.92 (s，3H)，2.79 (s，3H)，4.04(brs，1H)，4.60 (s，1H)，4.84 (d，/= 3.6 Hz， 1H)，4.94 (d，/= 3.6Hz， 1H)，6.56 (d，/= 5.2Hz， 1H)，6.97 (m， 1H)， 7.06-7.10 (m，3H)，7.21 (d，/= 4.8Hz，1H)，7.23-7.35 (m，4H);13CNMR(CDC13， 100MHz) 5(major+minor): 22.7，26.1，62.7，68.4，73.2，108.5，122.6，123.4， 125. 4，128. 7，128. 9，129. 1，129. 7，133. 9，144. 1，169. 2，170. 0，173. 2;HRMS (ESI)m/z:Calcd.ForC20H20N2Na05 [M+Na] + : 391.1270,Found: 391.1276. 本實施例制備化合物19:黃色固體，93%yield，91:9dr;屮NMR(CDC13，400MHz)8(major+minor) : 1.97 (s，3. 3H,major+minor), 2. 22 (s，3. 3H,major +minor), 3.76 (d,J-10.8Hz, 1H), 3.99(brs, 1H,major), 4.62 (s, 1. 1H, major+minor), 4. 86-4. 95 (m， 3. 1H,major+minor), 5. 06-5. 15 (m, 0. 2H, minor), 6. 26 (d，J= 5. 2Hz, 1H，major), 6. 43 (d，J= 5. 2Hz, 0. 1H,minor), 6. 51-6. 70 (m，0. 4H,minor+minor)，6. 87-6. 90 (m，1. 1H,major+minor), 7. 02 (s， 1H，major+minor)， 7. 08 (s， 1H，major+minor)，7. 13 (d，J- 4：. 8Hz, 2. 2H,major+minor), 7. 18-7. 21 (m，L1H，major+minor), 7. 25-7. 41 (m，8. 3H, major+minor), 7. 52-7. 54 (m，0. 1H,minor), 7. 71-7. 73 (m，0. 1H,minor) ;13CNMR (CDC13，100MHz) 5 (major+minor): 21.2，22.8，43.8，62.9，68.4，73.6，109.6， 124.1，125.4，127.2，127.3，127.4，128.7，128.8，128.9，129.0，129.1，129.2， 130.0，131.0，132.3，134.1，135.6，140.8，169.1，170.0，173.3;HRMS(ESI)m/z: Calcd.ForC27H26N2Na05 [M+Na] + : 481.1739,Found: 481.1739. 本實施例制備化合物20:黃色固體，63%yield，80:20dr;屮NMR(CDC13，400MHz)8(major+minor) : 1.64(brs，L3H，major+minor), 3.92-3.97 (m，2H， major), 4.22-4.24 (m, 0. 3H,minor), 4.67 (s, 1H,major), 4.85-4.93 (m, 3. 3H, major+minor), 5. 15-5. 21 (m，0. 33H,major+minor), 6. 42 (d，J-^Hz, 1H， major), 6.86-6.89 (m, 1H,major), 7.08-7.10 (m, 2.6H,major+minor), 7.13 (d, y= 3. 6Hz, 1H，major), 7. 16-7. 18 (m，L3H，major+minor)，7. 24-7. 33 (m，8. 5H, major+minor), 7.81-7.90 (m, 3H,major), 8.13 (d,y= 3.6Hz, 2H,major);13C NMR(CDC13，100MHz) 5 (major+minor): 44.0，63.0，68.7，73.4，109.9，123.0， 123.2，123.7，124.9，127.3，127.5，128.5，128.8，129.1，129.3，129.9，133.8， 135.2，138.4，143.4，149.7，163.7，169.8，172.9;HRMS(ESI)m/z:Calcd.For C31H25N3Na07 [M+Na] + : 574.1590，F(xiàn)ound: 574. 1594. 本實施例制備化合物21:黃色固體，97%yield，67:33dr;屮NMR(CDC13，400MHz)8(major+minor) : 1. 80(brs，1H，major), 3. 87(brs，L5H，major+minor)， 4.73-4.80 (m, 1. 5H,major+minor), 4.90 (d,J- &Hz, 1H,major), 4.95 (d,J-6Hz, 1H,major), 5.03-5.28 (m, 3. 7H,major+minor), 6.62 (d,J- 4：Hz, 0.9H, major), 6.66 (d,J- &Hz, 0. 