a +的需求。在石灰和氫氧化鈉處理結(jié)束后，添加3%雙 氧水（v/v )，50 °C保持2 h，取出65 °C烘干，用于酶解分析。
[0015] 表1試驗設(shè)計因素及編碼水平表
不同濃度石灰上清液的制備如下：每組處理風(fēng)干秸桿樣品重15. 0g，按照秸桿的重量 百分?jǐn)?shù)計，取5-15%石灰（w/w，石灰/秸桿)，溶于按照不同液固比9:1-13:1 (水：秸桿）所 取的水中，攪拌5 min，靜止10 min，取上清液。
[0016] 為了體現(xiàn)自變量和因變量的關(guān)系，采用二次多項方程進(jìn)行擬合，預(yù)測二次多項方 程形式如下： Y=P〇 + ^J+P2^2 + ^3^3 +P4^4 +P11^1 +P22^2 + ^ 33^3 +P44^4 + ^ 12^1^2 +x,+e23x2x,+e24x2x4 +e34x3x, 式中：/是化學(xué)處理秸桿酶解后預(yù)測還原糖含量（mg/g干物質(zhì)）；不，不，石，不是自 變量，分別對應(yīng)的反應(yīng)溫度、時間、石灰濃度、液固比；是截距；f2, 03, 是線 性系數(shù)；々n，々22,々33,々私是平方系數(shù)；bYiu14u24,b3眞交m。
[0017] L 3單一和復(fù)合化學(xué)處理秸桿 本試驗是在上述響應(yīng)面設(shè)計所得最佳處理條件基礎(chǔ)上進(jìn)行，處理條件為液固比13:1， 84 °C保持6 h。試驗設(shè)計分組如下： 1組：未處理猜桿； 2組：15% (w/w)石灰上清液處理猜桿； 3組：2% (w/w)氫氧化鈉處理猜桿； 4組：15% (w/w)石灰上清液+2% (w/w)氫氧化鈉處理猜桿； 5組：15% (w/w)石灰上清液+3%(v/v)雙氧水處理猜桿； 6組：2% (w/w)氫氧化鈉+3%(v/v)雙氧水處理猜桿； 7組：15% (w/w)石灰上清液+2% (w/w)氫氧化鈉+3%(v/v)雙氧水處理猜桿； 8組：3% (v/v)雙氧水處理猜桿。
[0018] 1. 4纖維素酶和木聚糖酶酶解處理 酶解處理是以5% (w/v)化學(xué)處理后秸桿加到蒸餾水中，加入纖維素酶32.3 FPU/g秸 桿和木聚糖酶550 U/g秸桿，用0.05M HCL或Ca(0H)2上清液調(diào)整至pH4.8,在50°C條件下 搖床（180 rpm)酶解48 h，酶解結(jié)束后100°C處理30 min以終止酶解反應(yīng)，酶解產(chǎn)物50°C 烘干，粉碎。
[0019] 1. 5康寧木霉發(fā)酵、及康寧木霉發(fā)酵和酶解聯(lián)合處理 取5. 0g化學(xué)處理后秸桿裝入250 mL帶棉塞的三角瓶中，加入10 mL康寧木霉 (CGMCC3. 4262 )孢子懸浮液（1 X 106 CFU/ml)，30 °C培養(yǎng)5 d.，發(fā)酵結(jié)束50 °C烘干，粉碎。
[0020] 發(fā)酵產(chǎn)物再進(jìn)行酶解，酶解處理同上述1. 4。試驗分組如下： I組：化學(xué)處理（Na0H+Ca(0H)2+H202)秸桿 II組：化學(xué)處理+康寧木霉發(fā)酵秸桿 III組：化學(xué)處理+酶解秸桿 IV組：化學(xué)處理+康寧木霉發(fā)酵+酶解聯(lián)合處理秸桿 1. 6秸桿中還原糖和組成成分的測定 纖維素、半纖維素和木質(zhì)素測定采用Van Soest方法；總還原糖測定采用3, 5-二硝基 水楊酸（DNS)方法。指標(biāo)換算公式如下： 7 = X XWJW2J 式中：丨表示相對于處理前秸桿中各指標(biāo)的含量；X表示處理秸桿中各指標(biāo)的含量； 表示處理后秸桿干物質(zhì)重量；A表示處理前秸桿干物質(zhì)重量。
[0021] 1.7秸桿電鏡樣品的制備 分別選取未處理秸桿、化學(xué)處理秸桿和化學(xué)處理+康寧木霉發(fā)酵+酶解聯(lián)合處理秸 桿樣品用2. 5%戊二醛溶液固定4h以上，0.1 mol/L磷酸緩沖液沖洗3次，30%、50%、70%、80%、90%、100%乙醇逐級脫水，每級脫水15min，然后用醋酸異戊酯置換2次，每 次10min。取出后置干燥籃迅速放入EMITECH K850臨界點干燥儀，干燥后取出，用導(dǎo)電 膠粘于樣品臺上，用HITACHI E - 1010型離子濺射儀器進(jìn)行真空噴金鍍膜，置于HITACHI S-3400NII型掃描電鏡下，在1000X和2000X放大倍率下觀察。
[0022] 1. 8數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析 試驗數(shù)據(jù)均以"平均值土標(biāo)準(zhǔn)差"（mean土SD)表示，結(jié)果用SPSS 20. 0統(tǒng)計軟件中 AN0VA過程進(jìn)行方差分析，并進(jìn)行Duncan多重比較，尸〈0. 05為差異顯著。
