)的標(biāo)志物或其組合，或其比率不特別受限 并且可以是TRAP、和/或0PG、和/或CatK、和/或RANK、和/或RANKL、和/或骨鈣蛋白、 和 / 或 IL-6、和 / 或 DKK-1、和 / 或 MMP-8、和 / 或 MMP-2、和 / 或 TIMP-1、和 / 或 tPA、和 / 或PAI-2、和/或來自組織蛋白酶家族的其它標(biāo)志物、和/或骨涎蛋白（BSP)、和/或堿性磷 酸酶（ALP)和/或來自TGF-P超家族的標(biāo)志物如骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP)、和/或巨噬細胞 集落刺激因子（M-CSF)、和/或硬化蛋白（sclerostin) (Sost(骨硬化（Sclerosteosis)基 因）的蛋白產(chǎn)物）、和/或頭蛋白（Noggin)或其組合中的一種或多種。優(yōu)選的是那些標(biāo)志 物或標(biāo)志物的比率，其提供那些標(biāo)志物的表達水平或標(biāo)志物的比率和骨損失率之間的線性 關(guān)系，如TRAP、和/或0PG、和/或CatK和/或骨鈣蛋白、和/或TRAP/0C、和/或Catk/0C。 備選地，優(yōu)選的是那些標(biāo)志物或標(biāo)志物的比率，其提供那些標(biāo)志物的表達水平或標(biāo)志物的 比率和骨損失率之間二次方、和/或三次方關(guān)系、和/或四次方關(guān)系、和/或齊次多項式關(guān) 系、和/或指數(shù)關(guān)系、和/或?qū)?shù)關(guān)系。
[0070] 本發(fā)明的標(biāo)志物可以通過以下登陸號來識別：
[0071] 白細胞介素-1 0 (IL-lb) :NM_000576. 2
[0072] 白細胞介素-6 (IL-6) :NM_000600. 3
[0073] 基質(zhì)金屬蛋白酶-8(MMP8) :NM_002424. 2
[0074] 抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP) :NM_001611. 3
[0075] 組織蛋白酶 K :NM_000396
[0076] 骨保護素（0PG) :NM_002546
[0077] NF-kB 配體的受體激活物（RANKL) :NM_003701. 3
[0078] 白細胞介素-8 (IL8) :NM_000584. 3
[0079] 人 dickkopf 1 同系物（爪蟾（Xenopus laevis)) (DKK1) :NM_012242. 2
[0080] 基質(zhì)金屬蛋白酶的組織抑制劑OlMP-1) :NM_003254. 2
[0081] 組織纖溶酶原激活物（TPA) :NM_000930. 3
[0082] 2 型纖溶酶原激活物抑制劑（serpinB2) (PAI-2) :NM_001143818. 1
[0083] 骨鈣蛋白（PMF1 或 0C) :NM_001199654. 1
[0084] 優(yōu)選地，測量兩種、三種、四種、五種、六種或更多種標(biāo)志物的表達水平或其比率以 獲得關(guān)于骨損失率的更準(zhǔn)確的信息。
[0085] Dickkopf-相關(guān)蛋白-1 (DKK-1)是Wnt信號通路拮抗劑，并且其減少成骨細胞分 化。已經(jīng)在患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Liu等人，Chin Med J (Engl). 2010,123(11) : 1407-12)和 銀肩病關(guān)節(jié)炎（Dalbeth等人，Arthritis Res Ther. 2010,12(4) :R164)的受試者中測量到 升高的全身DKK-1水平。
[0086] 抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP)由破骨細胞皺褶緣分泌，將在脫磷酸化之前用作破 骨細胞的錨定物的骨橋蛋白脫磷酸化，并且允許破骨細胞迀移和進一步的骨吸收（Minkin， Calcif Tissue Int，1982,34:285-290)。