5H,minor) ,6,73 (d,J- &Hz, 0. 5H,minor), 6.82 (t，^/= 3.8Hz，0.5H，minor)，6.92-6.95 (m，1H，major)，7.00-7.04 (m，3. 2H， major+minor)，7.07-7. 17 (m，7. 3H,major+minor)，7. 20 (t，J- 3.6Hz,L5H， major+minor),7. 24-7. 38 (m, 13. 4H,major+minor),7. 42 (d,J- 2. \Hz, 2H,major),7. 87-7. 90 (m, 1. 5H,major+minor),8. 38-8. 44 (m, 1. 5H,major+minor) ;13C NMR(CDC13, 100MHz)8(major+minor) : 62. 8, 67. 7, 68. 6, 73. 2, 73. 6, 109. 5, 109.6, 115.9, 116.0, 123.1, 123.2, 123.7, 124.6, 124.7, 125.2, 126.5, 126.9, 127. 9, 128. 6, 128. 7, 128. 8, 128. 9, 130. 0, 132. 2, 132. 3, 133. 7, 133. 8, 133. 9, 134.3, 134.4, 144.6, 160.2, 161.4, 161.9, 170.1, 170.6, 172.6;HRMS(ESI)m/z: Calcd.ForC30H24FN205 [M+H] + : 511.1669,Found: 511.1667. 本發(fā)明的式（1)化合物具有重要的生物活性，體外對人肺癌細(xì)胞（A549)以及人白血病 細(xì)胞（K562)共二株腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性試驗表明：此類式（1)所示的結(jié)構(gòu)的紫杉醇側(cè)鏈苯 基異絲氨酸衍生物對腫瘤細(xì)胞生長具有抑制作用，有可能發(fā)展成為新的防治腫瘤藥物或防 治腫瘤藥物中間體。
[0017] 藥理實施例1:化合物2、3、14或17對A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性 A549 (人非小細(xì)胞肺癌肺癌)用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/mL的青霉素和100U/mL鏈霉素。細(xì)胞以每孔4000個細(xì)胞的濃度加入到96孔中，在37°C含 5%C02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
[0018] 細(xì)胞存活率的測定用改良MTT法。細(xì)胞經(jīng)過24小時的孵育后，分別將新配的化 合物2、3、14或17的二甲基亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最終濃度分 別為 6.25ymol/L, 12.5ymol/L, 25ymol/L, 50ymol/L和 100ymol/L。48 小時 后，每孔加入10yLMTT(5mg/mL)的磷酸鹽緩沖液，再繼續(xù)在37°C培養(yǎng)4小時后，離 心5分鐘除去未轉(zhuǎn)化的MTT，每孔中加入150yL二甲基亞砜。以溶解還原的MTT晶體甲 臜（formazan)，用酶標(biāo)儀在490nm波長測定0D值。其中化合物2、3、14或17對A549細(xì)胞 半抑制濃度IC5。由spss軟件（19版本）分析得到?；衔?對PC-3腫瘤細(xì)胞的1C5。為 79. 8ymol/L;化合物3對A549腫瘤細(xì)胞的1C5。為70. 9ymol/L;化合物14對A549腫瘤 細(xì)胞的IC5。為43. 5ymol/L;化合物17對A549腫瘤細(xì)胞的1C5。為87. 2ymol/L;而陽性 對照順鉑對A549腫瘤細(xì)胞的IC5。為28. 4ymol/L。
[0019] 實驗結(jié)論:A549細(xì)胞是測試化合物對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評價指 標(biāo)。本實驗表明此類式（1)所示的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物對A549細(xì)胞具有較強 的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成新的具有抗腫瘤作用的藥物。
[0020] 藥理實施例2 :化合物6、7、8、12、14、17或21對1(562細(xì)胞的細(xì)胞毒性 K562(人慢性髓系白血病細(xì)胞)用RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清， 100U/mL的青霉素和100U/mL鏈霉素。細(xì)胞以每孔5000個細(xì)胞的濃度加入到96孔中，在 37°C含5%C02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
