和反應體系完備，無需進行標記查找篩選、體系設計摸索、穩(wěn)定性檢驗等步驟，非常適合缺少分子理論基礎的育種機構使用。
[0035]試劑盒組分說明:
[0036]采用活動隔間式核酸反應管96孔板或單獨反應管。
[0037]隔間A中組分:上游引物I μ L(1yM)，下游引物I μ L(1yM)，H2O 1yL ；
[0038]隔間B 中組分:2XTaq MasterMix (康為世紀)10 μ L ;
[0039]灌裝后采用封口膜封口，-20 °C保存、運輸。
[0040]試劑盒使用說明:
[0041]使用時室溫下使液體組分充分溶化，溶化后揭去封口膜(蓋)。
[0042]每反應管內(nèi)加入1-2 μ g DNA (待檢樣品)。
[0043]用新的封口膜或石蠟油封口，單獨反應管揭去活動插片后重新蓋好。
[0044]按下列反應條件進行反應:
[0045]1.940C 3min ；
[0046]2.94°C 30s ；
[0047]3.51 °C 40s ；
[0048]4.72°C Imin 30s (2_4step，35 X cycle)；
[0049]5.72 °C 1min ；
[0050]6.4°C--。
[0051]【具體實施方式】二:本實施方式提供了一種便捷操作酶反應試劑盒。
[0052]便捷操作酶反應試劑盒采用活動隔間式核酸反應管，將酶和Buffer按一定比例分別加入兩個隔間中，研究人員只要將待反應的核酸按說明書加入管中進行反應即可。
[0053]以限制性內(nèi)切酶Taq I為例:
[0054]試劑盒組分說明:
[0055]采用活動隔間式核酸反應管96孔板或單獨反應管。
[0056]隔間A 中組分:TaqI I μ L，nuclease-free water 10 μ L ；
[0057]隔間B 中組分:10XBuffer TaqI 2 μ L, nuclease-free water 8 μ L ；
[0058]灌裝后采用封口膜封口，-20 0C保存、運輸。
[0059]試劑盒使用說明:
[0060]使用時室溫下使液體組分溶化，溶化后揭去封口膜(蓋)。
[0061]每反應管內(nèi)加入0.1-0.5 μ g DNA (待檢樣品)。
[0062]用新的封口膜或石蠟油封口，單獨反應管揭去“活動插片”后重新蓋好。
[0063]65°C下解育1-16小時。
[0064]【具體實施方式】三:本實施方式提供了一種分子標記作圖引物篩選便捷操作試劑合
ΙΤΓΤ.0
[0065]分子標記作圖引物篩選便捷操作試劑盒采用活動隔間式核酸反應管，將待篩選的引物和PCR預混液按一定比例分別添加到兩個隔間中，研究人員只需將父母本或群體DNA加入反應管，即可進行PCR篩選，對于特殊的引物需求，可以進行定制。
[0066]以番茄SSR標記作圖引物篩選便捷操作試劑盒為例:
[0067]選取覆蓋番茄12條染色體的已知SSR標記，制成針對父母本和F1進行篩選以及針對匕大量群體進行作圖的試劑盒，可根據(jù)需求設計反應管類型和引物添加布局。
[0068]試劑盒組分說明:
[0069]采用活動隔間式核酸反應管96孔板或單獨反應管。
[0070]隔間A中組分:上游引物I μ L(1yM)，下游引物I μ L(1yM)，H2O 1yL ；
[0071]隔間B 中組分:2XTaq MasterMix (康為世紀)10 μ L ;
[0072]灌裝后采用封口膜封口，_20°C保存、運輸。
[0073]試劑盒使用說明:
[0074]使用時室溫下使液體組分溶化，溶化后揭去封口膜(蓋)。
[0075]每反應管內(nèi)加入1-2 μ g DNA (待檢樣品)。
[0076]用新的封口膜或石蠟油封口，單獨反應管揭去活動插片后重新蓋好。
[0077]按下列反應條件進行反應:
[0078]1.940C 3min ；
[0079]2.94°C 30s ；
[0080]3.55°C或 Tm 40s;
[0081]4.72°C Imin (2_4step，35 X cycle)；
[0082]5.72 °C 1min ；
[0083]6.4°C--。
[0084]以上三種便捷操作試劑盒均在活動隔間式核酸反應管的應用基礎上設計，操作簡便，并且可以將人為加樣帶來的誤差降到最低。本反應管可應用于多種反應及包裝，并不局限于本文示例。
【主權項】
1.一種活動隔間式核酸反應管，其特征在于所述活動隔間式核酸反應管由核酸反應管和活動插片兩部分構成，其中:所述核酸反應管的管壁內(nèi)側設置有U型凹槽，活動插片插于U型凹槽內(nèi)，所述活動插片的頂端留有接頭，接頭根部設有折痕，折后接頭與管口平面平行。2.根據(jù)權利要求1所述的活動隔間式核酸反應管，其特征在于所述活動插片與核酸反應管的管體材質相同。3.根據(jù)權利要求1所述的活動隔間式核酸反應管，其特征在于所述活動插片的表面經(jīng)硅化處理。4.根據(jù)權利要求1所述的活動隔間式核酸反應管，其特征在于所述接頭長度為3mm。5.根據(jù)權利要求1所述的活動隔間式核酸反應管，其特征在于所述活動隔間式核酸反應管分為96孔板和單獨反應管兩種。6.權利要求1所述的活動隔間式核酸反應管在便捷操作試劑盒中的應用。7.根據(jù)權利要求6所述的活動隔間式核酸反應管在便捷操作試劑盒中的應用，其特征在于所述便捷操作試劑盒為大規(guī)模PCR分子標記鑒定便捷操作試劑盒、便捷操作酶反應試劑盒或分子標記作圖引物篩選便捷操作試劑盒。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種活動隔間式核酸反應管，所述活動隔間式核酸反應管由核酸反應管和活動插片兩部分構成，其中：所述核酸反應管的管壁內(nèi)側設置有U型凹槽，活動插片插于U型凹槽內(nèi)，所述活動插片在管體高度的基礎上留有接頭，接頭根部設有折痕，折后接頭與管口平面平行。本發(fā)明在傳統(tǒng)PCR反應管的基礎上，在管體內(nèi)部增加活動插片設計，該活動插片與管壁內(nèi)部U型凹槽結構吻合，使活動插片與管壁接縫處具有良好的密封性，保證活動插片兩側液體獨立貯存，不發(fā)生混合。
【IPC分類】C12M1/24
【公開號】CN105039145
【申請?zhí)枴緾N201510459007
【發(fā)明人】許向陽, 趙婷婷, 李景富, 楊歡歡, 姜景彬, 張賀, 陳秀玲
【申請人】東北農(nóng)業(yè)大學
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年7月30日