[0023] 2結(jié)果與討論 2. 1最佳處理條件響應(yīng)面分析 根據(jù)Design Expert 8. 0? 5軟件中Box - Behnken試驗設(shè)計，設(shè)計了 27個試驗點的響 應(yīng)面分析試驗，對試驗獲得預(yù)處理后還原糖含量進(jìn)行回歸，建立響應(yīng)面二次回歸模型，尋求 最優(yōu)響應(yīng)值的因素水平，試驗結(jié)果與回歸方程方差分析見表2和表3。
[0024] 表2Box-Behnken設(shè)計與結(jié)果
表3回歸方程系數(shù)的顯著性檢驗
Design-Expert 8.0.6對數(shù)據(jù)進(jìn)行多元二次回歸擬合，得出回歸模型方程及方差分析 結(jié)果，如下： 7= - 683. 09 + 9. 03 X7+ 24. 33 11. 20J3+62. 04I4~0.049X/+ 0. 050 0? 13不石一0? 24 不不一0? 24 Z/- 0? 92 不石一1. 30 不不一0? 27 Z/- 0? 23 ZA- 0? 82 Z/。
[0025] 從表3可以看出，上述模型尸<0.0001，表明該模型統(tǒng)計學(xué)上有意義。在顯著水平 (/<0?05)條件下，總還原糖回歸模型中溫度不（/;-0?0147)，時間不（/;-0?0227)，石灰濃度 石(/<0? 0001)，液固比Z//K0. 0001)，表明這些因素對響應(yīng)值有顯著影響；(K0. 0001)， 心(尸0.0003)表現(xiàn)顯著，表明在反應(yīng)時間和石灰濃度、反應(yīng)時間和液固比之間存在交互作 用。失擬項M直為0.147X). 005即方程模型失擬不顯著，說明方程的擬合度較好?；貧w模 型的決定系數(shù)為R2=〇. 9554X). 80和R2adj=0. 9035X). 80,決定系數(shù)越接近1，說明回歸方程的 擬合度越好，可以較好的解釋模型的變化。因此，可用此模型對玉米秸桿預(yù)處理效果進(jìn)行分 析和預(yù)測。
[0026] 響應(yīng)面圖和對應(yīng)的等值線圖，每個3D響應(yīng)面圖表示在其中兩個因素在0水平的條 件下，另外兩個因素對響應(yīng)值還原糖的影響關(guān)系?；陧憫?yīng)面分析，通過軟件模擬尋優(yōu)，當(dāng) 溫度83. 92 °C，反應(yīng)時間6 h，15% (w/w)石灰上清液，液固比13:1時，總還原糖含量達(dá)到最 高，預(yù)測結(jié)果為342. 34 mg/g，與試驗值348. 77 mg/g基本一致，表明優(yōu)化模型具有較高的可 靠性。
[0027] 2.2不同化學(xué)處理對玉米秸桿主要組成成分的影響 不同化學(xué)處理和酶解猜桿中纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的含量見表4。與未處理猜桿相 比，除2和3組外，其它各組中化學(xué)處理后秸桿中纖維素含量顯著提高（尸〈0. 05)，而半纖 維素和木質(zhì)素含量顯著降低（尸〈0.05)，這表明低濃度石灰或氫氧化鈉單獨處理秸桿對木 質(zhì)素去除無顯著作用，其主要作用是潤脹木質(zhì)素及纖維素內(nèi)部結(jié)構(gòu)，緊隨的3% (v/v)雙氧 水處理具有很強(qiáng)的去木質(zhì)素作用。低濃度石灰和氫氧化鈉聯(lián)合處理對木質(zhì)素去除效果顯著 高于單獨處理，這表明石灰和氫氧化鈉聯(lián)合處理具有正效應(yīng)。
[0028] 與未處理酶解秸桿相比，第4組化學(xué)處理酶解秸桿中纖維素、半纖維素和木質(zhì)素 降解率分別提高 31.86% (P〈 0.05)，41.04% (P〈 0.05)和 2.49% (P > 0.05);第 7 組化學(xué)處理酶解秸桿中纖維素、半纖維素和木質(zhì)素降解率分別提高40. 08%(P〈 0.05)， 45. 71%(P〈 0.05)和52. 01% (P〈 0.05)。這表明石灰、氫氧化鈉和雙氧水聯(lián)合處理能提 高木質(zhì)素去除率和酶解糖化率。
[0029] 表4不同化學(xué)處理玉米秸桿主要組成成分（％，干物質(zhì)）
備注：1組：未處理玉米秸桿；2組：15%石灰上層清液；3組：2%氫氧化鈉；4組：15%石 灰上層清液+ 2%氫氧化鈉；5組：15%石灰上層清液+ 3%過氧化氫；6組：2%氫氧化鈉+3% 過氧化氫；7組：15%石灰上層清液+ 2%氫氧化鈉+ 3%過氧化氫；8組：3%過氧化氫。Y1' 表示化學(xué)處理后木質(zhì)纖維素含量；Y2'表示化學(xué)處理加酶解后木質(zhì)纖維素含量。同列標(biāo)大 寫字母相同者差異不顯著（P>〇. 05