[0021 ] 細(xì)胞存活率的測定用改良MTT法。具體方法如藥理實施例1?；衔?對K562腫 瘤細(xì)胞的IC5。為82. 1ymol/L;化合物7對K562腫瘤細(xì)胞的1C5。為72. 3ymol/L;化合 物8對K562腫瘤細(xì)胞的1C5。為62. 5ymol/L;化合物12對K562腫瘤細(xì)胞的1C5。為59. 4 ymol/L;化合物14對K562腫瘤細(xì)胞的1C5。為25. 5ymol/L;化合物17對K562腫瘤細(xì)胞 的IC5。為73. 4ymol/L;化合物21對K562腫瘤細(xì)胞的1C5。為67. 8ymol/L;而陽性對照 順鉑對K562腫瘤細(xì)胞的IC5。為20. 6ymol/L〇
[0022] 實驗結(jié)論：K562細(xì)胞是測試化合物對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評價指 標(biāo)。本實驗表明此類式（1)所示的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物對K562細(xì)胞具有較強 的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成新的具有抗腫瘤作用的藥物或中間體。
[0023]從以上藥理實施例中我們可以看出這些化合物對這二株腫瘤細(xì)胞都顯示有一定 的細(xì)胞毒性?？梢娺@些化合物具有開發(fā)成為抗腫瘤藥物或中間體的潛力，值得繼續(xù)深入研 究下去。
【主權(quán)項】
1. 一種紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物，其特征在于：該化合物具有如通式（I)所示 的結(jié)構(gòu)：式中，Rl為烷基；R2為烷基或芳基；R3為氫或烷基或芳基；R4為烷基。2. -種如權(quán)利要求1所述的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物的制備方法，其特征在 于：由相應(yīng)的3-酰胺取代氧化吲哚與乙醛酸酯在堿性催化劑條件下，在有機(jī)溶劑中進(jìn)行 Aldol反應(yīng)，獲得3-氨基-a-羥基-酯基-3-季碳氧化吲哚類化合物，該化合物可以作 為紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸新型衍生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物的制備方法，其特征在于： 所述的堿性催化劑為有機(jī)堿或無機(jī)堿，堿性催化劑的加入量為氧化吲哚摩爾量的1-100%。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物的制備方法，其特征在于： 所述的有機(jī)堿為DBU、DMAP、DABCO或Et3N;所述的無機(jī)堿為Na2CO3SNaOH。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物的制備方法，其特征在于： 所述的有機(jī)溶劑為乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、乙醚、四氫呋喃、苯、甲苯、二甲苯、三甲 苯、二氧六環(huán)、乙二醇二甲醚、異丙醚、氯仿、二氯甲烷或硝基苯。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物的制備方法，其特征在于： 相應(yīng)的3-酰胺取代氧化吲哚與乙醛酸酯的反應(yīng)溫度為25-100°C，反應(yīng)時間為1-48小時。7. -種如權(quán)利要求1所述的紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物在制備防治腫瘤疾病藥 物的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物及其制備方法及應(yīng)用，本發(fā)明相應(yīng)的3-酰胺取代氧化吲哚與乙醛酸酯在堿性催化劑條件下，在有機(jī)溶劑中進(jìn)行Aldol反應(yīng)，獲得3-氨基-<i>α</i>-羥基-<i>β</i>-酯基-3-季碳氧化吲哚類化合物，該化合物可以作為紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸新型衍生物，合成新型紫杉醇側(cè)鏈苯基異絲氨酸衍生物，該衍生物可以作為新型紫杉醇化合物合成的中間體，對藥物的篩選和制藥行業(yè)具有重要的應(yīng)用價值，本發(fā)明針對這些衍生物對二種腫瘤細(xì)胞株如人肺癌細(xì)胞（A549）以及人白血病細(xì)胞（K562）所進(jìn)行的腫瘤生長抑制活性篩選。
【IPC分類】A61P35/02, A61P35/00, C07D209/40
【公開號】CN105037243
【申請?zhí)枴緾N201510361885
【發(fā)明人】劉雄利, 楊俊 , 楊超, 黃俊飛, 陸毅, 周英, 俸婷婷, 余章彪
【申請人】貴州大學(xué)
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年6月28日