[0087] 用于量化活體外樣品中與破骨細胞和/或成骨細胞的活性相關(guān)的一種以上標(biāo)志 物的表達水平或其比率的方法不特別受限并且可以選自量化核酸如mRNA的方法和/或量 化蛋白的方法如RT-qPCR(下文中稱為qPCR)，和/或RNA印跡，和/或免疫測定，和/或 ELISA，和/或放射性免疫測定，和/或磁免疫測定，和/或熒光免疫測定，和/或免疫沉淀， 和/或表面等離子共振，和/或蛋白印跡，和/或免疫組化或其任意組合。優(yōu)選的量化方法 是qPCR。實驗過程通常包括樣品處理步驟（即提取）。
[0088] 一種以上標(biāo)志物的表達水平或其比率的量化可以通過一種以上參比基因 (reference gene)來歸一化。歸一化包括報告目的基因的表達水平與參比基因的表達水 平之比。參比基因可以使用可免費獲得的N〇rmFind er17程序來選擇。優(yōu)選地，參比基因是 這樣的基因，其被穩(wěn)定表達并且其豐度顯示與樣品總量（在qPCR的情況下，與mRNA總量） 的強的相關(guān)性。更優(yōu)選地，參比基因選自GAPDH、YWHAZ、UBC和/或HPRT-1，其中YWHAZ和 UBC是優(yōu)選的。
[0089] 本發(fā)明的參比基因可以通過以下登陸號識別：
[0090] YWHAZ(參比基因）：NM_001135702. 1
[0091] UBC(參比基因）：NM_001135702. 1
[0092] 在本申請的語境中，標(biāo)志物的表達水平可以是指（i)濃度、或（ii)對標(biāo)志物特異 的檢測信號、或（iii)通過數(shù)學(xué)變換與（i)和/或（ii)相關(guān)的值。
[0093] 在qPCR的情況下，優(yōu)選通過以下方式計算相對基因表達水平將A A Cq方法 (Livak等人，Methods 2001,25:402-408)用于各個測定，并且通過參比基因來歸一化各個 基因的基因表達。參比基因可以例如使用可以免費獲得的NormFinder程序（www. mdl.dk/ publicationsnormfinder. htm. 2010年10月）來選擇。然后，各受試者的歸一化的基因表 達可以在對數(shù)變換后使用以下表達式來計算：歸一化的基因g的表達=(Cq (n)-Cq (g))，其 中Cq(g)是基因g的擴增循環(huán)數(shù)，并且Cq(n)是取自受試者的樣品的歸一化因子（所選的 一個或多個參比基因的平均擴增循環(huán)數(shù)）。
[0094] 在qPCR的情況下，與破骨細胞和/或成骨細胞的活性相關(guān)的一種以上標(biāo)志物的表 達水平或其比率也可以通過量化相應(yīng)的擴增子來量化。擴增子可以被定義為作為天然或人 工擴增或復(fù)制事件的來源和/或產(chǎn)物的一段DNA或RNA。在本發(fā)明的情況中，用于量化與破 骨細胞和/或成骨細胞或參比基因的活性相關(guān)的一種以上標(biāo)志物的表達水平或其比率的 優(yōu)選擴增子如下：
[0095] 白細胞介素-10 (IL-lb) :SEQ ID NO 1
[0096] 白細胞介素-6(IL-6) :SEQ ID NO 2
[0097] 基質(zhì)金屬蛋白酶-8(MMP8SEQ ID NO 3
[0098] 抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP) :SEQ ID NO 4
[0099] 組織蛋白酶 K :SEQ ID NO 5
[0100] 骨保護素（0PG) :SEQ ID NO 6
[0101] NF-kB 配體的受體激活物（RANKL) :SEQ ID NO 7
[0102] 白細胞介素-8(IL8) :SEQ ID NO 8
[0103] 人 dickkopf 1 同系物（爪蟾）（DKK1) :SEQ ID NO 9
[0104] 基質(zhì)金屬蛋白酶的組織抑制劑OlMP-l) :SEQ ID NO 10
[0105] 組織纖溶酶原激活物（TPA) :SEQ ID NO 11
[0106] 2 型纖溶酶原激活物抑制劑（serpinB2) (PAI-2) :SEQ ID NO 12
[0107] 骨鈣蛋白（PMF1 或 0C) :SEQ ID NO 13
[0108] YWHAZ(參比基因）：SEQ ID NO 14
[0109] UBC(參比基因）：SEQ ID NO 15
[0110] 在本發(fā)明的方法中，一個以上校準(zhǔn)曲線可以在骨損失率和標(biāo)志物的表達水平或標(biāo) 志物的比率之間提供線性關(guān)系和/或三次方關(guān)系、和/或二次方關(guān)系、和/或四次方關(guān)系、 和/或齊次多項式關(guān)系、和/或指數(shù)關(guān)系、和/或?qū)?shù)關(guān)系。優(yōu)選地，校準(zhǔn)曲線可以在骨損 失率和標(biāo)志物的表達水平/標(biāo)志物的比率之間提供線性關(guān)系。校準(zhǔn)曲線應(yīng)該使用與用于要 插入其中的活體外樣品的相同的一個或多個標(biāo)志物和/或其比率以及相同的量化技術(shù)來 確定。
[0111] 本發(fā)明的方法可以用于指示存在或不存在影響骨的病癥，優(yōu)選影響植入物和/或 牙齒周圍的骨的病癥。更優(yōu)選地，所述病癥是植入物周疾病，和/或牙周病、和/或關(guān)節(jié) 炎（arthritis)、和/或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis)、和/或銀肩病關(guān)節(jié)炎 (psoriatic arthritis)、和/或骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis)和/或其組合，其中優(yōu)選的是 植入物周疾?。╬eri-implant disease) 〇
[0112] 植入物周疾病（在存在骨退化的情況下也稱為植入物周炎）被定義為在功能 上影響植入物周圍的組織的炎癥過程，其導(dǎo)致支撐骨的損失（Becker等人，Int J Oral Maxillofac Implants 1990,5:31-38)。粘膜炎常涉及軟組織炎癥、腫脹、探查時出血，并且 在一些情況下涉及化膿，但無骨損失跡象。
[0113] 本發(fā)明的方法也可以用于評價植入物的預(yù)后。
[0114] 本發(fā)明人研究了與破骨細胞和/或成骨細胞的活性相關(guān)的某些標(biāo)志物的表達水 平或兩種以上標(biāo)志物之間的比率或其組合與骨損失率之間的相關(guān)性，使得作為影響骨的病 癥的診斷因素的用途成為可能。因此，通過本發(fā)明的方法，個體患者可以被診斷為患有或未 患有影響骨的病癥，優(yōu)選影響植入物和/或牙齒周圍的骨的病癥。
[0115] 本發(fā)明人已經(jīng)證明，從經(jīng)歷植入物治療的患者獲得的植入物周溝液中與破骨細胞 和/或成骨細胞的活性相關(guān)的某些標(biāo)志物的表達水平或兩種以上標(biāo)志物之間的比率與骨 損失率相關(guān)。該方法提供骨損失率的快速確定，其對于診斷植入物周疾病和選擇合適的治 療是必要的。
[0116] 用本發(fā)明的方法，可能檢測由差的假體結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的過載所導(dǎo)致的骨損失率，由于 在窄的牙槽嵴中放置過大的植入物導(dǎo)致的骨損失率，以及植入物放置導(dǎo)致過薄的骨斷面的 其它情況。因此，臨床醫(yī)生將提供合適的治療。因此沒有必要將受試者暴露于輻射，并且臨 床醫(yī)生不必需等待直到骨退化進展到通過放射照片評價的可測量的水平以選擇治療并確 定患者的預(yù)后。
[0117] 測量其骨損失率的活體外樣品可以獲自可能患有或可能未患有影響骨的病癥 (優(yōu)選影響植入物和/或牙齒周圍的骨的病癥）的患者。優(yōu)選的患者是具有一種以上植入 物，更優(yōu)選骨錨定植入物的患者。所述植入物可以是牙植入物、和/或髖植入物、和/或膝 蓋植入物。
[0118] 優(yōu)選地，患者患有和/或可能患有影響植入物支撐組織的病癥，和/或影響支持植 入物的骨的病癥，和/或影響牙齒周圍組織的病癥，如植入物周炎，和/或粘膜炎，和/或牙 周炎，和/或牙齦炎或其組合。更優(yōu)選地，所述患者患有和/或可能患有植入物